云南省腾冲市妇幼保健计划生育服务中心 云南腾冲 679100
摘要：目的 分析乙肝病毒DNA（HBV-DNA）的荧光定量PCR（FQ-PCR）检测对临床诊断的意义 方法 对我院2015年3月到2016年3月收治的420名乙肝患者作为研究对象，抽取420名患者的临床血清标本通过ELISA法进行定性检测，根据乙肝两对半定性结果进行分组，最后采用荧光定量PCR技术进行定量检查。结果 95份乙肝病毒标志物HBsAg、HBeAg、HBcAb标本中有89份 HBV-DNA为阳性，阳性率为93.7%，荧光定量PCR拷贝数为（4.19±1.16）×10 7 /ml；130份乙肝病毒标志物 HBsAg、HBeAb、HBcAb标本有92份HBV-DNA阳性，阳性率达到71.7%，荧光定量PCR拷贝数为（4.73±2.49）×10 5/ml；38份乙肝病毒标志物HBsAg、HBcAb标本中有13份 HBV-DNA为阳性，阳性率为34.2%，荧光定量PCR拷贝数为（2.13±1.37）×10 4/ml；75份乙肝病毒标志物 HBsAb的标本HBV-DNA阳性23例，阳性率为3.1%，荧光定量PCR拷贝数为（6.07±0.86）×10 3；82份乙肝病毒标志物全阴性的标本 HBV-DNA阳性11例，阳性率为1.3%，荧光定量PCR拷贝数（2.77±0.79）×10 4 /ml.结论 荧光定量PCR测定 HBV DNA在多种模式的乙肝病毒标志阳性血清或阴性血清都可查出，能较真实反映体内HBV感染、复制和病毒载量情况， 具有一定的临床早期诊断的价值。
关键词：乙肝病毒；荧光定量；聚合酶联反应
我国是病毒性肝炎高发地区。全世界乙肝病毒抗原携带者约3.5亿，其中我国1亿左右。乙型肝炎的传染源主要是急、慢性乙型肝炎患者和病毒携带者。其中慢性患者和病毒携带者作为传染源的意义最大，其传染性与体液中HBV DNA含量成正比关系。早起发现并诊断慢性患者和病毒携带者体内DNA含量对于防止乙型肝炎的传染具有重大意义[1-4]。HBV DNA是病毒复制和传染性的直接指标，聚合酶链反应（PCR）技术灵敏，定性方法对临床诊断有帮助，但易因实验室污染出现假阳性。定量方法如荧光定量技术、分支链信号扩大技术（bDNA）等对于判断病毒复制程度，传染性大小，抗病毒疗效等有重要意义。为此选取我院420名乙肝患者作为研究对象，研究乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测技术对临床诊断的意义，取得满意效果，现报道如下。
1.资料与方法
1.1 临床资料
选取我院2015年3月到2016年3月收治的420名乙肝患者作为研究对象，其中男性男性患者252人，女性患者168人，年龄范围为32~67岁。检测所用的 FQ-PCR 试剂盒由上海捷瑞生物工程有限公司提供，ELISA试剂盒由广州润坤生物科技有限公司提供。
1.2 方法
1.21 研究对象血清标本的采集 使用灭菌一次性带盖塑料管，抽取清晨空腹静脉血 5 m l，离心、分离，于-20 ℃下冰冻保存，最后进行集中检测。
1.22 乙肝病毒标志物检查 按照由由广州润坤生物科技有限公司提供的ELISA试剂盒说明，对采集保存的患者血清进行乙肝病毒表明标志物的检查，并分组标号。
1.23 乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测
按上海捷瑞生物工程有限公司提供的试剂盒操作方法进行乙肝病毒DNA荧光定量PCR的检测。首先将已经分组的乙肝病毒标志物标本，分别与标准品加入反应液，之后放入荧光定量仪中进行扩增，扩增45个循环，最后做乙肝病毒定量分析与数据读取，结果 <1.00×10 3 拷贝/m l 为阴性。实验设施及实验操作流程均严格按照《临床基因扩增（PCR）诊断实验室工作规范》要求进行实验与检测。
1.3 统计学方法
根据乙肝病毒表面标志物分为5组，将数据进行对数转换，运用SPSS19.0软件进行统计分析，计量资料采用t值检验，检验标准a=0.05，当P<0.05表示有统计学意义。
2.结果
由患者提供的血清分别进行乙肝病毒表面标志物与乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测后，得到的数据进行统计学分析，在多种模式的乙肝病毒标志阳性血清或阴性血清都可查出，差异有统计学意义（P<0.05）[5]。
为方便统计，将乙肝病毒标志物HBsAg、HBeAg、HBcAb标本记为1组、乙肝病毒标志物 HBsAg、HBeAb、HBcAb标本记为2组、肝病毒标志物HBsAg、HBcAb标本记为3组、乙肝病毒标志物 HBsAb的标本记为4组、乙肝病毒标志物全阴性的标本记为5组
3.讨论
我国是乙肝高发地区，全世界HBsAg携带者约3.5亿，我国大约1亿左右。在乙型肝炎的传染源中，慢性患者和病毒携带者意义最大，其传染性与体液中乙肝病毒DNA含量成正比。抗HBs阴性者均为易感人群，早日诊断乙肝患者和病毒携带者对于乙型肝炎的防治具有重大的意义。除常规实验室检查，比如血常规、尿常规、肝功能检查、甲胎蛋白和评价纤维化指标的检测等，进行病原学检查是更为有力的证据[6-7]。用ELISA法检测乙肝病毒表面标志物和对体内血清进行乙肝病毒抗体检测，可以反映乙肝病毒是否存在及其复制活跃程度和传染性。HBV DNA是病毒复制和传染性的直接指标，荧光定量PCR技术检测乙肝病毒DNA，对于临床判断HBV复制程度、传染力强弱、和指导药物治疗有重大意义。
本实验选取我院420名乙肝患者，进行乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测，试验结果显示，运用荧光定量技术对于临床判断HBV复制程度、传染力强弱等具有很大意义，数据具有统计学意义（P<0.05），有指导临床早期诊断和用药方针的实用价值。
参考文献：
[1] 赖宏芳，付晓野，董玉琳，等.荧光探针定量 P C R检测 H B V - D N A[ J ].上海：上海医学检验学杂志，2000，15（1）：18- 19.
[2] 何印蕾.乙肝患者血清前 S1 抗原检测及其临床价[ J ].右江医学，2005，33（2）：154- 155
[3]程钢，何蕴韶，周新宇，等.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒[ J].中华医学检验杂志，1999，22（3）：13.
[4] 谢志贤，董莹，艾桂萍，等.乙肝病毒 DNA 与乙型肝炎表面抗原含量关系的探讨[ J].陕西医学检验，2000，15（2）：49.
[5] 陈凤萍，沈云峰，吴瑶，等．３３５例乙型肝炎患者血清 ＨＹＶ－ＤＮＡ定量与乙肝病毒标志物的相关性分析［Ｊ］．江汉大学学报：自然科学版，２０１２，
４0（５）：９ ３ － ９ ５．
[6] 唐芳玫。乙型肝炎病毒 ＤＮＡ 与血清标志物的关系［Ｊ］．检验医学与临床，２０１０，７（１）：２８－２ ９．
[7] 周丽敏 ．乙肝病毒标志物 ２４３１ 例检测模式汇总及分析［Ｊ］．临床和实验医学杂志，２０１２，１１（１）：６ ５－６７．
论文作者:许建助
论文发表刊物:《健康世界》2017年第1期
论文发表时间:2017/2/27
标签：乙肝病毒论文; 定量论文; 荧光论文; 阳性论文; 血清论文; 标本论文; 标志物论文; 《健康世界》2017年第1期论文;