唐代屹[1]2001年在《仙贞片对糖尿病大鼠肾保护作用的实验研究》文中指出目的： 观察中药复方仙贞片对糖尿病大鼠血糖、糖化血红蛋白、肾功能、肾脏病理形态，以及对肾皮质糖化终产物(AGEs)及其特异性受体(RAGE)mRNA表达的影响，为仙贞片的临床应用提供实验依据。 材料： 1．实验动物：雄性Wistar大鼠，6～7周龄，体重200±20g。 2．主要药品及试剂：仙贞片、糖适平、洛汀新、氨基胍、链脲佐菌素、总RNA提取试剂金、AMV逆转录酶。 方法： 1．造模方法：采用目前国际上研究DN最常用的链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病(DM)模型。按60mg／kg体重的剂量从左下腹腔内注射链脲佐菌素，72小时后取尾血测血糖，凡血糖＞16.7mmol／L，则作为糖尿病大鼠；出现蛋白尿、肾功能损害及肾小球弥漫性硬化为糖尿病肾病大鼠模型。 2．分组及给药方法：实验分二部分，第一部分采用随机数字表分组法将STZ糖尿病大鼠分为：模型组、仙贞片大剂量组(大剂量组)、仙贞片小剂量组(小剂量组)及阳性药物糖适平加洛汀新对照组(西药组)，另以体重、鼠龄相匹配的正常大鼠作为正常对照组，采用灌胃给药，分12周、24周两个疗程组，观察仙贞片对糖尿病大鼠血糖、糖化血红蛋白、肾功能及肾脏病理形态的影响。第二部分随机分为正常对照组、模型组、仙贞片组、阳性药物氨基胍对照组(氨基胍组)，疗程12周，观察仙贞片对糖尿病大鼠肾皮质AGEs及RAGE mRNA表达的影响。 3．检测指标、方法及仪器： (1)血糖、糖化血红蛋白：血糖采用葡萄糖氧化酶法，使用美国lifescan公司的One TouchⅡ血糖仪及试纸条；糖化血红蛋白(HbAlc)采用德国拜尔公司DCA2000~+糖尿病分析仪及试剂盒测定。 (2)血尿素氮、血清肌酐、尿白蛋白：血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)采用荷兰Vitalab210型自动生化分析仪测定；尿白蛋白(Alb)采用DCA2000~+糖尿病分析仪及试剂盒测定。
唐代屹, 郭赛珊, 孙仁宇[2]2005年在《仙贞片对糖尿病大鼠肾皮质终末期糖化终产物及其受体mRNA表达的影响》文中研究表明目的观察仙贞片对糖尿病大鼠肾皮质终末期糖化终产物 (advancedglycationendproducts,AGEs)含量及其糖化终产物特异性受体 (AGE specificcellularreceptor,RAGE)信使核糖核酸 (messengerri bonucleicacid ,mRNA)表达的影响 ,探讨其对糖尿病大鼠肾保护的作用机制。方法采用链脲佐菌素(streptozotocin ,STZ)复制糖尿病持续性高血糖肾损害大鼠模型 ,用荧光测定法和逆转录 -多聚酶链式反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction ,RT PCR)技术检测模型大鼠肾皮质AGEs含量及RAGEmRNA的表达 ,与氨基胍作对照。结果实验 12周模型大鼠肾皮质AGEs相对含量及RAGEmRNA表达明显高于正常对照组 (P <0 0 5 ) ,仙贞片及氨基胍治疗组肾皮质AGEs相对含量及RAGEmRNA表达明显低于模型组 (P <0 0 5 ) ,仙贞片与氨基胍组比较差异无显着性 (P >0 0 5 )。结论仙贞片能减轻糖尿病大鼠肾皮质内AGEs的积聚 ,下调RAGEmRNA的过度表达 ,与氨基胍相近似 ,具有抑制蛋白非酶糖基化的作用 ,可能是其肾保护作用的机制之一。
潘明政[3]2001年在《糖尿病大鼠心肌及主动脉糖基化终产物受体mRNA表达及仙贞片对其影响的实验研究》文中研究说明目的： 1．建立链脲佐菌素糖尿病大鼠心肌及主动脉组织RAGE-mRNA高表达的实验动物模型。 2．应用原位杂交的方法，与氨基胍作对照观察仙贞片对糖尿病大鼠心肌及主动脉RAGE-mRNA高表达的影响，为仙贞片的临床应用提供实验依据。 材料： 1．实验动物：7周龄雄性Wistar大鼠，体重180-220克。 2．主要药品及试剂：仙贞片、氨基胍、链脲佐菌素、非放射性DNA标记及检测试剂盒。 3．主要仪器：One Touch Ⅱ血糖仪、RNA提取及RT-PCR仪、Olympus显微镜、计算机显微图象处理系统。 方法： 1．造模方法：采用链脲佐菌素60mg/kg左下腹腔内单次注射造成糖尿病大鼠模型(血糖≥16.7mmol/L)。 2．分组及给药方法：随机分模型组(自来水)、仙贞片组(生药20g/kg/d)及氨基胍组(100mg／kg／d)各10只，设正常对照组(自来水)10只。灌胃给药。 3．检测指标与方法： 血糖：采用葡萄糖氧化酶法，使用One Touch Ⅱ血糖仪及试纸条。原位杂交：参照苏慧慈等人的方法进行。 结果： 1．病程12周模型组大鼠心肌毛细血管内皮细胞及主动脉内皮细胞RAGE-mRNA表达的灰度值明显增高(6416.9±503.4、5788.2±342.2)，与
李娜[4]2010年在《中药红景天对高糖条件下大鼠心肌微血管内皮细胞及其生长因子作用的实验研究》文中研究指明[目的]1.采用消化法体外培养出纯度较高的大鼠心肌微血管内皮细胞(MMVECs)备用。2.与培哚普利作对照,观察红景天含药鼠血清对高糖条件下大鼠MMVECs的增殖活力、MMVECs上清液中血管内皮生长因子(VEGF)分泌量和MMVECs内VEGF基因表达水平的影响。[方法]新生5-7天Wistar大鼠,开胸心脏取材,用冷D-Hanks液反复冲洗3次,采用二次消化法(0.25%胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化)分离、培养MMVECs,利用差速贴壁法和亚细胞克隆法纯化MMVECs,用Ⅷ因子和CD31相关抗原进行鉴定。取培养至第3代的MMVECs,在培养基中加入50mmol/L Glu、含50mmol/LGlu的红景天(NDK)高、中、低剂量含药血清和培哚普利(PD)含药血清进行培养,72h时行MTT比色实验观察MMVECs增殖活性的变化,透射电镜下观察MMVECs超微结构的变化,并检测MMVECs上清液中VEGF的分泌量及MMVECs内VEGF基因表达水平。[结果]1.成功培养出纯度较高的MMVECs,可用于该项实验研究。2.MTT比色实验：各组随培养时间的延长,OD值有所上升,72h时各糖浓度下的OD值比48h上升显着,差异均有统计学意义(均P<0.05)。72h时,与正常对照组比较,各浓度组OD值都有所降低,以50mmol/L和75mmol/L时OD值的降低最为显着(P<0.01)。用50mmol/LGlu培养72h时,NKD低组和PD组的OD值较50mmol/LGlu组显着升高(均P<0.01),但两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。3.透射电镜下观察：高糖条件下MMVECs出现指状突起,溶酶体增多,线粒体肿胀,粗面内质网扩张。NDK低组含药血清作用后能改善这种损伤,其作用与PD组相似。4. ELISA法检测：高糖组、NDK高、中、低组和PD组MMVECs上清液中VEGF分泌量较正常对照组均显着降低(均P<0.01)；与高糖组相比,NDK中、低组和PD组MMVECs上清液中VEGF分泌量显着升高(P<0.05,P<0.01)。NDK低组和PD组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。5. QT-PCR法检测：高糖组、NDK高、中、低组及PD组MMVECs VEGF-mRNA表达水平较正常对照组显着降低(P<0.01)。与高糖组相比,NDK低组MMVECs VEGF-mRNA表达增高,差异非常显着(P<0.01),PD组MMVECs VEGF-mRNA表达也增高,但差异无统计学意义(P>0.05)。NDK低组与PD组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]1.采用二次消化法原代培养,经差速贴壁法+亚细胞克隆法纯化的新生Wistar大鼠MMVECs,经Ⅷ因子和CD31相关抗原免疫荧光鉴定后,纯度可达95%以上,可用于正式实验。2.高糖对MMVECs的增殖有抑制作用。NDK低剂量组能促进高糖条件下MMVECs的增殖,其作用与PD组相近似。3.透射电镜下能观察到高糖对MMVECs超微结构的损伤,NDK低剂量组能改善这种损伤,其作用与PD组相似。4.高糖条件下,MMVECs上清液中VEGF分泌量及MMVECs内VEGF基因表达水平显着降低。NDK低剂量组可上调MMVECs上清液中VEGF的分泌量及MMVECs内VEGF的基因表达水平,其作用优于PD组。体外培养MMVECs,与培哚普利作对照,观察中药红景天含药血清对高糖条件下MMVECs及其VEGF的影响。分别从细胞水平和分子水平,观察红景天对高糖环境下大鼠MMVECs增殖活力、MMVECs上清液中VEGF分泌量及MMVECs内VEGF基因表达水平的影响,为红景天临床防治糖尿病心血管病变提供实验依据。经检索国内外文献未见此方面报道,为本课题的显着创新点。
参考文献：
[1]. 仙贞片对糖尿病大鼠肾保护作用的实验研究[D]. 唐代屹. 中国协和医科大学. 2001
[2]. 仙贞片对糖尿病大鼠肾皮质终末期糖化终产物及其受体mRNA表达的影响[J]. 唐代屹, 郭赛珊, 孙仁宇. 中国中西医结合杂志. 2005
[3]. 糖尿病大鼠心肌及主动脉糖基化终产物受体mRNA表达及仙贞片对其影响的实验研究[D]. 潘明政. 中国协和医科大学. 2001
[4]. 中药红景天对高糖条件下大鼠心肌微血管内皮细胞及其生长因子作用的实验研究[D]. 李娜. 中国协和医科大学. 2010