吴昀[1]2016年在《基于离体模式体系的百合小鳞茎发生发育机制研究》文中认为球根花卉,也称为观赏地下芽植物(Ornamental geophytes),在全球花卉产业中占据重要地位,可应用于切花、盆花及庭院用花。然而,因种球较低的自然繁殖率及较长的童龄期,导致球根花卉新品种育种周期较长,例如,百合约12～15年,郁金香则需20～30年。鳞茎等必须大于某一临界大小时才能满足植株开花的要求,且大球常意味着更高的开花品质。因此,如何加速育种周期,缩短"童龄期"(即幼年鳞茎到成年鳞茎的时间),形成高品质开花球,解决其发生发育问题尤为重要,这对加快育种周期,推动我国球根花卉种球国产化具重要意义。本文以百合(Lilium)为试材,在构建浙江省野生百合离体快繁体系基础上,建立了以东方百合'索邦'(L.Oriental Hybrids 'Sorbonne')为主要研究对象的离体模式研究体系,采用外源植物生长添加物质系统研究了鳞茎发育生理生化机制,同时建立了外源正负向调控转录组及表达谱数据库,并克隆了 一个淀粉合成代谢关键基因LohAGPS1,最后探讨了一种可用于鳞茎发育生物学研究的天然突变体巨球百合(L.brownii.E.Brown ex Miellez var.giganteum G.Y.Li&Z.H.Chen),主要研究结果如下:1.百合属植物组织培养及东方百合'索邦'离体研究模型建立(1)湖州百合(L.lancifolium Thunb)鳞片经4℃冷藏2周后置于200～300 mg/L甲基托布津中震荡0.3～1 h,70～75%酒精中浸泡20～30 s,再浸入含1～2滴吐温-20,质量体积浓度为0.1%～0.2%。升汞中15～25 min,通过甲基托布津-酒精-升汞叁步消毒法建立无菌体系,污染率为24.23%,死亡率为19.14%。鳞片的最佳诱导培养基为MS+ 6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L,平均诱导率为54.55%,可获得4.8个不定芽;出芽后,转移到增殖培养基(6-BA1.5mg/L + NAA0.1mg/L)进行增殖培养,获得丛生芽,增殖系数为265%。(2)药百合(L.speciosum Thunb.var.gloriosoide.s Baker)种子萌发最佳培养基为 MS+ 6-BA1.0mg/L + NAA0.1mg/L,萌发率为83.3%,诱导率为88.9%,平均诱导不定芽数达2.5个;92%以上种子属于子叶出土型;未经剥皮处理的种子在任何培养基上都无法萌动;未剥皮处理污染率为5%,而剥皮处理低至0;种子萌发试管苗染色体倍性为2n=2x=24,未发生遗传变异。(3)以材料易获得,研究较多的东方百合'索邦'为试材,2%NaClO处理鳞片6min,污染率为0,死亡率为15.2%;最佳诱导培养基为MS + 6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,平均诱导率为57.6%且平均诱导芽数为6.9个。随后,将材料放于仅含70 g/L蔗糖及8 g/L琼脂的MS基本培养基进行增殖壮球培养,直至获得足量并来自同一母体材料、生理生化状态一致性高的离体小鳞茎。取直径5～8 mm离体小鳞茎接种于上述最佳诱导培养基上,培养35 d获得大量芽,筛选芽长1～2 cm,基部直径3～5 mm的单芽用于后续试验,从而建立了发育生物学问题研究的离体模式体系,具均一性强,可控等优势。芽诱导过程可分为细胞脱分化阶段、生长锥形成阶段、叶原基形成阶段及芽形成阶段,这是关于离体芽诱导过程的首次完整报道。芽的形成为外起源,成熟鳞片中维管束平行分布于薄壁细胞中,并于鳞片尖端汇合,其维管束类型为有限维管束。在芽形成过程中,细胞中淀粉运输方向大致为从顶部至基部,从鳞片外侧向内侧,循环往复,以供应鳞片基部近轴端新芽形成所需的物质与能量。2.外源添加物质对'索邦'离体百合发育的影响及其生理生化机制(1)在离体条件下,外源PBZ处理对植株地上部分及根产生抑制,且浓度越高,抑制效果越明显,当浓度为5×10-2mM时,叶片数接近0,根数仅1.3。相应地,随PBZ浓度升高,相对鳞茎重量显着升高,最高达100%。LPBZ处理下,其鳞茎鲜重及直径最佳,75 DAT时,分别为396 mg及10.7 mm,为对照的2.5倍及1.6倍,相对鳞茎重量在69.86～85.38%间,地上及地下部分均衡生长,在培养基中营养消耗殆尽时,仍可保证叶片光合产物向鳞茎的运输。PBZ处理可促进小鳞茎中碳水化合物积累,处理浓度越高,积累效应越明显。多效唑对淀粉合成的促进作用一方面是由于GBSS酶活性的增加,从而导致直链淀粉的合成,另一方面则是在碳饥饿时(60 DAT),有效增强淀粉合成相关酶活性,其中,LPBZ下AGPase在整个发育期活性较高,表明ADPG底物供应充足。外源PBZ处理在膨大初期促进IAA含量,暗示PBZ有利于发育早期细胞的分裂与膨大。抗氧化酶体系中APX,CAT及GR高活性可能和清除15 DAT前用于松弛及软化细胞产生的ROS,确保有机体内ROS维持在低水平、稳定平衡的生理含量。(2)外源HA处理(0.2 mg/L～20 mg/L)可显着提高离体小鳞茎的鲜重,其重量最终分为对照的2.9倍,1.8倍及1.8倍,且低浓度效果最佳,在75 DAT时鳞茎鲜重为468 mg,鳞茎直径为11.68 mm,鳞茎大小为933.17 mm3。中高浓度HA处理对于植株地上部分(包括株高及叶片数)促进作用明显,但抑制根生长,LHA则利于根发育,根数最多为14.5,根长最长达5.75 cm。随着HA处理浓度升高,相对鳞茎重量逐渐降低,从而打破库-源平衡。HA可促进百合小鳞茎蔗糖、可溶性糖及淀粉等含量,且浓度越高,促进作用越明显。LHA处理下关键淀粉合成酶活性较高,而中高浓度HA处理下则在30 DAT时出现增高,且以AGPase及SSS为主,表明淀粉积累主要来自于支链淀粉合成。腐植酸处理并不能增加 iPA,ZR,ABA及IAA等鳞茎发育促进型激素的水平。然而,LHA处理下其GA含量显着低于其它处理,提高了整个鳞茎膨大过程中促进型激素/抑制型激素的比值,利于光合产物从芽向地下库器官转运。与之相反地,中高浓度处理下HA赤霉素水平高,这可能与其旺盛的地上部分生长相关。LHA处理还显着提高了 SOD,POD,APX,CAT及GR在发育早期活性,其可能用于清除活性氧以保持细胞稳定。(3)外源CPPU处理对于'索邦'百合试管鳞茎形成影响差异明显,结鳞茎率随处理浓度上升而下降,当浓度为5×10-2mM时,结鳞茎率为0%,此时,形成基部肿胀无鳞片且相对幼嫩的类芽假鳞茎。在中低浓度下CPPU处理可促进地上部株高及叶片生长,而高浓度则不利于其生长,所有CPPU处理均表现出对根系的抑制效应。CPPU处理可通过增强鳞茎对光合产物的竞争能力,从而同化物从叶片中的输出率及在鳞茎中的分配率均增多,即增加库强,因而鳞茎中蔗糖等可溶性总糖含量随CPPU处理浓度上升而升高,然而HCPPU由于叶片畸形较少进行光合作用,积累偏低。CPPU总体上可促进淀粉合成关键酶AGPase,GBSS及SSS等活性,但淀粉含量却显着低于对照,推测是由于CPPU在促进鳞茎淀粉合成同时促进了小颗粒淀粉的降解,其中HCPPU整个发育过程淀粉平均含量为52.37 mg/g FW。CPPU处理减少了鳞茎发育过程中内源CTKs水平,而对于ABA及IAA有促进效果,且IAA含量与CPPU处理浓度呈线性关系。HCPPU处理下ABA/GA及IAA/GA的比值在发育过程中前者不断升高而后者不断下降,同时,其峰值在所有处理中最高,暗示其特殊的生理状态,并可能与鳞茎无法成球直接或间接相关。CPPU处理总体上促进抗氧化体系相关酶活性,在45 DAT时,对于HCPPU,所有的激素及几乎所有抗氧化酶均出现峰值,这是否为HCPPU前期30%鳞茎形成率而终期鳞茎形成率为0%的转折点,还需进一步研究。(4)以最佳促进型处理LHA(0.2mg/L)、LPBZ(5×10-4mM)为标准,去除培养基中蔗糖,比较不添加蔗糖的最佳外源处理是否仍起作用。结果表明,HA及PBZ可部分表现其特性,如PBZ的株控作用,HA对叶片及根系的促进作用。LHA-SF叶片数达15.5,而LPBZ-SF则为4.2,对照为9.7,分别为添加蔗糖处理的4.85、1.75及4.43倍;叁者相对鳞茎鲜重平均值仅为50.32%,而添加蔗糖处理则高达75.97%;处理60天时,LHA-SF及LpBZ-SF鳞茎鲜重分别仅为88 mg及82 mg。以上结果表明,蔗糖的添加对于离体条件下鳞茎发育必不可少,地上部分过旺生长及根系的不良发育是外在原因,引发源库失衡,而蔗糖则可能同时起了碳源及信号分子作用,调控百合植株光合产物流的方向及相关代谢途径。3.离体小鳞茎发生发育的分子调控路径及关键基因挖掘分析(1)基于Illumina HiSeq2000测序平台采用RNA-Seq首次报道了百合离体条件下的转录组背景信息。拼接获得64,794条unigene,平均长度为776 bp,序列总大小约50 Mb,约占百合全基因组的0.14%。利用公共数据库共注释33,255个unigene,约占所有转录本的51.32%。采用MISA软件共检测到2,732条潜在SSR位点,并以叁核苷酸重复基元序列最多。在KEGG途径中,重点分析了碳水化合物及激素代谢路径,表明其在鳞茎发育中可能发挥的重要作用。。bHLH及ERFs转录因子家族对鳞茎的发生及发育可能较为关键。此外,LHCb转录本的高表达暗示鳞茎可能也参与光合作用,故因重新审视离体百合库-源关系。(2)以HCPPU(不结鳞茎型)、LPBZ(鳞茎促进型)及对照(正常结鳞茎型)建立叁个转录谱文库,共获得3,663个差异表达基因,包括6种表达模式和聚类。光合作用中捕光色素蛋白复合体LHCB6、LHCA4在CON、LPBZ高表达而早期光诱导蛋白(ELIPs)在HCPPU中表达量高。与生长素相关的AVP1基因及谷胱甘肽s-转移酶GST在鳞茎形成类型中高表达,而生长素早期响应蛋白CH3、茉莉酸途径的转录抑制因子JAZ可能与HCPPU鳞茎形成失败相关;细胞分裂素氧化酶CKX在HCPPU中大量特异性表达,暗示细胞分裂素很可能是重要原因之一,而又以玉米素ZT为最关键的CTKs。氧化还原过程及氧化应激过程则很有可能参与调控鳞茎发生发育中抗氧化酶清除活性氧的过程。蔗糖合酶SUS3在HCPPU中相比LPBZ表达量更高,暗示碳水化合物(尤其是淀粉)积累不足是HCPPU鳞茎无法形成的直接体现。(3)改良CTAB法最适于百合离体小鳞茎RNA的提取,样品质量可满足后续基因克隆等试验。通过RACE技术,首次报道了全长l,929bp的东方百合'索邦'LohAGPS1(GenBank登录号:KX398951),其中开放阅读框l,569 bp,编码522个氨基酸;所编码的氨基酸序列包含底物ATP结合位点,催化位点,底物G-1-P结合位点,激活因子3-PGA结合位点等保守结构域。4.巨球百合——可能用于鳞茎发育研究的天然突变体使用0.1%HgCl2处理巨球百合鳞片8min,污染率为40.00%。当培养基中含1.5mg/L 6-BA及0.5 mg/LNAA时,芽诱导效果较佳,诱导率为100.00%,平均诱导芽数为5.0个,芽健壮。巨球百合铁的含量为5.84mg/100g,硒元素含量高达0.014μg/kg,为卷丹百合的2.92倍,显示出较高的食用价值,甚至可考虑作为设计功能性食品(保健食品)的原料。巨球百合具鳞茎巨大的特点,作为天然突变体可用于挖掘控制鳞茎发育的相关调控基因。
王华宇[2]2007年在《中国石蒜种子特性和原生鳞茎形成的初步研究》文中研究表明石蒜属(Lycoris)植物是优良的观赏植物和重要的药用植物。全世界有20余种,其中我国具有丰富的野生资源,有15种之多。此前,已有很多学者对石蒜属植物做了研究,研究领域涉及育种、系统进化、生长发育、繁殖栽培技术和资源开发利用等方面。但对于石蒜属植物的种子特性和原生鳞茎形成方面,至今仍没有报道。本论文主要以石蒜属植物——中国石蒜(Lycoris.chinensis)为材料,对中国石蒜种子的相关特性、原生鳞茎形成的形态解剖学观察、原生鳞茎形成的生理学和中国石蒜离体小鳞茎发生等方面做了初步研究,研究内容和结果有以下几个方面:(1)中国石蒜种子特性的相关研究。种子千粒重较大,比重略大于水,种子具有较高的生活力和含水量,但在贮藏过程中易失水从而失去生活力,为不耐贮藏的顽拗性种子。种子含有较高的可溶性糖含量和淀粉含量,而蛋白质和脂肪的含量较低。种子具有丰富的胚乳,胚呈棒状,具有明显的极性。子叶是胚的重要组成部分,在原生鳞茎形成过程中也具有重要作用,可以分为吸器、子叶联结和子叶鞘。(2)中国石蒜原生鳞茎形成的研究。种子萌发前,约有30～40天的休眠期。中国石蒜的种子萌发方式不同于一般的胚轴伸长,而主要是靠子叶的伸长把胚芽、胚轴和胚根推出种皮。这种萌发方式类似于洋葱的种子萌发,属于子叶出土类型。原生鳞茎形成过程,根据形态学和细胞学变化,可以分为4个阶段:子叶伸长期、第一真叶形成期、第一真叶伸长期和休眠期。(3)中国石蒜原生鳞茎形成过程中代谢方面的研究。可溶性糖和可溶性蛋白质含量在原生鳞茎形成过程中,总体上呈现出前期含量较高后期较低的趋势。而淀粉含量的变化与之相反,发现淀粉以晶体的状态存在。原生鳞茎形成过程中出现了两次代谢库的转移。子叶的各个部分在营养物质的利用方面具有重要作用。(4)中国石蒜离体小鳞茎发生的初步研究。发现采用带基盘鳞茎为外植体,以MS为基本培养基,NAA0.1 mg/L+ 6-BA5.0mg/L能比较好的诱导中国石蒜小鳞茎的发生。小鳞茎产生于两鳞片之间的基部。接种一个月左右,在两片鳞片间从内层鳞片的基部有白色米粒状突起发生,并逐渐分化为瓣状,进而分化成离体鳞茎的鳞片。约2个月左右,有1～2片幼叶的小鳞茎形成。
邓柳红[3]2001年在《百合离体鳞茎形成的研究》文中研究说明在试管培养条件下，以百合鳞茎的鳞片作外植体可以形成若干小鳞茎，然后小鳞茎形成试管苗，继续培养后试管苗又发育出小鳞茎。本文研究了影响鳞片小鳞茎发生和从试管苗形成小鳞茎的因素，特别是研究了JA的作用。 百合不同品种形成小鳞茎的能力不同，而且同一品种的鳞茎不同部位形成小鳞茎的能力也不同。外中部鳞片小鳞茎形成率高，内部鳞片小鳞茎形成率低，再生小鳞茎的出现部位主要位于鳞片基部。 筛选出适于百合组织培养的培养基。在附加不同激素(?)(?)及其配比的MS培养基上培养，兰州百合以MS+0.5mg/L BA+0.1mg/L NAA+3％蔗糖和MS+0.5mg/L BA+0.5mg/L NAA+30%蔗糖等两个培养基表现最好。 茉莉酸（JA）在10～200mg/L范围内能抑制百合鳞片的小鳞茎发生，JA浓度越大，抑制作用越大。我们推测：鳞片小鳞茎的发生可看作是休眠的打破，而JA的这种抑制作用可能是由于它促进鳞片的休眠。 JA对百合试管苗小鳞茎的形成膨大起促进作用，有效浓度为0.05～50mg/L JA，最佳浓度是0.1～2.5mg/L JA。在最佳浓度下培养，小鳞茎鲜重可达835mg～1022mg，分别为对照（CK）鲜重476mg的175.4～214.7％。我们推测：这可能是因为JA抑制试管苗生长，使植株转向形成繁殖器官的结果。同时，JA影响碳水化合物转移，促进小鳞茎的养分积累。 光学显微镜观察外植体（鳞片）的小鳞茎形成和试管苗的小鳞茎形成。
庄晓英[4]2005年在《中国水仙遗传转化及离体诱变体系的研究》文中指出中国水仙(Narcissus Tazetta L. var. chinensis Roem)隶属石蒜科水仙属,多年生草本植物,是多花水仙的一个变种。水仙是我国十大传统名花之一,在我国主要分布在福建漳州,上海崇明,浙江舟山等地,以漳州水仙最负盛名。但由于中国水仙繁殖速度慢,品种单一,且退化严重,不能满足市场需求,严重限制了中国水仙的进一步发展。所以对水仙品种的改良迫在眉睫。 本研究以中国水仙为材料,在建立高效再生体系的基础上,初步建立了中国水仙的遗传转化体系和离体辐射诱变体系,为建立水仙品种改良技术体系提供研究基础。主要研究结果如下: 1.采用55～60℃的无菌热水处理2min不仅可以使污染率降低到5%以下,而且有效防止了组培过程中的褐化,使外植体的分化率和增殖系数大大提高;不同来源的外植体分化能力不同,冷处理40d的水仙鳞茎的鳞茎盘是组织培养的首选材料,冷处理不仅可以提高鳞茎盘的分化率,而且缩短了分化所需时间。 2.适合带鳞片叶的鳞茎盘丛生芽诱导的诱导培养基为MS+BAP 10mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L,分化培养基MS+BAP 5mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖40g/L,分化率达100%,增殖培养基为MS+BAP 5mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖40g/L,适合丛生芽成苗的培养基是MS+BAP3mg/L+NAA 0.2mg/L+PP_(333) 5～10 mg/L+蔗糖30g/L,适合生根的培养基是MS+NAA 0.1mg/L+蔗糖15g/L,生根率达100%;从鳞茎盘和鳞片叶均可以诱导得到愈伤组织,适合鳞茎盘愈伤组织诱导的培养基为MS+BAP 10mg/L+2,4-D 0.5mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L,愈伤诱导率和分化率都达到100%,适合鳞片叶愈伤组织诱导的培养基为MS+BAP 10mg/L+NAA 1.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L+蔗糖40g/L。 3.冷处理降低了水仙鳞茎的总糖、蔗糖以及淀粉含量,还原糖和可溶性蛋白含量显着升高,POD、CAT活性也显着升高,这些生理变化可能与冷处理后的鳞茎盘分化所需时间缩短与分化能力增强有关;处于分化不同时期的鳞茎盘的抗氧化酶活性以及可溶性蛋白含量随培养时间的延长,均表现为先升高后降低的变化趋势,在接种后6～10d达到峰值,与鳞茎盘分化过程中的细胞学观察结果相结合,可以初步确认抗氧化酶活性和可溶性蛋白含量的规律性变化,与鳞茎盘的分化相关。 4.探讨了5种抗生素对中国水仙离体培养反应的影响:用转化pBI 1301空载体的农杆菌转化预培养7d的带鳞片叶的鳞茎盘,建立了较完善的中国水仙的遗传转化体系。在3种抑菌抗生素中,200mg/L头孢霉素的抑菌效果最好,且对外植体的分化率和增殖系数影响不大;外植体对潮霉素的反应比卡那霉素反应敏感,35mg/L的潮霉素即可使未经转化的外植体完全不分化;对经转化后恢复培养3d的外植体进行GUS染色,瞬时表达水平达到100%。 5.接种7d的鳞茎盘最适合作为水仙离体诱变的材料,其致死剂量为50～60Gy,半致死剂量15～20Gy,最适合水仙辐射诱变;试管小鳞茎致死剂量为50Gy,半致死剂量为25Gy:部分
肖玉菲, 玉志鹏, 陈博雯, 覃子海, 晏巢[5]2016年在《2种百合科植物离体鳞茎诱导》文中研究指明以大百合(Cardiocrinum giganteum)和龙牙百合(Lilium brownii)作为实验材料,采用组织培养技术,研究不同鳞片部位、激素组合和培养基类型对其鳞茎诱导的影响,以探究2种植物最佳的鳞茎诱导方案。结果表明:大百合作为外植体的最佳材料来源为中层鳞片的近鳞茎盘部位,最佳诱导培养基为:MS+BA 5.0mg/L+NAA 0.1 mg/L+ZT 0.08 mg/L;龙牙百合作为外植体的最佳材料来源为中层鳞片,最佳诱导培养基为改良MS+BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+ZT 0.01 mg/L。
陈菁珏[6]2012年在《石蒜离体再生体系优化及花器官愈伤组织诱导初探》文中认为石蒜属(Lycoris)植物是原产我国的多年生球根花卉资源。石蒜花色艳丽,花姿婀娜,具有极高的观赏价值。但由于石蒜鳞茎发育周期长、自然繁殖率低等限制因素,石蒜自然成球量无法满足产业化需求,而组织培养方式则是解决该问题一条有效途径。我国对石蒜属植物组织培养的研究已近20年,但研究成果仍未得到商业化运用,究其原因有叁：褐化率、污染率高,鳞茎增殖率低。鉴于此,本研究认为有必要在前人研究的基础上对石蒜离体再生体系作进一步优化,同时探索不同外植体的再生效果,以丰富离体再生途径。本文通过比较石蒜鳞茎不同部位物理、化学方法的消毒效果,以确定降低石蒜初代污染率的材料及消毒方法；通过施用不同浓度的激素处理诱导不定芽,并促使芽增殖,以获得提高不定芽增殖的最佳激素浓度条件；为优化初代培养条件,试验研究了向培养基中添加防褐化剂后的鳞片褐化情况,并从生理、生化角度探讨了与褐化相关的物质、酶活性变化规律；同时,本试验首次以石蒜花器官为外植体,尝试通过愈伤组织途径实现离体再生,并通过SEM, TEM技术对诱导出的愈伤组织进行观察和分类。本试验优化了不定芽诱导和增殖培养条件,为石蒜离体再生体系的建立提供实验依据。并通过花器官诱导愈伤组织,为石蒜离体再生途径的拓展与转基因研究提供理论依据。主要研究结果如下：1、石蒜不定芽诱导条件采用石蒜鳞片不同部位作外植体,在MS+BA4.0mg/L, NAA2.0mg/L与BA8.0mg/L, NAA1.0mg/L的培养基组合中获不定芽最高诱导率为35%。2、石蒜不定芽增殖培养条件以丛生不定芽为外植体,在MS+BA8.0mg/L与NAA2.0mg/L的激素组合中不定芽增殖率最高,达550.00%。9种激素配比实验结果表明,NAA在0.2、1.0、2.0mg/L的浓度下,芽增殖率与BA浓度成正相关；而BA在2.0、4.0、8.0mg/L的浓度下,芽增殖率与NAA浓度成正相关。3、鳞茎外植体消毒方法比较采用化学、物理手段消毒石蒜鳞茎外植体的效果,75%酒精浸泡30秒,0.1%HgCl2浸泡10分钟消毒效果最佳,最低污染率达16.67%。4、降低鳞片褐化发生研究比较试验所用的两种吸附剂的褐变控制效果,PVP添加浓度为3000mg/L的防褐化效果优于5000mg/L活性炭。比较3种褐变抑制剂的作用效果,中、高浓度的维生素C褐变控制效果好；柠檬酸不宜作褐变控制剂。5、鳞片褐化的生理生化变化研究褐变与总酚含量、酶活性的关系。总酚含量的变化与褐变不相关,但与SOD活性变化趋势相同,与POD活性变化趋势呈一定负相关。CAT活性与外植体褐变趋势相同,随褐变出现其活性增大。当总酚含量达最高值时,CAT活性表现为急剧下降,之后随着褐化程度加重,CAT活性增大。6、不同石蒜花器官愈伤组织诱导能力不同花器官及激素配比对石蒜愈伤诱导率影响不同：培养一个月,花丝愈伤诱导率最高,达39.49%；继代3个月后,花丝、花药、雌蕊褐变死亡；在BA浓度2mg/L及2,4-D浓度1.5,2.0mg/L的培养基中,花梗、子房可产生3种类型愈伤组织,最高愈伤诱导率达88.89%。根据试验结果认为,石蒜花梗可作为诱导愈伤组织的外植体。7、愈伤组织形态结构观察对叁种类型愈伤组织进行解剖镜及SEM, TEM观察试验,并根据愈伤组织的色泽、质地、细胞形态结构,认为黄色水渍状愈伤组织可能为石蒜胚性愈伤组织。
Yun, WU, Yi-ping, XIA, Jia-ping, ZHANG, Fang, DU, Lin, ZHANG[7]2016年在《低浓度腐殖酸处理通过促进根系发育及碳水化合物代谢促进百合离体小鳞茎膨大（英文）》文中提出目的:小鳞茎发育问题研究是缩短百合育种周期、加快百合种球产业化生产的关键,而碳水化合物代谢则是影响小鳞茎发育的重要因子。离体快繁技术因更高效的繁殖速率及易控的环境条件,是鳞茎发育问题研究的替代途径,但目前有关离体条件下鳞茎发育机制研究鲜有报道。本文采用腐殖酸处理东方百合‘索邦’,研究其对于鳞茎膨大的影响及碳水化合物代谢调控路径。创新点:本研究首次采用安全无残留型植物生长调节物质腐殖酸处理,并探讨了其对百合离体鳞茎发育的有效影响及内在的碳水化合物代谢生理生化机制。方法:以构建的离体模式体系下形成的百合单芽,接种至含不同浓度腐殖酸(0、0.2、2.0和20.0 mg/L)的培养基上,每隔15天取样一次,测定株高等7个形态指标;同时,取鳞茎测定主要非结构性碳水化合物(蔗糖、可溶性糖、淀粉)含量及关键淀粉合成酶(AGPase、SSS和GBSS)活性。结论:随腐殖酸处理浓度升高,相对鳞茎重量下降,从而打破库–源平衡,低浓度腐殖酸(0.2 mg/L)处理效果最佳,鳞茎重量为468 mg(为对照的2.9倍),鳞茎直径达11.68 mm。具体来说,低浓度腐殖酸处理可促进根系发育,并在发育早期大幅促进淀粉合成相关酶活性,并通过加速蔗糖/淀粉利用及转换延缓了碳饥饿出现时间。
许真[8]2007年在《葱属蔬菜植物种质资源的形态学评价及离体培养技术研究》文中进行了进一步梳理试验收集了来自中国、韩国和欧洲的74个大蒜品种，于2006年10-11月份种植在浙江大学华家池校区蔬菜研究所试验田。测量大蒜形态学性状指标，对所选形态学性状的数值进行系统聚类分析，发现抽薹率、蒜瓣数、叶数等是影响分类的重要指标，依据这些性状可将试验品种分为四类。欧洲品种和韩国品种与中国品种有较密切联系。上述研究结果将为大蒜品种的亲缘关系鉴定提供依据，也将为进一步的品种演进研究和育种工作提供参考。本试验以藠头鳞茎盘为外植体，在含不同BA、NAA浓度配比的MS培养基上进行诱导芽丛形成的离体培养试验，筛选诱导芽丛形成最快、生长最好的激素浓度组合，并用不同浓度的NAA对丛生芽进行生根诱导试验，记录不同NAA浓度处理下的生根率及生根数量。研究利用MS+NAA0.1 mgl~(-1)为培养基时，不同温度和蔗糖浓度对鳞茎形成的影响。初步建立了藠头离体快繁的培养体系。试验研究结果表明，BA对藠头芽的分化和形成有很大影响。BA浓度为2 mgl~(-1)时，出芽率最高；BA浓度为1 mgl~(-1)时，分化芽数明显高于其它浓度处理。BA浓度过高(＞2 mgl~(-1))或过低(≤0.5 mgl~(-1))都不利于芽丛的分化和生长。适当浓度的NAA对芽形成也具有一定诱导作用，浓度在0.4、0.6、0.8、1.0 mgl~(-1)时，都能促进芽的形成。从试验结果可以看出，BA1.0 mgl~(-1)+NAA0.6或1.0 mgl~(-1)时，诱导芽分化和生长的效果明显好于其它处理。在MS培养基上添加不同浓度的NAA，以不加激素的处理为对照，进行生根诱导试验。结果发现，NAA为0.1 mgl~(-1)时生根最快，处理5天后生根率就达70％；浓度为1.0 mgl~(-1)的生根数最多，诱导20天后每株平均生根数为7.4条，但生根速度低于低浓度(0.1 mgl~(-1))NAA；NAA为0时的生根率和生根数都明显低于加入NAA的处理。将生根苗移栽于大田中，成活率达到95％。在以MS+NAA0.1 mgl~(-1)为基本培养基，研究不同温度、蔗糖浓度对藠头离体鳞茎形成的影响。试验发现，温度是影响鳞茎膨大的关键因子，不同温度处理下，鳞茎形成的快慢差别显着。30℃时鳞茎形成最快，4周左右出现鳞茎形成迹象，随着温度的降低，鳞茎形成所需时间延长，15℃时，约12周植株基部才开始膨大。研究还发现，相同温度(24±1℃)下，培养环境中蔗糖浓度高时鳞茎形成较快，蔗糖浓度低鳞茎形成慢。
崔均涛, 刘凤民, 张伟丽[9]2019年在《索邦和西伯利亚百合的离体再生体系建立》文中研究指明【目的】确定索邦(Sorbonne)和西伯利亚(Siberia)百合的离体再生体系适合的诱导培养基、增殖培养基、生根培养基以及最佳转化受体系统。【方法】选用索邦和西伯利亚百合的鳞茎球作为外植体,比较它们在添加不同激素配比的培养基中的生长状况,得出两种百合诱导愈伤组织和不定芽、继代增殖、诱导生根培养基和对卡那霉素敏感的最适条件。【结果】索邦百合最佳诱导培养基是MS+2,4-D 1.5～2.0 mg/L,西伯利亚百合最佳诱导培养基为MS+2, 4-D 1.0～1.5 mg/L;两种百合的最佳继代增殖培养基均为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2mg/L:两种百合的最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L、1/2MS+IBA 0.2 mg/L;筛选转化植株时,质量浓度为150 mg/L的卡那霉素足以抑制非转化细胞或细菌的生长。【结论】为东方百合品种种球工厂化生产及遗传转化再生体系充实理论依据。
参考文献：
[1]. 基于离体模式体系的百合小鳞茎发生发育机制研究[D]. 吴昀. 浙江大学. 2016
[2]. 中国石蒜种子特性和原生鳞茎形成的初步研究[D]. 王华宇. 南京林业大学. 2007
[3]. 百合离体鳞茎形成的研究[D]. 邓柳红. 华南热带农业大学. 2001
[4]. 中国水仙遗传转化及离体诱变体系的研究[D]. 庄晓英. 浙江大学. 2005
[5]. 2种百合科植物离体鳞茎诱导[J]. 肖玉菲, 玉志鹏, 陈博雯, 覃子海, 晏巢. 广西林业科学. 2016
[6]. 石蒜离体再生体系优化及花器官愈伤组织诱导初探[D]. 陈菁珏. 浙江大学. 2012
[7]. 低浓度腐殖酸处理通过促进根系发育及碳水化合物代谢促进百合离体小鳞茎膨大（英文）[J]. Yun, WU, Yi-ping, XIA, Jia-ping, ZHANG, Fang, DU, Lin, ZHANG. Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology). 2016
[8]. 葱属蔬菜植物种质资源的形态学评价及离体培养技术研究[D]. 许真. 浙江大学. 2007
[9]. 索邦和西伯利亚百合的离体再生体系建立[J]. 崔均涛, 刘凤民, 张伟丽. 广东农业科学. 2019