（江苏省苏州眼耳鼻喉科医院）
摘要：目的 研究老年性白内障晶状体上皮与透明晶状体上皮内蛋白酶体活性差异对老年性白内障发生发展中的影响。方法 选取在我院进行超声乳化和人工晶状体置入的白内障晶状体囊膜52例和透明晶状体囊膜7例作为本次研究对象，将所有晶状体囊膜进行检查。反复冻融囊膜让细胞脱落，从溶液中将囊膜去除，在各组样品中加入人工合成的特异性多肽Suc-Lec-Lec-Val-Tyr-AMC和Boc-Bal-Gly-Arg-AMC，在不同时间检测荧光强度。结果 白内障组患者的晶状体上皮蛋白酶体活性要明显低于透明晶状体组，P＜0.05；非皮质型晶状体上皮糜蛋白酶样梅活性与皮质型白内障无明显差异，P＞0.05；MG-132具有抑制蛋白酶体活性的作用。结论 白内障患者晶状体上皮内蛋白酶体的胰蛋白酶样酶活性以及糜蛋白酶样酶活性均要低于透明晶状体，蛋白酶体活性降低与白内障的形成有密切关系。
【Abstract】 Objective：to study the age-related cataract lens epithelial and transparent lens epithelial proteasome activity within the difference of its influence in the development of age-related cataract.Methods：in our hospital were selected ultrasonic emulsification and cataract intraocular lens embedded in capsule membrane 52 cases and transparent lens capsule membrane 7 cases as the research object，will check all of the lens capsule membrane.Repeated freezing and thawing capsule membrane cell falls off，will capsule membrane removal from the solution and add the specificity of the synthetic peptide in each sample Suc - Lec - Lec - Val - Tyr - AMC and Boc - Bal - Gly - Arg - AMC，detection of fluorescence intensity at a different time.Results：cataract patients lens epithelial proteasome activity significantly below the transparent lens group，P < 0.05；Non leather sample lens epithelial chymotrypsin mei activity and no difference between the type of cortical cataracts，P > 0.05；The role of MG - 132 with inhibition of proteasome activity.Conclusion：in patients with cataract lens epithelial sample trypsin enzyme activity of protease agents and chymotrypsin sample or enzyme activity than transparent lens，proteasome activity has close relationship with the formation of cataracts.
关键词：老年性白内障；晶状体上皮；蛋白酶体活性
晶状体蛋白的完整性和在晶状体纤维中排列是保持晶状体透明性的重要环节。随着年龄的增长，晶状体中异常的蛋白质会不断的增加[1]。蛋白酶体是一个非常大的蛋白酶复合体，它能够水解正常和异常蛋白质的能力，同时还能够调节细胞周期、凋亡和信号传导[2]。本文对比了白内障晶状体和透明晶状体上皮内蛋白酶体活性之间差异，现将结果报告如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取在我院进行超声乳化和人工晶状体置入的白内障晶状体囊膜52例和透明晶状体囊膜8例作为本次研究对象，将所有晶状体囊膜进行检查。白内障患者在术前进行裂隙灯检查，将52例患者分成皮质型35例和非皮质型37例。
1.2 研究方法
白内障患者在进行超声乳化术和人工晶状体置入术前获得晶状体前囊膜，所有晶状体的获得都由相同一位操作熟练的医生完成。囊膜直径5.0mm。将前囊膜取下后理科放入由20M硼酸、1mMEDTA、3mMNaN3（A）的缓冲液中，置入-20℃的环境中保存。透明晶状体是在显微镜下取得，直径5.0mm，放入上述缓冲液中保存。所有囊膜均保存2个月。在处理囊膜时，应该将所有的晶状体囊膜收集在一起，反复冻溶3次，一边溶解一边轻轻吹打，脱离囊膜上的细胞，在缓冲液中逐渐去除囊膜。使用BCA法检测蛋白浓度。
特异性底物处理：使用100％、6％二甲基亚砜、人工合成的特异性多肽Suc-Lec-Lec-Val-Tyr-AMC（LLVY）和Boc-Bal-Gly-Arg-AMC（VGR）配置溶液，MG-132和100％二甲基亚砜制成10ml储存液。Suc-Lec-Lec-Val-Tyr-AMC使用缓冲液稀释，让反应液的浓度达到0.2mM，VGR的浓度0.5mM，MF-132的浓度为0.1mM。
蛋白媒体活性测量：不同样品的蛋白酶体的活性在室温下测试，将500μl样品和同等质量的特异性底物混合，使用荧光分光光度计测量裂解产物，观察i荧光强度变化。
1.3 统计学方法
使用统计学软件SPSS21.0进行分析，采用方差分析，应用t检验，P＜0.05时说明有意义。
2 结果
白内障组患者的晶状体上皮蛋白酶体活性要明显低于透明晶状体组，P＜0.05，见图1；非皮质型晶状体上皮糜蛋白酶样梅活性与皮质型白内障无明显差异，P＞0.05，见图2；MG-132属于蛋白酶体特异性抑制剂，具有抑制蛋白酶体活性的作用，本次研究中，在加入MG-132后，三组晶状体均无法检测到LLVY产生的荧光，说明糜蛋白酶样酶活性受到明显的抑制。
3 讨论
蛋白酶体是一种桶形蛋白酶复合体，具有蛋白质降解的能力。蛋白酶体有糜蛋白酶样、胰蛋白酶样、天冬氨酸特异性蛋白水解酶样等[3]。本次研究中使用的LLVY能够被蛋白酶体中的糜蛋白酶样酶活性特异水解，而VGR能够被胰蛋白酶样酶活性水解[4]。老年白内障的形成机制比较复杂，是一种由多种因素共同作用产生的结果，临床表现也多种多样。有学者认为，经过翻译后修饰的晶状体蛋白质会聚集在晶状体中是造成老年性白内障的主要原因之一[5]。蛋白酶体在细胞内蛋白质降解过程中扮演着重要角色，无论是晶状体上皮，还是晶状体纤维内都存在蛋白酶体[6]。蛋白酶体异常降解会降低蛋白质的功能，使得异常蛋白大量堆积在晶状体中，影响晶状体的透明程度而形成白内障[7]。国外学者Ahmed Gabr研究发现[8]，caplain的表达量在皮质型和非皮质型白内障晶状体着各有不同，且LLVY也属于caplain的作用底物。所以本次研究中将白内障晶状体分成皮质组和非皮知足，结果显示两组的荧光强度无区别，加入MG-132能够一直LLVY水解产生的影响，说明荧光是由蛋白酶体水解产生的。
综上所述，白内障患者晶状体上皮内蛋白酶体的胰蛋白酶样酶活性以及糜蛋白酶样酶活性均要低于透明晶状体，蛋白酶体活性降低与白内障的形成有密切关系。
参考文献
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[8]Ahmed Gabr.Pseudoexfoliation cataract：possible systemic associations[J].Delta Journal of Ophthalmology，2016，（3）：269.
论文作者:陈正华
论文发表刊物:《航空军医》2018年15期
论文发表时间:2018/10/31
标签：晶状体论文; 蛋白酶论文; 白内障论文; 活性论文; 皮质论文; 透明论文; 特异性论文; 《航空军医》2018年15期论文;