胡燕军[1]2001年在《不明原因不孕患者胚胎着床窗口期子宫内膜胰岛素样生长因子-Ⅱ的表达》文中认为不孕症是妇科常见病之一，多数病人经过标准检查程序能明确病因，但仍有近15～20％不孕症妇女找不到确切病因。IVF-ET中虽然卵子受精率较高，但胚胎着床率始终较低。这些现象使人们对不孕症患者着床方面缺陷越来越重视。胚胎着床是一个极其复杂和精细的过程，成功的植入有赖于良好的子宫内膜发育和胚胎质量，同时需要许多种细胞因子、生长因子参与和调节。 不明原因不孕症是指夫妇双方通过不孕检查，仍未找到不孕原因者。近年来，随着围着床期调节因素的研究的深入，发现子宫内膜局部调节因子失衡导致子宫内膜容受性下降可能是不明原因不孕症的病因之一。胰岛素样生长因子（IGFs）是子宫内膜局部介导雌、孕激素促子宫内膜生长、分化的生长因子之一。IGFs具有促进细胞有丝分裂，分化，抑制细胞死亡等生物功能。IGF—ⅠmRNA在子宫内膜增生期表达丰富，而在分泌期表达减少，相反IGF-ⅡmRNA在子宫内膜分泌中晚期和早孕蜕膜中表达增加，推测IGF-Ⅱ促进子宫内膜分化，蜕膜化并参与胚泡着床。IGF-Ⅱ与不孕的关系尚未见报道。 本实验选取18例不明原因不孕患者为实验组，其中原发不孕14例，继发 浙江大学硕士学位论文不孕4例。不孕年限2年一13年，平均3．33土2．72年。15例有生育功能的妇 女为对照组。基础体温升高第6—9天，采血测血清雌h醇（EZ）、孕酮o）浓度：子宫内膜活检冰冻切片驴法免疫组U子宫内膜兀卜H，石蜡切片肛法 免疫组化测子宫内膜孕檄素受体（PR），石蜡切片进行HE染色，用兔疫组化组织积分法（HSCORE）对免疫组化结果进行半定量分析。了解兀F－11蛋白在分泌中期子宫内膜中的表达及与子宫内膜PR、血E。、P的关系，探讨子宫内膜局部调节因子异常在不明原因不孕症发病中的意义，进一步证实IGF H在调节子宫内膜容受性中的意义及其与不明原因不孕症的关系。 结 果1．子宫内膜兀卜11兔疫组化 子宫内膜IGF 11免疫组化阳性定位于胞浆。 工GF－JI免疫组化腺体染色强于间质。对照组工GF－11免疫组化腺体HSCORE值 159．00士42．35，实验组免疫组化腺体HSCORE值125．27土41．91，两者比较 有显着差别k化．“）。对照组间质mm阳值H生5土28．7，实验组间质 HSCORE值107．50土27．83，对照组略高于实验组，但无统计学意义（P＞0．05）。2．于宫内膜PR兔疫组化 子宫内膜PR兔疫组化阳性定位于核。对照组间质 PR免疫组化 HSCORE值 297．33土 70．gS，明显高于实验组，实验组间质 PR免 疫组化HSCOR巳值223．61i84．29（P＜0．05）。而子宫内膜腺体叩免疫组化 HSCORE值65．33 i42．57，为阴性，明显低于实验组，实验组腺体叫兔疫组 化 HSCORE值 136．38士86．58（p（．05）。3．实验组血清巳浓度 469．70土156．79 PffiOI／1，血清 P浓度 42．92i9．58 nmoVI，雌激素／孕激素比值E／P（10－’）12．15土4．18；对照组血清E。浓度 551．67土172．31 pmol／1，血清P浓度46．26士8．72 ＂m01／1，雌檄素／孕激素 比值EN（10一 12．55士5．32。两组黄体中期血雌。孕激素，及雌激素／孕激 浙江大学硕士学位论文 — — 4．子宫内膜 IGF 11免疫组化表达强度与于宫内膜陀及血 E；。P浓度关系 IGF－11兔疫组化腺体和间质HSCORE值与子宫内膜＊腺体和J’司质HSCORE值 及血雌、孕激素浓度之间均无统计学相关关系（…0．05）。5．子宫内膜m染色 对子宫内膜石蜡切片地染色进行病理组织学诊断，未发 现器质性病变。根据Noyes标准进行子宫内膜组织学分期，均诊断为分泌 中期。 结 论1．分泌中期子宫内膜IGF－11兔疫组化阳性表达，阳性定位于细胞浆，腺体表达 略强于间质。2．IGF 11在胚胎着床窗子宫内膜强表达，IG卜 11可能是早期阶段胚泡着床的重 要影响因素之一。3．不明原回不孕患者胚 着床窗子宫内膜IGF－JI表达减少，提示于宫内膜局部 生长因于矢调导致种植窗异常可能是其不孕机制之一。4．不明原因不孕患者胚胎着床窗子宫内膜腺体叩下调失败，间质叩表达减弱 导致子宫内膜容受性下降是其不孕机制之一。
齐燕, 徐向荣[2]2008年在《胰岛素样生长因子-Ⅱ在不明原因不孕患者子宫内膜中的表达》文中进行了进一步梳理目的探讨IGF-Ⅱ在不明原因不孕患者胚胎着床窗口期子宫内膜中的表达及其与不孕的关系。方法通过单克隆抗体SP免疫组化法检测不明原因不孕患者胚胎着床窗口期子宫内膜IGF-Ⅱ的表达。结果子宫内膜IGF-Ⅱ表达定位于胞浆,腺体强于间质。不明原因不孕患者组子宫内膜腺体H-score值142.73±24.85,间质106.03±25.30:对照组腺体H-score值165.70±19.42,间质126.10±21.22。两组间差异显着(p<0.05)。结论胚胎着床窗口期子宫内膜局部IGF-Ⅱ表达下降,可能是引起不明原因不孕的病因之一。
管一春[3]2007年在《白血病抑制因子、同源框基因在多囊卵巢综合征的子宫内膜表达及在睾酮、胰岛素作用的内膜细胞中表达变化》文中研究指明研究背景多囊卵巢综合征(polycystiC ovarian syndrome，PCOS)是一种发病多因性，病理生理和临床表现多态性的内分泌综合征，是导致育龄期妇女不孕的内分泌及代谢紊乱性疾病。PCOS患者以长期无排卵、高雄激素血症(hyperandrogenemia，HA)、胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)和高胰岛素血症(hyperinsulinemia，HI)为基本特征。其病理生理变化涉及范围广，包括遗传、神经内分泌、糖脂代谢和卵巢局部调节因素等的异常变化，至今其病因和发病机制未完全阐明，是妇科内分泌领域研究的热点之一。近来，对PCOS的研究不再局限于病因方面，PCOS患者特征性内分泌和代谢变化对其子宫内膜的复杂影响已构成了PCOS研究领域中的重要组成部分，为提高PCOS患者的妊娠率，降低流产率提供了新的思路。PCOS患者经促排卵治疗后，其排卵障碍可被成功纠正，但最终妊娠率低，而自然流产率却很高。传统观点认为：子宫内膜是卵巢分泌的甾体激素作用的靶器官，但越来越多的证据发现，子宫内膜具有自分泌和旁分泌作用，自身可分泌多种细胞因子，生长因子、蛋白等。PCOS患者特征性内分泌和代谢变化对其子宫内膜发育和对子宫内膜容受性的影响，逐渐受到众多学者的重视。白血病抑制因子(leukemia inhibitor factor，LIF)在人的卵巢和卵泡液、子宫内膜和蜕膜、滋养细胞和输卵管等生殖器官和部位均表达，被认为是与内膜容受性维持密切相关的生化标志之一。子宫内膜的发育和其容受性的建立需要同源框基因的转录调节。同源框基因(homeobox gene，HOX)中HOXA10作为一种多效性的转录因子参与胚胎种植的多个环节，如：子宫内膜的增殖与分化、子宫内膜容受性的建立、胚胎的定位及黏附、胞饮突形成、蜕膜化等，它的持续表达是胚胎着床和成功妊娠所必需的。PCOS患者内膜容受性是否异常，胚胎和内膜间信号传递是否有缺陷?而体内的HA和HI是否是其内膜容受性异常的直接原因?如何选择提高PCOS患者妊娠率，降低其流产率的最佳治疗方案?针对这些问题，国内尚未见报道。目的1．观察不同组织学分期的正常对照和PCOS患者子宫内膜中LIF、HOXA10的表达情况，探讨LIF和HOXA10与PCOS内膜容受性的关系。2．体外培养高分化子宫内膜腺癌细胞(Ishikawa)作为模式，研究不同浓度的睾酮(testosterone，T)、胰岛素(insulin，INS)作用后，细胞LIF、HOXA10的表达情况。探寻高T和高INS对其表达的影响，试图寻找引起PCOS患者内膜容受性异常的原因，为探讨提高PCOS患者妊娠率，降低其流产率的最佳治疗方案提供依据。材料与方法1．组织学研究：(1)病例组：已婚PCOS患者14例，平均年龄(28.14±3.53)岁。(2)对照组：已婚不孕症患者16例(不孕原因为男方因素或输卵管梗阻，拟行体外受精—胚胎移植治疗)，平均年龄(30.86±2.61)岁。PCOS组于月经周期的5-14天和使用氯米芬(clomiphene citrate，CC)／人绝经期促性腺激素(human menopausal gonadotropin，HMG)／人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)方案促捧卵周期的着床窗口期(阴道超声监测确认排卵后7-8天)；对照组于月经周期的5-14天和自然周期的着床窗口期(阴道超声监测确认排卵后7-8天)，均在无菌操作下采集子宫内膜标本。行HE染色证实分期，并采用免疫组织化学染色法(immunohistochemical method)检测LIF、HOXA10表达情况。2．细胞培养：体外培养Ishikawa细胞，分别采用浓度为10~(-8)mol／l、10~(-6)mol／l、10~(-4)mol／Ll的T溶液作用细胞24小时和48小时，使用免疫细胞化学法(immunocytochemical method)检测不同浓度组和不同时间组LIF、HOXA10表达情况，并使用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测各组细胞培养上清液中LIF的水平。分别采用浓度为10IU／l、30IU／l、90IU／l的INS溶液作用细胞24小时，使用ELISA法检测各浓度组细胞培养上清液中LIF的水平。3．统计学分析：实验数据应用SPSS10.0统计软件进行统计分析，以α=0.05作为差异有无统计学意义的检验水准。结果1．研究对象一般情况比较：PCOS组与对照组相比，年龄、体重质量指数(body mass index，BMI)的差异均无统计学意义(t_1=-1.635，P＞0.05；t_2=1.448，P＞0.05)。2．研究对象子宫内膜病理比较：PCOS组间质反应不良和分泌反应欠佳发生率均高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05；P＜0.01)。3．LIF在两组子宫内膜的表达：LIF以腺上皮细胞的胞浆表达为主。LIF在PCOS组增生期和分泌中期子宫内膜的表达水平均低于相应的对照组(P＜0.01)；而LIF在两组分泌中期的子宫内膜的表达水平均高于其增生期(P＜0.01)。4．HOXA10在两组子宫内膜的表达：HOXA10在内膜间质细胞的胞核呈阳性表达。HOXA10在PCOS组增生期和分泌中期子宫内膜的表达水平均低于相应的对照组(P＜0.01)；而HOXA10在两组分泌中期的子宫内膜的表达水平均高于其增生期(P_1＜0.05；P_2＜0.01)。5．LIF与HOXA10的相关性：PCOS组和对照组中，LIF与HOXA10的表达水平均呈正相关(r_1=0.753，P＜0.01；r_2=0.565，P＜0.05)。6．LIF、HOXA10在Ishikawa细胞的表达：LIF在Ishikawa的胞浆呈阳性表达，HOXA10在Ishikawa的胞核呈阳性表达。7．T作用Ishikawa后，对LIF、HOXA10表达的影响：作用时间相同时，除10~(-8) mol／L的T作用组与对照组间LIF表达无差异外(P＞0.05)，余各组间，较低浓度T作用组LIF表达明显高于较高浓度T作用组(P＜0.01)；而作用浓度相同时，T呈时间依赖性抑制LIF的表达(t=7.672，P＜0.01)。同样，T呈浓度和时间依赖的方式抑制HOXA10的表达(F=19.71，P＜0.05；t=9.516，P＜0.01)。且T呈浓度和时间依赖的方式抑制Ishikawa细胞培养上清液中LIF的表达(F=37.379，P＜0.01：t=5.293，P＜0.05)。8．INS作用Ishikawa后，对LIF表达的影响：对照组细胞培养上清液中LIF的表达水平均高于各INS作用组(F=23.70，P＜0.01)；而3组不同浓度的INS作用组间则无差异(P均＞0.05)。结论1．LIF和HOXA10在PCOS组和对照组子宫内膜均呈阳性表达，分泌中期表达强度高于增生期，提示LIF和HOXA10可能是子宫内膜容受性的潜在标志物。2．LIF、HOXA10在PCOS组各期的子宫内膜中均呈低水平表达，可能预示PCOS患者的内膜容受性异常，影响胚胎着床和生长发育。3．T可呈浓度依赖和时间依赖的方式抑制Ishikawa细胞LIF、HOXA10的表达，INS作用的Ishikawa细胞培养上清液中LIF呈低水平表达．均提示PCOS固有的HA和HI可成为影响其内膜容受性的因素之一，造成PCOS患者不良的生殖结局。
李艳萍[4]2007年在《输卵管积水对子宫内膜容受性影响的研究》文中进行了进一步梳理输卵管积水对子宫内膜容受性影响的研究目的:研究输卵管积水对IVF-ET结局的影响;探讨输卵管积水对窗口期子宫内膜组织基因表达谱的改变,筛选出输卵管积水影响子宫内膜容受性的差异基因;并对其中的差异表达基因在子宫内膜的mRNA及蛋白表达水平进行验证,探讨其临床意义。方法:1.统计分析:2003年8月～2005年8月输卵管积水行IVF-ET 143个周期(积水组)及输卵管其它病变无积水行IVF-ET 263个周期(阻塞组),比较两组IVF-ET结局的差异。2.寡核苷酸芯片技术:取输卵管积水、输卵管阻塞不伴积水和正常女性窗口期子宫内膜组织,分别提取组织总RNA、逆转录成cDNA、生物素标记合成cRNA探针,与Affymetrix U133A2.0基因表达谱芯片杂交,用Affymetrix公司的GCOS1.2软件进行数据分析,以SignalLog Ratio≧2或≦-2的数据点为显着性差异表达基因的筛选标准,通过网上数据库查询基因的功能,进行差异表达基因功能分类。3.real-time PCR实验:从上述筛选出的差异表达基因谱中,选择有显着差异表达的骨桥蛋白(OPN)和GdA(又名胎盘蛋白14,PP14)以及与OPN相互结合构成胚胎粘附的整合素β3作为研究指标。采用real-time PCR方法对31例输卵管积水、29例输卵管阻塞不伴积水以及21例正常对照患者窗口期子宫内膜组织中上述叁种基因表达量进行验证。4.免疫组织化学实验:对各组患者子宫内膜中骨桥蛋白(OPN)、整合素β3和GdA相应蛋白表达变化进行免疫组织化学分析验证。SPSS13.0统计软件包进行分析。P＜0.05作为检验水准。结果:1.IVF-ET治疗结局在移植同等质量的胚胎后,输卵管积水组的临床妊娠率32.87%、胚胎着床率18.61%,早期流产率19.15%、异位妊娠率17.02%;输卵管阻塞组临床妊娠率49.8%、胚胎着床率31.87%,早期流产率6.87%、异位妊娠率4.58%。2.DNA微阵列(1)差异表达基因积水组比正常组、阻塞组比正常组、积水组比阻塞组,分别筛选出显着差异表达基因588条、180条和750条,按基因主要功能可分为:酶、细胞粘附分子、细胞骨架蛋白相关基因、细胞周期调节因子、金属离子结合蛋白、信号转导蛋白相关基因、免疫反应相关蛋白、载体蛋白相关基因、功能未知的基因等。(2)积水组比正常组表达差异基因共有588条基因表达有差异,其中表达上调为351条,表达下调为237条。表达上调的和表达下调基因中均以酶活性相关基因最多、其次是信号转导蛋白基因。(3)阻塞组比正常组表达差异基因共有180条基因表达有差异,其中表达上调为106条,表达下调为74条。表达差异基因亦以酶活性相关基因最多、其次是信号转导蛋白基因。(4)积水组比阻塞组表达差异基因共有750条基因表达有差异,其中表达上调为302条,表达下调为448条。表达差异基因除外酶活性相关基因最多的是信号转导蛋白基因。3.Real-time PCR实验:(1)叁组患者窗口期子宫内膜组织中OPN基因的表达差异积水组、阻塞组和对照组患者子宫内膜组织中OPN相对表达量依次为0.6238±0.2690、0.8955±0.3887、和1.1065±0.7821;叁组间两两相比OPN均无明显差异。(2)叁组患者窗口期子宫内膜组织中整合素β3基因的表达差异积水组、阻塞组和对照组患者子宫内膜组织中整合素β3相对表达量依次为0.1945±0.1024、0.8285±0.1945和1.2541±0.5245;积水组与阻塞组相比,积水组与对照组相比有明显差异。(3)叁组患者窗口期子宫内膜组织中GdA基因的表达差异积水组、阻塞组和对照组患者子宫内膜组织中GdA相对表达量依次为2.0815±0.3425、3.1578±0.6712、和4.1257±0.9476;积水组与对照组相比、阻塞组与对照组相比有明显差异。4.免疫组织化学实验:(1)叁组患者窗口期子宫内膜组织中OPN的表达差异OPN定位于子宫内膜腺上皮及腔上皮细胞,基质细胞中无表达或仅极少量表达。叁组相比无显着性差异。(2)叁组患者窗口期子宫内膜组织中整合素β3的表达差异整合素β3定位于子宫内膜腺上皮细胞和(或)腔上皮细胞,基质细胞仅极少量表达。大部分的输卵管积水患者的子宫内膜上整合素β3表达缺失或呈弱阳性。积水组的表达强度显着低于阻塞组及对照组。(3)叁组患者窗口期子宫内膜组织中GdA的表达差异GdA定位于子宫内膜腺上皮及腔上皮细胞,基质细胞中无表达或仅极少量表达。积水组和阻塞组的表达强度较对照组都明显降低。结论:1.输卵管积水患者IVF-ET治疗的临床妊娠率低、早期流产率高;2.输卵管积水对窗口期子宫内膜多种基因的表达产生影响;其中表达差异最大的基因是酶活性相关基因和信号转导蛋白基因。3.输卵管积水和输卵管其他病变不影响窗口期子宫内膜OPN基因的表达、转录及其蛋白质的合成分泌;4.输卵管积水抑制窗口期子宫内膜上整合素β3基因表达、转录及其蛋白合成分泌,降低子宫内膜容受胚胎粘附、着床能力;5.输卵管积水降低窗口期子宫内膜上GdA基因表达、转录及其蛋白质合成分泌,破坏子宫内膜对胚胎的免疫耐受;
刘卉[5]2007年在《体外受精—胚胎移植降调节后的中医证候特点及与子宫内膜容受性的相关性研究》文中研究表明目的:探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)降调节后的证候特点,及证候与子宫内膜容受性的相关性。方法:临床研究对200例行IVF-ET的患者,采用流行病学调查方法,结合聚类分析总结IVF-ET降调节后的中医证候特点;同时应用以药测证的方法,对60例行IVF-ET的患者进行系统的临床观察,其中中药治疗组30例,对照组30例。分别对两组患者中医证候积分变化、子宫内膜血流、优质卵率、受精率、优质胚胎率、妊娠率及临床妊娠率进行评定。实验研究分别采用GnRH-a降调节小鼠模型和GnRH-a超排卵小鼠模型,与正常小鼠及加用二至天癸颗粒小鼠对照,观察对阴道涂片、子宫、卵巢指数、子宫、卵巢组织形态学、血浆cAMP、cGMP含量、子宫内膜HOXA10mRNA表达的影响。结果:聚类分析结果表明IVF-ET降调节后主要表现为肾虚证,以肾阴虚为主,兼有肾阳虚症状。经补肾中药二至天癸颗粒治疗后,可明显改善患者肾虚症状。GnRH-a降调节后,小鼠体重下降;阴道涂片表现动情间期;子宫、卵巢指数下降;子宫内膜厚度明显变薄,腺体显着减少,部分腺体萎缩消失;卵泡层次紊乱,部分卵泡闭锁,部分卵泡细胞坏死,炎细胞浸润,部分间质纤维组织增生;cAMP含量及cAMP/cGMP比值明显升高;HOXA10基因表达下调;二至天癸颗粒可改善上述指标;从微观角度证实其肾虚本质。二至天癸颗粒还可通过改善子宫内膜血流及GnRH-a超排卵小鼠着床期子宫内膜组织形态学指标、提高cAMP含量、上调HOXA10基因发挥改善子宫内膜容受性的作用。结论:体外受精-胚胎移植降调节后主要表现为肾虚证,以肾阴虚为主,补肾中药二至天癸颗粒可提高子宫内膜容受性,表明了肾虚与子宫内膜容受性的相关性。为中医药在IVF-ET的应用提供依据,丰富了中医肾主生殖的理论内涵。
李欢欢, 刘姗, 李媛[6]2016年在《子宫内膜容受性影响因素的研究进展》文中研究指明在辅助生殖技术(ART)中,除胚胎质量外,良好的子宫内膜容受性(ER)成为成功妊娠的必要条件。近年来,ER的影响因素已经成为国内外的研究热点。本文主要从形态学、分子生物学、基因组学等方面综述ER影响因素的研究进展。
肖凤鑫[7]2014年在《补肾中药对IVF薄型子宫内膜种植失败者围着床期IL-1β、LIF时空表达的影响》文中研究表明目的：在体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo Transfer，IVF-ET)中，良好的子宫内膜容受性及优质的胚胎是保证胚胎植入成功的关键条件。在ET日，子宫内膜厚度至少需要大于6mm，这是胚胎成功植入的必要的先决条件，目前薄型子宫内膜已成为辅助生殖发展的瓶颈，提高子宫内膜容受性尤为重要。本课题在前期研究的基础上，进一步探讨补肾中药对于IVF薄型子宫内膜种植失败者围着床期子宫内膜LIF、IL-1β的时序表达影响，揭示补肾中药对子宫内膜容受性的改善机理，依据具体作用时点的变化规律，为临床用药提供参考依据。方法：将研究对象按照标准分为治疗组、对照组，组内随机分为LH+5、LH+6、LH+7、LH+8、LH+95个小组，治疗组患者于取内膜当日始口服二至调经颗粒治疗3个月，口服药的第3个月经周期于相同时相再次吸取内膜，通过免疫组化及RT-PCR技术比较治疗组服药前后及治疗组服药后与对照组之间围着床期子宫内膜IL-1β、LIF时序表达，探讨补肾中药对围着床期两细胞因子的时序表达影响。结果：①治疗组服药前后相比较，在围着床期，子宫内膜腺体与基质IL-1β、LIF的表达比较存在显着性差异（P＜0.05）。②治疗组服药前后相比较，在围着床期，子宫内膜组织IL-1βmRNA、LIFmRNA的表达比较存在显着性差异（P＜0.05）。③治疗组服药前后相比较，在围着床期，子宫内膜基质和腺体IL-1β、LIF时序表达存在显着差异（P＜0.05）。④治疗组经补肾中药治疗后，在围着床期，子宫内膜组织IL-1β、LIF的表达存在一定的变化规律。⑤治疗组服药后与对照组相比较，在围着床期LH+7天，子宫内膜腺体与基质上IL-1β、LIF的表达比较无显着性差异（P＞0.05）。⑥治疗组服药后与对照组相比较，在围着床期LH+7天，子宫内膜组织IL-1βmRNA、LIFmRNA的表达比较无显着性差异（P＞0.05）。结论：①整体比较，薄型子宫内膜种植失败者IL-1β、LIF在内膜上的表达，服药后较服药前表达增强；②与对照组相比较，于LH+7天，补肾中药更加显着的改善了子宫内膜容受性；③补肾中药改善了子宫内膜容受性，这可能是提高临床妊娠率的原因之一。
丁彩飞, 郑若姮, 鲍严钟[8]2008年在《原因不明不孕症患者子宫内膜容受性研究进展》文中认为近年来随着不孕患者的日渐增多,出现了一部分原因不明的不孕症。对这部分患者深入研究后发现,胚胎着床过程中,子宫内膜一些细胞表面结构也随着着床的进行发生一系列变化,同时与白血病抑制因子(LIF),胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)及其受体mRNA水平,基质金属蛋白酶9(MMP-9)、整合素ανβ3,Lewisy寡糖抗原的表达,以及血清中微量元素水平都有相关性。对其研究将为进一步研究原因不明不孕症提供依据。
贡欣[9]2014年在《补肾活血法改善子宫内膜容受性的分子作用机制研究》文中研究指明目的：不孕症是育龄妇女的多发病及疑难病,辅助生育技术(ART)为不孕症夫妇带来了希望。目前制约ART发展的主要瓶颈是子宫内膜容受性下降导致临床妊娠率持续在低水平徘徊。针对这一现状,我们在中医“肾主生殖”的经典理论指导下,从补肾活血法的角度出发指导临床用药。经过多年的临床实践,使中药改善子宫内膜容受性的临床疗效逐渐得到西医同道的认同。方法：由于伦理和实际操作等因素,在体研究子宫内膜容受性是很难实际开展的,本课题通过动物实验、细胞实验和临床试验,在客观评价补肾活血法改善子宫内膜容受性疗效的基础上,系统分析其内在分子作用机制,并从实验指导临床的角度出发进一步验证其临床治疗机制与途径。动物实验方面：通过复制大鼠超促排卵模型,以补肾活血方分别干预未孕及妊娠大鼠,分析子宫内膜形态、血管、子宫容受性分子标志物的改变；细胞实验方面：根据文献检索发现uNK细胞的数量受月经周期控制,在增殖期子宫内膜中很少,分泌早期(LH+3)开始大量增殖,分泌中晚期及早孕期间数量最多,可达蜕膜淋巴细胞总数的70%,uNK细胞所分泌的细胞因子、生长因子在螺旋动脉重构、胚泡着床及母胎界面免疫耐受中发挥着重要作用。另外,uNK细胞缺陷小鼠模型的胚胎丢失率高达64%,uNK细胞缺失或表型改变直接导致病理性妊娠发生甚至妊娠失败。由此本课题基于uNK细胞与子宫内膜上皮细胞以及间质／上皮细胞叁维立体培养的旁分泌系统,应用基因芯片技术研究明确中药补肾活血方在此生理过程中的影响作用。临床试验方面：以东方医院生殖科IVF失败患者为研究对象,运用中药补肾活血方进行对症治疗,通过对比治疗前后患者的月经量、Salle评分、中医证候评分改善情况、超声评价指标(如：子宫内膜厚度、子宫内膜形态、子宫内膜及内膜下血流)及妊娠率评价临床疗效。结果：补肾活血方可改善未孕超促排卵大鼠模型子宫内膜MVD和LIF表达,其治疗机制可能是增加了子宫内膜的厚度、调节血管生成和调节子宫内膜容受性的相关因子；中药补肾活血方可改善超促排卵大鼠围种植期子宫内膜MVD及血管生成相关因子VEGF和OPN的表达,从而降低COH的负面作用,改善子宫内环境提高妊娠率。尽管Ang-2与胚胎血管生成有密切的关系,但此次试验我们并未发现Ang-2因子的表达与子宫内膜容受性的相关性。可能由于在妊娠早期(D3-D5天),Ang-2因子并不是早期胚胎血管生成所必须的相关因子,由此我们也推论胚胎种植前期与胚胎种植后期的血管生成参与因子有明显的不同与差异；我们实验首次验证了子宫内膜uNK细胞与上皮细胞的旁分泌关系,证实了uNK细胞对子宫上皮细胞的旁分泌作用可以促进uNK细胞自身的增殖,同时促进子宫内膜容受性而保证早期胚胎稳定着床、生长和发育的功能,但实验并不支持中药补肾活血方在此生理过程中产生相应的促进或抑制的作用；uNK细胞对子宫上皮细胞及子宫间质细胞／上皮细胞共培养体系的旁分泌作用可以促进uNK细胞自身的增殖,同时促进子宫内膜容受性而保证早期的妊娠稳定,正是由于uNK细胞的旁分泌作用,促进了uNK细胞的增殖,胚胎和滋养层细胞的迁移和子宫内膜的蜕膜化、血管生成化,以及子宫内膜微环境的免疫保护。而uNK+中药组较uNK组可明显上调CXCL9、CCL8、TAP1、CXCR2、VEGF-C、MHC class I polypeptide-related sequence A、 MHC class I polypeptide-related sequence B和ICAM1等重要因子的表达,从而达到提高胚胎移植率和子宫内膜容受性的治疗作用。临床试验部分运用中西结合,辨证与辨病相结合,借助西医检测手段,寻求病因,自拟补肾活血方,以IVF失败的不孕症患者为研究对象,通过治疗前后对比发现患者子宫内膜厚度、子宫内膜形态、子宫内膜及内膜下血流、妊娠率均有明显改善和提高。结论：补肾活血法可以改善子宫内膜容受性,其途径可能是通过uNK旁分泌系统。另外,补肾活血方可通过改善子宫内膜厚度、形态、内膜局部血流来提高肾虚血瘀型患者的症状,从而增高患者的IVF成功率。
朱桂杰[10]2013年在《坤泰胶囊对小鼠种植窗期子宫内膜LIF、整合素β3和HOXA10表达的影响》文中提出背景及目的随着不孕症患病率的逐年增加,人类辅助生殖技术(assisted reproductive technology, ART)应运而生,为临床治疗不孕症开辟了新的领域,给不孕症患者带来了新的希望。ART虽然经过叁十余年的发展,但目前仍存在受精率高而妊娠率低的现象。有研究发现,体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET)术治疗失败的患者中约有2/3是由于子宫内膜容受性下降导致的,因此为了达到高胚胎着床率和高妊娠率的目的,提高子宫内膜容受性是必需的。子宫内膜容受性(endometrial receptivity)是指子宫内膜对胚胎的接受能力。正常情况下,胚胎要想在子宫内膜中成功种植,只有在一个特定的时间窗内完成,这一时期被称为“种植窗期(implantation window)"或“着床窗期(nidation window)",即人正常月经周期的20-24d,小鼠妊娠后4d,此时子宫内膜对胚胎的接受能力达到最大。目前的研究发现有多种调控因子参与胚胎的着床过程,其中最具代表性的是白血病抑制因子(leukaemia inhibitory factor, LIF)、整合素β3(integrinβ3)、同源框基因A10(homeobox A10, HOXA10),其表达高峰出现的时间与子宫内膜着床窗开放的时间相一致,并且它们的表达减弱、缺失或突变均可能导致不孕,因此被认为是检测子宫内膜容受性的标志性分子。超排卵和控制性超排卵(controlled ovarian hyperstimulation, COH)是ART治疗中的重要步骤,但多项研究表明其可降低子宫内膜容受性,导致胚胎着床障碍。如何改善子宫内膜容受性从而提高ART治疗的周期妊娠率成为生殖医学领域亟待解决的问题。近年来多位学者致力于提高子宫内膜容受性的药物研究,国内外主要集中在雌激素、小剂量阿司匹林、生长激素和中药方剂等方面,但目前这些药物的应用还不能形成完全理想的子宫内膜环境,并且雌激素和阿司匹林的安全性受到质疑,生长激素的价格昂贵,中药方剂有服用不方便、病人依从性差等缺点,因此急需寻找到一种安全有效、服用方便、价格相对低廉的药物来改善子宫内膜容受性。本研究即在此背景下,选取小鼠为研究对象,采用免疫组化SP法观察坤泰胶囊对自然周期、超排卵周期和COH周期小鼠着床期子宫内膜容受性相关因子LIF、整合素β3及HOXA10表达水平的影响,探讨其对改善子宫内膜容受性的作用及可能的机制,旨在为临床改善子宫内膜容受性提供一种新的用药选择和理论依据。材料与方法将连续观察2个动情周期均正常的雌性小鼠随机分为6组(每组15只)：对照组[生理盐水(NS)组(A组)],NS+坤泰胶囊组(B组),超排卵组(C组),超排卵+坤泰胶囊组(D组),控制性超排卵(COH)组(E组),COH+坤泰胶囊组(F组)。参考有关文献,建立动物模型。各组小鼠均于妊娠第4天处死,用免疫组化SP法检测子宫内膜中LIF、整合素β3和HOXA10蛋白的表达定位并进行半定量分析,所有数据均采用统计软件SPSS17.0进行分析,两组定量资料的比较采用两独立样本t检验；多组定量资料的比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验；P<0.05为差异有统计学意义。结果1、LIF蛋白和整合素β3蛋白的表达均主要定位在子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞的胞浆,间质细胞的胞浆少量表达。HOXA10蛋白在腔上皮、腺上皮和间质细胞的胞浆中均有表达。2、小鼠着床期子宫内膜中LIF、整合素β3、HOXA10蛋白在NS+坤泰胶囊组中的表达均高于对照组(P均<0.05),在超排卵+坤泰胶囊组中的表达均高于超排卵组(P均<0.001),在COH+坤泰胶囊组中的表达均高于COH组(P均<0.001)。3、对照组小鼠着床期子宫内膜中LIF、整合素β3、HOXA10蛋白的表达均显着高于超排卵组(P均<0.001)和COH组(P均<0.001),且叁者在COH组中的表达也明显高于超排卵组(P均<0.05)。4、对照组小鼠着床期子宫内膜中LIF、整合素β3、HOXA10蛋白的表达量仍明显高于超排卵+坤泰胶囊组(P均<0.001)和COH+坤泰胶囊组(P均<0.01),且LIF、整合素β3在COH+坤泰胶囊组中的表达也明显高于超排卵+坤泰胶囊组(P均<0.01)。结论1、LIF、整合素β3、HOXA10蛋白在着床窗期子宫内膜中呈阳性表达,是评价子宫内膜容受性的标志性分子。2、超排卵和控制性超排卵治疗均可降低子宫内膜容受性,且超排卵比控制性超排卵对子宫内膜容受性的负面影响更大。3、坤泰胶囊可部分改善自然周期、超排卵周期和控制性超排卵周期小鼠子宫内膜容受性。
参考文献：
[1]. 不明原因不孕患者胚胎着床窗口期子宫内膜胰岛素样生长因子-Ⅱ的表达[D]. 胡燕军. 浙江大学. 2001
[2]. 胰岛素样生长因子-Ⅱ在不明原因不孕患者子宫内膜中的表达[J]. 齐燕, 徐向荣. 浙江预防医学. 2008
[3]. 白血病抑制因子、同源框基因在多囊卵巢综合征的子宫内膜表达及在睾酮、胰岛素作用的内膜细胞中表达变化[D]. 管一春. 郑州大学. 2007
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[7]. 补肾中药对IVF薄型子宫内膜种植失败者围着床期IL-1β、LIF时空表达的影响[D]. 肖凤鑫. 山东中医药大学. 2014
[8]. 原因不明不孕症患者子宫内膜容受性研究进展[J]. 丁彩飞, 郑若姮, 鲍严钟. 国际妇产科学杂志. 2008
[9]. 补肾活血法改善子宫内膜容受性的分子作用机制研究[D]. 贡欣. 北京中医药大学. 2014
[10]. 坤泰胶囊对小鼠种植窗期子宫内膜LIF、整合素β3和HOXA10表达的影响[D]. 朱桂杰. 郑州大学. 2013
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