河北省邢台市食品药品检验所 邢台 054800
摘要：目的 建立测定归脾丸中木香烃内酯和去氢木香内酯含量的HPLC法。
方法 采用Shim-pack VP-ODS色谱柱 （Column Size 250mm×4.6mm 5μm）；以甲醇-乙腈-水（10：45：45）为流动相；检测波长为225nm。流速1.0mL/min。结果木香烃内酯和去氢木香内酯在40分钟内均能得到良好的分离和测定，木香内酯在0.1225μg～1.5312μg，去氢木香内酯在0.1242～1.5525μg范围内呈线性关系，线性相关系数分别为0.9999、0.9999.结论 该方法简单、准确，重现性好，可用于归脾丸中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量测定。
关键词：HPLC；归脾丸；木香烃内酯；去氢木香内酯.
归脾丸，传统中药良药；源于《医学六要•治法汇》卷七中药方剂中的归脾汤，主要用于思伤脾，神不归于脾而健忘怔忡，具有补血养心、安神作用。
主要用于治疗心脾两虚引起的多种疾病。木香是该药的主要成分之一，木香理气醒脾、行气止痛、调理中焦气机，使之补而不滞。最新研究表明，木香烃内酯等内酯成分以及去氢木香内酯挥发油均能对抗组胺与乙酰胆碱对气管和支气管的致痉作用，可用于支气管哮喘；消化系统对小肠有抑制作用，可用于治疗肠肌痉挛等，故控制木香的含量很有必要。为此，我们用HPLC法对木香中的两个主要成分木香烃内酯和去氢木香内酯的含量进行了测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Shimadzu 2010A高效液相色谱仪（LC-2010A HT 低压四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器）LC-Solution工作站软件 色谱柱：SHIMADZU（Shim-pack VP-ODS Column Size 250mm×4.6mm 5μm Serial No.4062928）；Sartorius万分之一和Sartorius十万分之一电子天平； KQ-600D型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 试药与样品
木香烃内酯（批号：111524－201006，中国药品生物制品检定所，含量测定用，含量为99.9%）、去氢木香内酯（批号：111525－200907，中国药品生物制品检定所，含量测定用）样品：归脾丸（大蜜丸），厂家：赤峰丹龙药业有限公司，批号：100734，同时测定其他4批归脾丸； 甲醇为北京化工厂色谱纯，乙腈为北京化工厂色谱纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1色谱条件[1] 色谱柱：SHIMADZU（Shim-pack VP-ODS Column Size 250mm×4.6mm 5μm；流动相：甲醇-乙腈-水（10：45：45）；检测波长：225nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。
2.2对照品溶液的制备 精密称定木香烃内酯对照品12.25mg，精密称定去氢木香内酯对照品12.42 mg，加甲醇200ml制成木香烃内酯、去氢木香内酯浓度分别为61.25μg/mL、62.10μg/mL的混合溶液。
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2.3供试品溶液的制备 取样品，约12g，剪碎，精密称定，加硅藻土5g，研匀，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率480W，频率40kHz）30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4阴性对照溶液的制备 按照《中国药典》2010年版（643页）[2]归脾丸处方的十分之一量，不加木香制成大蜜丸按2.3项下方法制备阴性对照溶液。
2.5 线性关系考察 吸取木香烃内酯和去氢木香内酯混合对照品溶液2μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件进行分析，测定峰面积积分值。以进样量（μl）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标得线性方程。木香烃内酯：y=1666240x+6973.4 r=0.9999，线性范围：0.1225μg～1.5312μg；去氢木香内酯：y=1280485x+3010.0 r=0.9999，线性范围：0.1242～1.5525μg。
2.5专属性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，按色谱条件测定，结果供试品溶液在与对照品溶液保留时间一致的位置上有木香烃内酯和去氢木香内酯峰，而阴性对照溶液在与对照品溶液相应的位置上无色谱峰，表明该方法的专属性较好，制剂中其他组分无干扰。
2.6重复性试验 精密称取称取同一批号样品5份（批号100734），照2.3项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取10μl注入液相色谱仪，测定色谱峰面积。结果：木香烃内酯RSD为0.5%；去氢木香内酯RSD为0.7%。表明该方法的重复性良好。
2.7稳定性试验 精密称取同一批号样品（批号100734），按2.3项下方法制备供试品溶液，分别于2、4、8、12h精密吸取10μl注入液相色谱仪，测定色谱峰面积。结果显示：木香烃内酯RSD为0.8%；去氢木香内酯RSD为1.5%。，表明在12h内供试品溶液的化学性质稳定。
2.8中间精密度 取同一批号样品（批号100734）照上述方法制备供试品溶液，分别用三个不牌号的色谱柱Shim-pack VP-ODS Column Size 250×4.6、Welch Materials XB-ODS Column Size 250×4.6mm、waters Sunfire C18 5um 4.6×250 Column.测定，结果RSD为1.8%，表明精密度较高。
2.9加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批号（100734）归脾丸样品（木香烃内酯和去氢木香内酯的含量分别为0.120mg/g，0.209mg/g）6g，称取6份，分别精密加入木香烃内酯和去氢木香内酯的混合对照品贮备液（分别精密称定木香烃内酯12.75mg，去氢木香内酯12.94mg，加甲醇定容至25ml）3ml，并与样品粉末混合均匀，使其自然挥干，精密加入甲醇50ml，密塞，自精密称定起按2.3项下的方法制备溶液，进行测定。结果平均回收率分别为100.7%、98.5%；RSD分别为1.4%、0.5%。表明本法准确度符合要求。
3 讨论
提取方法的选择 本实验对供试品溶液的不同提取方法（回流、超声），不同溶剂（乙酸乙酯、乙醚、甲醇）及不同提取时间（20、30、45min）分别进行考察。结果甲醇50ml超声提取30min，木香烃内酯和去氢木香内酯含量均较高，杂质峰较少，该方法简便。
色谱条件的选择 曾比较研究流动相甲醇-0.1%磷酸（63：37）和甲醇-乙腈-水（10：45：45），结果发现甲醇-0.1%磷酸（63：37）分离度不符合要求，采用甲醇-乙腈-水（10：45：45）可改善此现象，峰形较好。
参考文献：
[1]中国药典.一部，2005：431
[2]中国药典.一部2010：643.
作者简介：魏红立，女，学士 邢台市食品药品检验所中药室 主管药师。
论文作者:魏红立,吕勤芝
论文发表刊物:《健康世界》2014年24期供稿
论文发表时间:2016/4/11
标签：木香论文; 内酯论文; 溶液论文; 精密论文; 甲醇论文; 色谱论文; 批号论文; 《健康世界》2014年24期供稿论文;