王金福[1]2002年在《鸡输卵管囊肿衣原体MOMP基因克隆、序列测定及斑点杂交检测》文中提出本试验首先对内蒙古地区分离的鸡输卵管囊肿衣原体进行培养试验，分别接种5—7日龄SPF鸡胚、L~(929)、Vero、BHK_(-21)细胞培养观察，结果表明该衣原体分离株仅能引起个别SPF鸡胚死亡，且死亡无规律性，叁种细胞对其敏感性强弱依次为L_(929)＞Vero＞BHK_(-21)细胞。其次，根据国外报道的禽衣原体MOMP基因两端保守序列设计合成一对引物，以提取的衣原体基因组DNA为模板，PCR扩增、克隆了MOMP基因，并对其进行了测序。最后，用地高辛随机引物法标记成MOMP基因核酸探针，斑点杂交检测衣原体基因组DNA，灵敏度可达10pg，且不能检出其它病原体的核酸。将核酸探针法与补体结合反应法对衣原体感染的诊断进行比较，初步证明该探针具有较高的敏感性与较强的特异性。
李肇增, 王金福, 哈斯·阿古拉, 闫红霞, 关平原[2]2002年在《鸡输卵管囊肿衣原体MOMP基因的克隆、序列测定及核酸探针的制备》文中研究指明以内蒙古地区鸡输卵管囊肿病病鸡中分离出的衣原体为材料.接种于80枚5-7日龄SPF鸡胚卵黄囊内.并分别感染L929、Vero、BHK21。细胞,增殖,提纯衣原体,提取DNA。依据国外禽衣原体MOMP基因的保守序列设计并合成了一对引物上游引物(P1):5‘GCTGGATTCCATGAAAAAATCTTGAAATCGGCAT3’.下游引物(P2):5‘CGACTGCAGTTAGAATCTGAATTGAG"CATTCAT 3’。以所提取到的衣原体DNA为模板经PCR扩增.并克隆于质粒PUCM-T后.重组子转化于大肠杆菌DH5a中.PCR扩增产物经PEA及电脉分析证明.所获得的目的基因成功克隆于载体之中.该片段为1.17kb的MOMP基因。采用随机引物标记法.用地高辛标记了MOMP基因核酸探针.用斑点杂交法检测衣原体MOMP DNA的灵敏度可达10pg。检测鸡新城疫病毒,传染性支气管炎病毒.大肠杆菌、沙门氏菌.巴氏杆菌等核酸均不敏感。与补体结合反应法对比.证明该探针具有较高的敏感性与较好的特异性。用SPF鸡胚接种衣原体.传6代.4-10天死亡的鸡胚较少且无规律。叁种细胞系感染衣原体。传3代.其易感性依次为L929>Vero>BHK21。该核酸探针将用于疾病的诊断及病理学研究。
参考文献：
[1]. 鸡输卵管囊肿衣原体MOMP基因克隆、序列测定及斑点杂交检测[D]. 王金福. 内蒙古农业大学. 2002
[2]. 鸡输卵管囊肿衣原体MOMP基因的克隆、序列测定及核酸探针的制备[C]. 李肇增, 王金福, 哈斯·阿古拉, 闫红霞, 关平原. 中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集. 2002