河北省定州市人民医院073000
［摘要］目的通过慢传输型便秘（STC）患者乙状结肠及正常乙状结肠CAD及S-100蛋白进行免疫组化检测，观察慢传输型便秘乙状结肠组织神经丛内神经节细胞数量变化以及神经纤维改变，探寻慢传输型便秘患者的肠神经系统病理学改变。方法选取结直肠癌手术标本乙状结肠段20例作为正常对照组，慢传输型便秘手术标本乙状结肠段20例为研究组，应用CAD和S-100行免疫组化检测，计数肠壁神经丛内神经节细胞数目。结果CAD和S-100两组免疫组化染色均显示STC组结肠壁内肌间和粘膜下神经节细胞数目减少，神经纤维呈增生扭曲改变。结论：慢传输型便秘发病机制可能与结肠壁内神经节细胞数量减少、神经纤维增生紊乱有关。
关键词：CAD，S-100，慢传输型便秘，慢传输型便秘病理机制，肠神经系统
【中图分类号】R574.62 【文献标识码】A
慢传输型便秘是结肠运动减少、传输缓慢为主要特点，粪便在结肠内停留时间延长，水分被过度吸收，大便干结，排便频率减少。随着社会的进步和发展，一项对我国五个地区的多级抽样调查[1]，我国的便秘发病率约6%，其中女性多于男性。
慢传输型便秘的确切病因和发病机制尚不明确，其中肠神经系统是研究的热点课题之一，通过免疫组化方法来定位和标记神经元、神经纤维细胞，从而了解神经元、神经纤维的形态，数量及分布的状况，探寻肠神经系统的微观改变，本实验以CAD及S-100分别为神经细胞及神经纤维的标记物，通过正常对照组与STC患者乙状结肠比较来研究便秘患者结肠内神经系统改变情况，寻找STC患者肠神经系统病理形态改变，探讨STC可能的发病机制。
1标本取材
1.1对照组选取结直肠癌手术标本乙状结肠段20例作为正常对照组，其中男性8例，女性12例，年龄范围 29–76 岁，中位年龄63岁。1.2实验组手术切除STC患者手术标本乙状结肠段20例为研究组，其中男性6例，女性14例，患者年龄范围32-71岁，中位年龄59岁。
2实验过程
取手术标本乙状结肠段全层肠壁，选取合适部位修剪成2*2cm大小，中性福尔马林液固定24小时，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，手动切片机切片，厚度4um，切片脱蜡，水化，3%过氧化氢孵育，血清封闭，分别滴加一抗（CAD和S-100），滴加二抗，DAB复染，苏木素反蓝，梯度酒精脱水，中性树胶封片；在光学显微镜下观察肠壁粘膜下层和肌间神经丛，神经丛内神经节细胞数量、形态，神经纤维形态，每张切片粘膜下层和肌间分别随机选取（400×）镜下计数神经丛内神经节细胞个数，采集典型图像。
3数据分析
数据采用“均数±方差”（）表示，应用统计学软件SPSS19.0对数据进行统计学分析，采用独立样本T检验，检验水准α=0.05。
结果：
1CAD染色：对照组乙状结肠粘膜下层和肌间可见神经丛分布，神经节细胞呈现深棕色染色，大小均匀，实验组乙状结肠肌间和粘膜下可见神经丛分布，神经节细胞呈现深棕色染色，神经节细胞大小、分布不均匀，神经节细胞数量减少。
2S-100 染色：对照组乙状结肠粘膜下层和肌间神经丛可见神经丛，呈棕黄色染色，神经丛中可见细胞状“空白区”，即神经节细胞，大小、分布规整，神经纤维走形规则，无扭曲；实验组乙状结肠粘膜下层和肌间神经丛可见神经丛，神经丛内细胞状“空白区”较对照组减少，大小、分布不规整，神经纤维分布杂乱、增生、扭曲。
3 CAD染色结果分析：与对照组比较，试验组乙状结肠粘膜下层和肌间神经节细胞数量显著减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。
4S-100染色结果分析：与对照组比较，试验组乙状结肠粘膜下层和肌间神经节细胞数量显著减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。
讨 论
功能性便秘是一种胃肠道功能障碍性疾病，国内外均有较高的发病率，严重影响着人类的身心健康，功能性便秘按发病机制分为三种类型[2]，正常传输型便秘(normal transit constipation NTC)，慢传输型便秘（slow transit constipation STC），出口梗阻型便秘（outlet obstructive constipationOOC）。其中STC是功能性便秘的常见类型，发病率约占便秘患者的42%[3]，它的发病机制复杂，通常是多方面因素综合作用的结果，赵劢，谭至柔[4]统计慢性便秘易患病因素有性别、文化程度、社会经济地位、职业、生活方式和饮食习惯、精神心理因素、便秘家族史、体质量指数、烟酒史、居住环境等有关。
结肠内正常数量、形态、结构的神经元及神经纤维是胃肠道维持正常的功能的物质基础。至今为止，病理学研究发现[5]，STC结肠组织内神经元呈退化性改变，肠神经节细胞减少，轴突的病理性增生，进而ENS发生退行性变，而神经节细胞减少，Wedel 等[6]利用手术切除STC结肠标本，通过免疫组化技术，发现STC患者结肠每个肠段的神经节面积减小，肌间神经丛和粘膜下神经丛内神经元数量都明显减少，并且粘膜下胶质细胞与神经细胞比例显著增加，并且发现有明显的更多的细胞凋亡，神经元胞体和细胞核的固缩、消失。当上游神经元发生变性坏死后，突触失去神经信号向下传递功能，下游神经元从而处于被“剥夺”状态，导致下游神经元的萎缩，所以当神经元坏死后，它的影响是范围是超出它本身的，在肠神经元减少的原因中细胞凋亡现象扮演重要角色。在中枢神经系统和周围神经系统中，神经退行性变和细胞内凋亡通路的激活有关。轴突是神经元之间以及神经元与效应器之间重要的信号传递通道，并且营养物质通过轴浆流动运输至突触小体，胞体同时也受逆向轴浆运输负反馈调节，当轴突受到损伤、营养缺乏、缺氧、感染等不利因素影响时，会导致胞体变圆，细胞核边置，核仁体积增大，尼氏小体消失，如果这些因素持续存在，则会最终会导致神经元的死亡。轴突的病理增生这种改变在各种不同动物模型已经被观察到[7]。研究发现[8] STC患者结肠轴突内神经丝蛋白堆积聚集，阻碍了大分子物质的轴浆运输，从而神经纤维呈现增生扭曲改变，造成了神经传导功能障碍。
参考文献
1Zhao YF,Ma XQ,Wang R,et al. Epidemiology of functional constipation and comparison with constipation-predominant irrtable bowel syndrome:the Systematic Investigation of Gastrointestional Disease in China (SILC) [J].Aliment Pharmacol Ther ,2011，34:1020-1029
2Cook IJ, Talley NJ, Benninga MA, et al. Chronic constipation: overview and challenges[J].Neurogastroenterol Motil ,2009, 21 Suppl 2: 1-8
3SHAHID S, RAMZAN Z, MAURER AH, et al． Chronic idiopathic constipation:more than a simple colonic transit disorder [J].Clin Gastroenterol,2012,46:150-154
4赵 劢, 谭至柔.成年人慢性便秘流行病学的研究现状[J].世界华消化杂志,2014, 22(7): 939-944
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6Wedel T, Ｒoblick UJ, Ott V, etal.Oligoneuronal hypogan glionosisin patients with idiopathic slow transit constipation[J].Dis Colon Ｒecttim, 2002, 45(1 ):54 - 62
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8田波，杨世玲，李云华，等. 慢传输型便秘结肠神经病理改变的意义[J].世界华人消化杂志, 2000,8（12）:1385-1388.png)
论文作者:王永彬 宋顺丰 李婷
论文发表刊物:《解放军预防医学杂志》2015年第5期供稿
论文发表时间:2015/11/25
标签：乙状结肠论文; 神经元论文; 神经纤维论文; 细胞论文; 神经论文; 结肠论文; 粘膜论文; 《解放军预防医学杂志》2015年第5期供稿论文;