【关键词】实时荧光技术；胶体金免疫层析技术；流感病毒检验
流感是由于感染流感病毒所致的一种急性呼吸道感染，具有季节性、传播速度快、传染性强的特点，可通过空气飞沫、接触污染物等方式进行传播，多发于免疫力低下、老年、小儿等人群，感染后通常伴随着全身疼痛、高热、鼻塞、流鼻涕、咳嗽、呼吸急促等临床症状，流感严重时极易引发肺炎等严重并发症，进而可能导致死亡，因此需要采用科学的检验方法，及时检出流感病毒，指导制定合理的治疗方案[1]。此实验选取85例急性呼吸道感染患者，探讨比较不同流感病毒检验方法的应用效果，详细步骤如下。
1 资料和方法
1.1 临床资料
选取医院2018年10月—2019年10月收治的急性呼吸道感染患者85例，年龄5—83岁，平均年龄（58.67±6.29）岁；其中男性患者48例、女性患者37例。所有患者年龄、性别等临床资料比较差异不存在统计学意义（P>0.05）。
1.2 纳入标准和排除标准
纳入标准：患者及家属知晓检验内容，且同意参与实验研究；无血液系统功能疾病、内分泌代谢疾病、神经系统功能疾病者；伴随着不同程度咳嗽、喉咙痛痒、发热等症状者；体温≥38℃者；排除标准：合并其他严重感染、呼吸系统疾病、肺部疾病者；肝肾、脾胃、心脏等器官功能器质性病变者；需要哺乳或妊娠者；智力或精神异常者。
1.3 方法
所有患者均需采用实时荧光技术（RT-PCR）、胶体金免疫层析技术（GICA）进行流感病毒检验，首先采集样本，即用压舌板轻压患者舌根部，把两根咽拭子共同置入咽喉部，取下扁桃体隐窝部位上皮细胞组织，将一根咽拭子置入pH7.4—7.6的Hank’s溶液内，将另一根咽拭子置入胶体金快速检测裂解液内。RT-PCR检验具体方法：采用kingfisher duo自动核酸提取仪采集样本中的流感病毒核酸，再采用美国ABI 7500型实时荧光定量PCR扩增仪按照上海之江甲型流感病毒核酸检测试剂盒及相关说明书进行检验。GICA检验具体方法：充分均匀搅拌放有样本的细胞裂解液，用吸管吸取裂解液3—4滴，并滴在检测卡加样孔内，15min后观察检测区变化，如果检测区与对照区均出现1条红色带，即为阳性，如果检测区无红色带出现，对照区形成1条红色带，即为阴性。计算两种检验方法阳性率，确定两种检验方法检验结果相同的病例。
1.4 统计学处理
把研究数据输入SPSS21.0软件，百分率（%）描述定数资料，行x2检验，P<0.05，组间差异呈现统计学意义。
2 结果
85例患者样本经RT-PCR检验显示季节性流感甲型通用引物阳性70例，检验阳性率为82.35%（70/85）。85例患者样本经GICA检验显示流感甲型抗原阳性80例，检验阳性率为94.12%（80/85），两种检验方法结果相同病例有66例，检验结果比较差异呈现统计学意义（P<0.05），见表1。
3 讨论
流感是流行性感冒的简称，其中有胃肠型流感、中毒型流感、肺炎型流感、单纯型流感等类型，主要是由于感染流感病毒所致，这种病毒传播速度快、传染性强、流行范围大，在低温、干燥、-20℃以下、真空等环境中仍然可以存活，对紫外线、常用消毒剂敏感性强，但不耐热，在56℃环境中仅能生存30min，在100℃环境中仅能生存1min[2]，传播途径包括人与人接触、空气飞沫、接触被污染物，多发于秋冬季节，感染流感病毒后一般会潜伏1—7d，之后患者逐渐表现出全身肌肉酸痛、头痛、急起高热、乏力等临床症状以及轻度呼吸道症状，对于合并心肺基础、老年、妊娠、婴幼儿等患者，极易出现各种严重并发症，比如肺炎、急性呼吸窘迫综合征、低氧血症、心肌炎等，进而产生发绀、呼吸困难等症状，加速患者死亡，提高病死率。近年来，我国人口老龄化程度逐渐加深，自然生态环境不断污染恶化，人们生活方式与卫生习惯日益变差，流感发病率呈现逐年增长趋势[3]，为了及时发现流感病毒，以便于患者及早获取针对性治疗，避免流感疫情大爆发，需要应用科学的技术进行流感病毒检验，准确检出流感病毒，指导制定合理的治疗方案，防止流感病毒不断传播。
现阶段，临床实验室检验流感病毒的金标准是流感病毒培养，这种检验方法虽然能准确判断出病毒类型与抗原变异情况，但操作繁琐复杂、检验时间长，且要求检验人员具备较高的专业素养，不适用于爆发式疫情病原学快速诊断。而实时荧光技术（RT-PCR）、胶体金免疫层析技术（GICA）均是当前临床流感病毒检验常用的方法。在RT-PCR检验过程中，实验室需要应用一些大型专用设备仪器，同时严格要求实验室分区，保持极高清洁度，这在一定程度上增加了检验成本[4]。在GICA检验过程中，可通过胶体金追踪、标记抗原抗体之间反应，且操作简便、检验成本低、稳定性高、结果误差小、准确性高、检验快速，同时对流感病毒有较强的特异性，可为疫情控制、抗生素使用、隔离提供科学的参考[5]。该结果表明，样本经RT-PCR检验显示季节性流感甲型通用引物阳性70例（82.35%），经GICA检验显示流感甲型抗原阳性80例（94.12%），两种检验方法结果相同病例有66例，检验结果比较差异具有统计学意义（P<0.05）。
总而言之，GICA流感病毒检验应用效果要优于比RT-PCR检验，不仅能快速筛查出流感病毒疫情，还可为疫情控制、抗生素使用、隔离提供科学的指导，直达大量推广应用在流感病毒检验中。
【参考文献】
[1] 孙敏华, 李林林, 董嘉文, 等. 鸭坦布苏病毒、产蛋下降综合征病毒和H9亚型禽流感病毒三重荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 广东畜牧兽医科技, 2017, 42(4):37-42.
[2] 张王梅, 付迎新, 赵淑清, 等. 511例5岁以下儿童严重急性呼吸道感染流感病毒检测结果分析[J]. 热带病与寄生虫学, 2017, 15(1):46-47.
[3] 陈晨, 范清琪, 陈刚, 等. 流感病毒两种快速抗原检测方法的对比分析[J]. 中国感染与化疗杂志, 2017, 17(1):29-32.
[4] 张婷, 谢晋雄, 詹爱军, 等. 高通量核酸液相芯片检测法对H5、H9亚型禽流感病毒及新城疫病毒的检测[J]. 中国家禽, 2018, 40(16):24-30.
[5] 李珺, 刘亚楠, 田国保, 等. 临床实验室流感病毒检测的相关影响因素分析[J]. 国际病毒学杂志, 2017, 24(5):331-335.
论文作者:陈莉莉
论文发表刊物:《总装备部医学学报》2019年第09期
论文发表时间:2019/11/25
标签：流感论文; 病毒论文; 患者论文; 阳性论文; 层析论文; 两种论文; 胶体论文; 《总装备部医学学报》2019年第09期论文;