摘要：建立一个用HPLC对诺氟沙星胶囊生产设备清洁验证检测方法的研究，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ；以0.025mol/L磷酸盐缓冲液-乙腈（87:13）为流动相；检测波长为278nm进行检测。结果：该方法中定量限为0.2224ng，检测限为0.1112 ng，得线性回归方程：y=153.42x-3.1432（r2=1），相关系数满足要求，说明诺氟沙星在0.02633μg/ml～26.33μg/ml范围内线性关系良好。结论：该方法简便、准确、可靠，可用于诺氟沙星胶囊生产设备清洁验证检测方法。
关键词：诺氟沙星胶囊；生产设备清洁验证检测方法
根据GMP和《药品GMP指南》对清洁验证化学检验方法的规定，以及诺氟沙星胶囊质量标准和相关文献，本清洁验证检验方法确定为HPLC法，以处方中活性成分诺氟沙星为检测成分。通过对检验方法参数的验证，确保检验方法对被检物质有足够的专属性和灵敏度；确保诺氟沙星胶囊制剂生产设备清洁验证达到预定目的。
1. 检测成分的确定与分析
1.1检测成分的确定：诺氟沙星胶囊为西药制剂，配方中有诺氟沙星、淀粉、二氧化硅、液体石蜡。诺氟沙星胶囊的活性成分诺氟沙星属于抗生素，与辅料相比风险较大，且大多辅料在HPLC测定中不具有代表性。本品中诺氟沙星为有效成分，并且是唯一的主药；所以验证的检测成分确定为诺氟沙星。
1.2残留量：诺氟沙星胶囊设备表面化学残留可接受限度标准，通过生物活性限度（最低日治疗剂量的1/1000）（L1/1000= MTDA,min/ LDSDB,max/10-6×0.001=512.821mg/kg＞10×10-6）和浓度限度（10ppm）两种方法确定。从计算结果可看出，第二法的残留限度严于第一法，所以我们采用以10ppm为标准计算单位面积的残留量。
1.3残留限度：因诺氟沙星胶囊的生产设备清洗溶剂为纯化水。因10ppm≌10μg/ml，诺氟沙星胶囊含量为90.0%～110.0%则淋洗水取样法的残留限度为不得大于0.01mg/ml×110% = 11μg/ml。
2. 方法与结果
2.1对照品储备液的制备：精密称取对照品适量加流动相制成每一毫升含26μg溶液，即得对照品储备液。
2.2对照品溶液的制备：精密称取对照品适量加流动相制成每一毫升含1μg溶液。
2.3供试品溶液的制备：精密称取诺氟沙星胶囊内容物0.01g, 置100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置100mL容量瓶中,加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
2.4 系统适用性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.025mol/L磷酸盐缓冲液（用三乙胺调节pH值至3.0±0.1）-乙腈（87:13）为流动相；检测波长为278nm。理论板数按诺氟沙星峰计算应不低于3000。流速为每分钟1.0mL, 柱温为35℃，进样体积为20μl。试验结果表明分离度R＞1.5；理论塔板数：按诺氟沙星峰计＞3000，说明系统适用性满足标准规定要求。
2.5专属性：分别取清洗剂、溶剂、对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果为清洗剂和溶剂无诺氟沙星色谱峰，供试品溶液色谱图与对照品溶液色谱峰保留时间一致。说明专属性好。
2.6定量限和检测限：定量限以10倍信噪比计算，检测限以3倍信噪比计算。当对照品浓度为0.01μg/mL时信噪比为11.7，所以计算得定量限为0.2224ng，检测限为0.1112 ng。
2.7线性与范围：精密吸取对照品储备液2.1溶液0.1mL、1mL、0.5mL、1.0mL、5.0ml分别至100mL、100mL、10mL、10mL、10mL容量瓶内，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，即得6个不同浓度的对照品溶液。取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以测得诺氟沙星峰面积作为纵坐标，浓度作为横坐标，绘制标准曲线。得线性回归方程y=153.42x-3.1432（r2=1），相关系数满足要求，说明诺氟沙星在0.02633μg/ml～26.33μg/ml范围内线性关系良好。
2.8 精密度：精密取对照品溶液20μl，按测定方法重复进样6次，测定峰面积值为164.8、164.7、164.6、164.1、164.6、164.9，并求得RSD为0.17%，相对标准偏差RSD≤2%，说明精密度良好。
2.9准确度：分别制备供试品溶液9份，每三份分别加标50%、100%和150%三个加标水平的对照品，取20μl注入高效液相色谱仪，计算得平均值回收率为93.23%，相对标准偏差RSD为1.43%；加样回收率≥75%；相对标准偏差RSD≤10%；说明准确度良好，如表1。
2.10 稳定性：分别吸取对照品溶液和第0h、6h、12h、24h、36h、48h供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果为平均含量（0h～48h）为74.31%；RSD为0.98%，含量的RSD≤5%。说明该样品溶液在常温、常湿，未避光保存下，经长时间（48h）放置，其性状和有效成分的含量无变化。
2.11取样方法和取样回收率
2.11.1 取样方法：用棉球擦拭法取样，根据取样部位大小，分别将4个棉球分别用75%乙醇溶液湿润，每个棉球擦拭取样25cm2，共擦拭取样100 cm2。
2.11.2取样回收率：在不锈钢板上选择4块面积25cm2方块，分别取3个浓度的供试品液适量均匀涂布于钢板方块上，在室温下干燥过夜；分别取4个棉球放入75%乙醇润湿，按取样方法取样，擦拭完后，加流动相超声溶解，过滤，即得回收率溶液。取4支空白棉球，照上述方法不加样品进行擦拭取样，溶解，过滤，即得空白溶液。分别取对照品溶液、空白溶液、供试品溶液和回收率溶液各20μl，注入液相色谱仪，计算回收率为67.39%≥50%；相对标准偏差RSD为6.36%≤20%，说明棉球擦拭取样回收率满足标准规定要求。
3.结论
3.1 通过高效液相色谱法测定诺氟沙星胶囊中诺氟沙星的定量限、检测限、专属性、精密度、准确度、线性、范围、样品溶液稳定性、系统适用性等参数的验证，其结果均符合规定要求，验证项目均达到规定限度，因此诺氟沙星胶囊生产设备清洁验证的清洁质量控制检验方法确定为高效液相色谱法。
3.2 该方法的检测定量限为0.2224ng，检测限为0.1112 ng。线性回归方程y=153.42x-3.1432（r2=1），相关系数满足要求，说明诺氟沙星在0.02633μg/ml～26.33μg/ml范围内线性关系良好。
3.3因诺氟沙星胶囊的生产设备清洗溶剂为纯化水。因10ppm≌10μg/ml，诺氟沙星胶囊含量为90.0%～110.0%则淋洗水取样法的残留限度为不得大于11μg/ml。
3.4通过对检验方法参数的验证，确保检验方法对被检物质有足够的专属性和灵敏度；确保诺氟沙星胶囊制剂生产设备清洁验证达到预定目的。证明采用的检验分析方法适合清洁残留物限度相应的检测要求，确保所采用的检验方法能够可靠有效地控制残留物，准确评价设备的清洁效果，证明清洁程序的有效。验证结论的准确性与完整性，是验证的核心。清洁检验方法的验证是保证清洁验证结论完整可靠的关键。
参考文献
[1].《中国药典》二部2015版附录药品质量标准分析方法验证指导。
[2].《药品生产质量管理规范》（2010年修订）。
[3].《药品GMP指南》（2010年修订）。
[4]. 诺氟沙星胶囊质量标准。
论文作者:高泽清,陈宇 李选宏
论文发表刊物:《医师在线（学术版）》2019年第13期
论文发表时间:2019/9/4
标签：诺氟沙星论文; 溶液论文; 胶囊论文; 清洁论文; 生产设备论文; 回收率论文; 棉球论文; 《医师在线（学术版）》2019年第13期论文;