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【摘 要】目的 对比分析血清及肺泡灌洗液（BALF）半乳甘露聚糖（GM）试验对侵袭性肺曲霉病（IPA）早期诊断价值。方法 选择我院2018年6月-2019年2月收治的187例肺部感染患者作为研究对象，58例IPA患者为IPA组，其中确诊4例，临床诊断35例，拟诊19例，其余129例患者均为非IPA组。收集两组患者血清与BALF标本进行GM试验，比较两组患者的血清与BALF标本GM试验的受检血清指数（I）值，并分析其诊断效能及诊断临界值。结果 IPA组与非IPA组的BALF标本GM试验I值均显著高于血清GM试验的I值（P＜0.05），IPA组血清与BALF标本的GM试验I值均显著高于非IPA组（P＜0.05）；分别以0.5、1.0、1.5、2.0作为诊断阈值，计算各个阈值下的GM试验诊断IPA的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、AUC及约登指数，血清标本GM试验的I值为0.5时，诊断效能最佳；BALF的GM试验I值为1.0时，诊断效能最佳；各个诊断阈值下，BALF诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数均高于血清。结论 血清与BALF标本GM试验均对IPA早期诊断有一定的价值，但BALF的GM试验诊断价值要高于血清，且两个诊断指标的诊断阈值具有一定差异性。
【关键词】血清；肺泡灌洗液；GM试验；侵袭性肺曲霉病；早期诊断
曲霉菌是侵袭性肺真菌感染（IFI）的一种最为常见的病原菌，侵袭性肺曲霉病（IPA）是曲霉菌感染所引发，是肺侵袭性真菌病（IFD）的主要种类。由于IFA缺乏典型性、特异性临床表现，具有多样性胸部影像特征，为早期诊断增加了难度[1]。半乳甘露聚糖（GM）是曲霉菌感染检测的一个重要实验室指标，能够在IPA患者临床症状及体征出现前，从血液与体液中检出，在IPA早期诊断中具有一定敏感性与特异性[2]。本研究对血清及肺泡灌洗液（BALF）GM试验在IPA中的应用价值进行比较分析。现报告如下。
1资料与方法
1.1 一般资料
选择我院2018年6月-2019年2月收治的187例肺部感染患者作为研究对象，男85例，女102例，年龄27-79岁，平均（50.48±8.32）岁，所有患者均伴有COPD、糖尿病、支气管扩张、慢性心血管疾病等多种基础疾病，均有长期的广谱抗生素、糖皮质激素服用史，患者临床症状、表现均缺乏特异性，以发热、咳嗽、气促为主要表现，经抗感染治疗后无好转，胸部影像学表现以多发性结节、空洞和晕证为主。根据《肺真菌病诊断和治疗专家共识》[3]，共58例IPA患者为IPA组，其中确诊4例，临床诊断35例，拟诊19例，其余129例患者均为非IPA组。
1.2 方法
试剂与仪器：试剂盒采用美国Bio-Rad的PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒（双抗体夹心ELISA法），仪器采用澳大利亚的sunrise全自动酶标仪。
标本收集
I． 血清 抽取患者外周静脉血5mL，3000r/min离心处理10min，用密封试管运送和储存样本，不能暴露在空气中。未开启的样本在实验前，储存于 2-8℃可以稳定达 5 天。
II． 肺泡灌洗液 按照标准实验室操作程序收集肺泡灌洗液。肺泡灌洗液必须使用无菌盐水收集，如果澄清可直接用作试验，否则需10000r/min离心10 分钟，取上清进行试验，试验前进行预处理。用密封试管运送和储存样本，不能暴露在空气中。首次启封后，实验前储存于 2-8℃可以稳定 24 小时。如果要求作更长时间的储存，请将肺泡灌洗液冷冻储存（-20℃或更低），可储存 5 个月。
操作步骤
取300μL上清液与100μL样本处理液混合，金属浴（120℃）6分钟，以10000r/min离心10min，取50μL样本上清液滴入每个ELISA检测孔中，加入50μL酶结合物，密封膜封好，于37℃下水浴处理90min，洗板5次，吸干，再将200μL显色液加入每孔中，室温下避光静置30min后，滴入100μL终止液，采用酶标仪于450nm波长处读取各孔吸光度（A）。每次试验均设置待测患者组、阴性对照组、阳性对照组、临界值对照组，确保实验有效性。待测患者BALF的GM试验I值=待测患者样本光密度值/cut-off对照光密度均值。
1.3 统计学方法
采用SPSS20.0对数据进行对比和检验，计数资料采用例数+构成比的方式表示，行χ２检验；计量资料采用（）表示，行t检验，绘制受试者工作曲线，比较两个诊断指标在不同诊断阈值下的诊断效能，并获取最佳阈值，当P＜0.05时，表示比较差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者血清、BALF标本的GM试验的I值比较
IPA组与非IPA组的BALF标本GM试验I值均显著高于血清GM试验的I值（P＜0.05），IPA组血清与BALF标本的GM试验I值均显著高于非IPA组（P＜0.05）；见表1。
表1 两组患者血清、BALF标本的GM试验的I值比较（）
2.2 血清及BALF的GM试验对IPA的诊断价值
分别以0.5、1.0、1.5、2.0作为诊断阈值，计算各个阈值下的GM诊断IPA的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、AUC及约登指数，血清标本GM试验的I值为0.5时，诊断效能最佳；BALF的GM试验I值为1.0时，诊断效能最佳，各诊断阈值下，BALF的诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、AUC、约登指数均高于血清；见表2。
表2 血清及BALF的GM试验对IPA的诊断价值[%（例数/总例数）]
3讨论
多项研究显示，IPA早期诊断中，BALF的GM试验要优于血清GM试验，meta分析显示，BALF GM试验对IPA的早期诊断合并敏感度为0.70（95%CI为0.66-0.75），合并特异度为0.93（95%CI为0.92-0.95），漏诊率与误诊率分别为30%与7%[4]。本研究显示，当BALF的GM试验I值为1.0时，诊断效能最佳，诊断敏感度为74.14%、特异度为95.35%，阳性预测值为87.76%，阴性预测值为89.13%，约登指数为0.695，与该研究相似。
BALF是经纤维支气管镜将生理盐水注入支气管肺泡内，再抽吸肺泡表面的衬液，分析其细胞成分与可溶性成分，以此作为IPA早期实验室筛查诊断依据，GM值是曲霉菌细胞壁半乳甘露聚糖阴性与阳性状态的早期检测标准，其检测时间、检测率等均优于影像学、生物学检查效果[1]。血清中的GM水平与患者免疫状况、真菌负荷情况有关，IPA早期时，血液中GM水平较低，且当宿主免疫功能正常时，中性粒细胞会提高GM清除率，因此，若患者免疫功能正常时，血清GM检测在早期IPA诊断中无较高敏感度，肺则是曲霉菌感染靶器官，其局部负载要显著高于其他体液，因此，检测BALF GM时，能够较血清GM更准确、快速地诊断出早期IPA[5]。本研究显示，各个诊断阈值下，BALF GM的诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数均高于血清GM，可能原因在于本研究中的患者样本大部分均未出现中性粒细胞缺乏或免疫功能低下的情况。
关于血清GM与BALF GM的诊断临界点，目前仍然没有统一的阈值，欧洲多以1.0或1.5作为诊断阈值，美国则多以0.5作为诊断阈值，我国目前则没有具体的诊断阈值[6]。本研究中，BALF GM的I值为1.0与1.5时，各诊断值差异不显著，但要高于0.5的诊断阈值，因此，本研究倾向于采用1.0作为诊断阈值，其诊断效能要优于血清GM及BALF GM的其他阈值。
综上分析，血清与BALF标本GM试验均对IPA早期诊断有一定的价值，但BALF的GM试验诊断价值要高于血清，且两个诊断指标的诊断阈值具有一定差异性。
参考文献：
[1]单宇，刘军权，祝宇翀等.肺泡灌洗液GM试验对肺部侵袭性曲霉菌感染的诊断价值[J].中国医药导报，2018，15（1）：118-122.
[2]郭庆玲，郭禹标，廖康，等.支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖抗原检测对非粒细胞缺乏患者的侵袭性肺曲霉病诊断价值[J].实用医学杂志，2016，32（1）：130-133.
[3]中华医学会呼吸病学分会感染学组.肺真菌病诊断和治疗专家共识[J].中华结核和呼吸杂志，2007，30（11）：821-834.
[4]王俊玲，周正，马源慧，etal.支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖检测对侵袭性肺曲霉菌感染诊断价值的Meta分析[J].检验医学，2014，29（12）：1248-1253.
[5]王颖，黄梅，奚海燕，等.支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖抗原检测对非免疫功能低下患者侵袭性肺曲霉病的诊断价值[J].临床检验杂志，2018，36（1）：29-30，33.
[6]应华娟，王华英，陈晓飞，etal.血清及肺泡灌洗液GM试验对侵袭性肺曲霉病早期诊断价值的比较[J].现代实用医学，2017，29（01）：13-16.
论文作者:吕青松
论文发表刊物:《中国结合医学杂志》2019年3期
论文发表时间:2019/5/15
标签：血清论文; 阈值论文; 曲霉论文; 肺泡论文; 患者论文; 标本论文; 高于论文; 《中国结合医学杂志》2019年3期论文;