芦永福 郜 茜 王 昀
青海大学附属医院消化内科 青海 西宁 ８１０００１ 基金项目:青海省(应用)基础研究计划项目２０１２－Z－７２７
【中图分类号】R３６５【文献标识码】B 【文章编号】１００１－５３０２(２０１５)０９－０７０９－０２
胃癌的发生是一个多因素、多步骤、多阶段的过程,其发病机制尚有许多未明之处.新近研究显示,Ack１的表达、激活与肿瘤的发生侵袭转移等过程相关[１].SLP－２是一种外周膜蛋白,张立勇[２]等发现SLP－２在食管癌等多种癌组织中高表达,可能是一个新的致癌基因.本组病例旨在探讨SLP－２、Ack１在胃癌中的表达及意义. １ 材料与方法
１．１ 一般资料选取青海大学附属医院２０１０~２０１５年间经胃镜并手术和病理确诊的胃癌患者９０例,其中男性５５例,女性３５例,平均年龄５０．１４±３．２７岁,收集同期非肿瘤手术标本３０例为正常对照组.入选病例临床资料完整,术前均未接受化疗、放疗和生物治疗. １．２ 试剂SLP－２、Ack１多克隆兔抗人抗体均购自Sigma公司;mRNA 提取试剂Trizol购自Ambion公司;RT２cDNAsysnthesiskit、RT２SYBRqPCR mix和引物的合成由Qiagen提供.免疫组化试剂盒、DAB显色液和PBS购自武汉三鹰和博士德公司. １．３ 试验方法
１．３．１ real－timePCR 严格按说明书操作,Ack１、SLP－２和１８s的引物为美国Qiagen公司预制定量PCR专用引物.ABI５７００型实时荧光定量PCR仪监测记录数据.△Ct值＝目的基因Ct值﹣ 内参基因Ct值,△△Ct＝△Ct癌组织﹣△Ct癌旁组织.１．３．２ 免疫组织化学染色 采用即用型二步法免疫组化染色,按说明书进行染色,以PBS代替一抗作为阴性对照.１．３．３ 染色结果判定 判定标准SLP－２阳性反应为细胞膜、细胞质呈黄色.根据染色强度和阳性细胞数分为四个等级:无色０分、淡黄色１分、棕黄色２分、棕褐色３分.阳性染色的范围定义为:阳性细胞＜１％为０分、１％~２４％ 为１分、２５％~４９％为２分、５０％~７４％为３分、７５％~１００％为４分.将上述两个独立的评分得分相乘得到该病例的染色系数,在本研究中经统计学界定, 将SLP－２的染色系数≥８定义为阳性(高表达),０－７定义为阴性表达.Ack１ 蛋白阳性反应为细胞质中呈棕黄色着色,无着色为阴性.阳性细胞数≤２５％ 为１分,２６％~７５％为２分,﹥７６％为３分,将胞质表达(０~１分)定义为阴性,(２~３分)定义为阳性.
１．４ 统计方法采用SPSS１６．０统计软件分析.计量资料数据以X±s表示,mRNA 在胃癌和癌旁组织中相对表达采用非参数检验;三组间比较采用F检验,两组间比较采用t检验.
２ 结果２．１ SLP－２、Ack１mRNA 在胃癌和癌旁组织中的表达Ack１、SLP－２mRNA 在胃癌组织中的表达高于癌旁,具有统计学差异(t 值２．２１,P＜０．０１),二者在正常组织中无表达;相关性分析显示二者在胃癌中的高表达具有明显正相关性(r＝０．４８４,p＜０．０１). ２．２ Ack１、SLP－２蛋白在胃癌中的表达明显高于癌旁组织(P＜０．０５),两者在正常组织中无表达,其中Ack１蛋白阳性表达颗粒位于肿瘤细胞的胞质中,SLP－２蛋白阳性表达颗粒位于胞质和胞膜中,见图. ２．３ Ack１、SLP－２蛋白的高表达与肿瘤临床病理因素间的关系Ack１在胃癌中的高表达与肿瘤分化程度和临床分期相关(P＜０．０５),SLP－２的高表达与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移和局部浸润相关(P＜０．０５); 二者均与性别、年龄、肿瘤发生部位及是否有肝转移无关.
表２ SLP－２和Ack１蛋白在胃癌中高表达与胃癌临床病理因素之间的关系(X±s)
图(×４００)Ack１表达:１胃癌组织中高表达,２癌旁组织中高表达;SLP－２ 表达:３胃癌组织中高表达,４癌旁组织中高表达３ 讨论Ack１是促进酪氨酸激酶生长的基因家族中的成员,具有催化底物蛋白酪氨酸残基磷酸化、激活底物酶活性的功能[３].研究显示,Ack１与细胞增殖、黏附、细胞骨架重组及细胞吞饮等生物学行为相关,同时具有癌基因的作用,参与肿瘤的发生、侵袭、转移等过程[４、５].在鳞癌和乳腺癌中均高表达,与肿瘤的淋巴转移关系密切,高表达的患者预后差,与肿瘤转移能力相关[６].同时Ackl 在晚期肿瘤中的表达高于早期肿瘤,提示Ackl在恶性肿瘤的侵袭转移过程中起了很大作用[７].本组试验结果显示,Ack１的高表达与肿瘤临床分期和分化程度相关,中晚期肿瘤和恶性程度高者Ack１的表达量相对升高.SLP－２是stomatin家族的新成员,其基因定位于９p１３,１,具有家族共有的一致序列,但不具有N 端跨膜区域,SLP－２具有N－十四(烷)酰化位点,提示它具有其他家族成员类似的膜关联功能.SLP－２的亚细胞定位可能是细胞质和细胞膜[８],作为内膜蛋白,可能参与线粒体的某些功能,与人类恶性肿瘤有关.新近研究发现在食管癌[２]、喉癌及乳腺癌[１２]等中表达上调,并可能与肿瘤的过度生长和增值、肿瘤的分化以及转移有关.
本组结果显示,SLP－２ 在胃腺癌中高表达,与进展期胃癌的淋巴转移、临床分期密切相关,与文献报道一致[２、９],同时发现SLP－２的高表达与肿瘤大小、局部浸润关系密切,进一步提示SLP－２在肿瘤发展和转移过程中起着重要作用. 本组研究发现在进展期胃癌中SLP－２和Ack１mRNA 表达水平呈明显正相关,提示在胃癌的发生、发展过程中二者的高表达可能存在着一定的正反馈机制,使得肿瘤恶性程度增高,加速了肿瘤的侵袭和转移,导致预后差,这有待于深入研究.检测Ack１、SLP－２有助于判断胃癌发展、转移和预后,为制定个体化治疗提供了一定实验依据.
参考文献[１] MahajanK,MahajanNP．ACK－１/TNK２tyrosinekinase:molecular[ signalingandevolvingroleincancers．Oncogene．２０１４Oct２７． ２] 张立勇,王涛,丁芳,等．SLP－２基因在食管鳞癌中的差异表达以及其生物信息学分析．世界华人消化杂志,２００４,１２(７):１５１７—１５２１．[３] ChuaBT,LimSJ,ThamSC,etal．SomoticmutationintheACK,ubiquＧitionassociationdomainenhancesoncogenicsignalingEGFRregulation[ inrenalcancerderivedcell[J]．MolOncol,２０１０,４(４):３２３－３４． ４] UrenaJM,LaTorreA,MartinezA,etal．Expression,synapticlocalizaＧtion,and developmental regulation of Ack１/Pyk１,a cytoplasmictyrosinekinasehighlyexpressedinthedevelopingandadultbrain[J]．J[ CompNeurl,２００５,４９０(２):１１９－１３２． ５] Prieto－EchagueV,GucwaA,CraddockBP,etal．Cancer－associatedmutationsactivatethenonreceptortyrosinekinaseAck１[J]．JBiolChem,[ ２０１０,２８５(１４):１０６０５－１０６１５． ６] Mahajan K,Coppola D,ChallaS,etal．Ack１ mediated AKT/PKBtyrosine１７６phosphorylationregulatesitsactivation[J]．PLoSOne,２０１０,[ ５(３);e９６４６． ７] vanderHorstEH,DegenhardtYY,StrelowA,etal．Meta－StaticpropertiesandgenomicamplificationofthetyrosinekinasegeneACKl[J]．Proc．[ Natl．Acad．Sci．USA．２００５;１０２:１５９０１－１５９０６． ８] JohnJP,AnratherD,PollakA,etal．Massspectrometricalverificationofstomatin－likeprotein２(SLP－２)[J]．prinarystructureproteins,[ ２００６,６４(２):５４３－５５１． ９] 曹文枫,张立勇,张斌,等．SLP－２基因在喉鳞状细胞癌和乳腺浸润性癌组织中的表达及其与预后的关系．中华病理学杂志,２０１０,３(５):３３２－３５７．
论文作者:芦永福 郜茜 王昀
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年9月供稿
论文发表时间:2016/2/29
标签：胃癌论文; 肿瘤论文; 组织论文; 阳性论文; 蛋白论文; 细胞论文; 基因论文; 《中国综合临床》2015年9月供稿论文;