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摘要：目的 验证HPLC法测定注射用前列地尔杂质前列腺素A1的方法。方法 采用 C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，以乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（pH4.9）（40：60）为流动相，检测波长为214nm。结果 方法的专属性及耐用性良好；在前列腺素A1进样量为14.55～232.80ng范围内与色谱峰面积线性关系良好；平均回收率在99.6%～101.5%之间，相对标准差RSD为0.65%。结论 本方法简便、快速、灵敏，可有效检测前列腺素A1。
关键词：前列地尔；前列腺素A1；HPLC
前列地尔是一种疗效确切的血管扩张药，是一种人体生理物质，有抑制血小板聚集、血栓素A2生成、动脉粥样脂质斑块形成及免疫复合物的作用，并能扩张外周和冠脉血管。本研究拟对高效液相色谱法测定注射用前列地尔的有关物质前列腺素A1方法学的专属性进行验证。
1 仪器与试药
仪器：Agilent 1200 高效液相色谱仪；色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；前列地尔对照品：中国食品药品检定研究院 140659-201203；前列腺素A1对照品：中国食品药品检定研究院 140790-201001；注射用前列地尔：杭州澳亚生物技术有限公司 13102023、13103123、13103125。
2 方法与结果
参照《中国药典》2010年版二部注射用前列地尔标准的前列腺素A1检查项色谱条件进行。
2.1色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（pH4.9）（40：60）为流动相；检测波长为214nm；进样量为50μl。
2.2 供试品溶液的制备 取本品适量，加25%乙醇溶液溶解并稀释制成每1ml中约含前列地尔0.1mg的溶液，作为供试品溶液。
2.3 对照溶液的制备 取前列腺素A1杂质对照品适量，精密称定，用25%乙醇溶液溶解并稀释制成每1ml中约含3μg的溶液，作为杂质对照品溶液。
2.4测定波长的选择 前列腺素A1和注射用前列地尔在波长范围为190nm～400nm进行紫外扫描，并在214nm处测定吸光度，显示在214nm处有吸收。
2.5 专属性试验
2.5.1 酸破坏试验：取注射用前列地尔样品1支，加入0.5ml浓度为0.5mol/L盐酸溶液，放置30分钟后，加入0.5ml浓度为0.5mol/L氢氧化钠溶液，混匀，中和，立即精密量取 50μl，注入液相色谱仪；
2.5.2 碱破坏试验：取注射用前列地尔样品1支，加入0.5ml浓度为0.01mol/L氢氧化钠溶液，放置5分钟后，加入0.5ml 浓度为0.01mol/L盐酸溶液，混匀，中和，立即精密量取 50μl，注入液相色谱仪；
2.5.3 氧化破坏样品：取注射用前列地尔样品1支，加入1ml浓度为35%H2O2溶液，放置10分钟，立即精密量取 50μl，注入液相色谱仪；
2.5.4 光照破坏样品：取注射用前列地尔样品1支，加25％乙醇溶液溶解，放置在（4500±500lx）的灯光下照射24 h，立即精密量取 50μl，注入液相色谱仪。
2.5.5 高温破坏样品：取注射用前列地尔样品5支，加25％乙醇溶液定容至5ml，放置水浴中加热4 h，立即精密量取 50μl，注入液相色谱仪。
另取适量辅料同法处理，记录色谱图
结果：本品溶液经酸、碱、氧化、光照、高温条件下产生的前列腺素A1杂质峰与主峰有效分离，而辅料对于有关物质（前列腺素A1）的检查无干扰。表明该法对于检测本品的有关物质（前列腺素A1）及其本品稳定性试验考察产生的降解产物（前列腺素A1）是可行的。
2.6 溶液稳定性试验 精密称取前列腺素A1 适量，加25%乙醇配制成浓度约为3μg/ml的溶液，参照前列腺素A1项下的方法，分别于0、2、4、6、8、10、12小时取样50μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果：前列腺素A1测定液在12h内的RSD%为0.37%，小于2.0%，本品在12小时内稳定。
2.7前列腺素A1定量限 取前列腺素A1 适量g，加25%乙醇稀释制成浓度约为3μg/ml的溶液，按比例逐步稀释，记录色谱图，按信噪比10：1计算定量限。结果：当信噪比为10.3时，定量限为14.55ng。
2.8前列腺素A1标准曲线与线性范围 取前列腺素A1杂质对照品适量，以25%乙醇为溶剂，制成浓度为3μg/ml的溶液，分别精密量取5、10、20、30、40、50、60、70、80μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以进样量为x轴，峰面积A为y轴，进行线性回归，结果见下图。
结果：各浓度下的平均回收率均在99.63%～101.53%之间，9个回收率数据的相对标准差RSD为0.65%，小于2.0%，使用本方法测定前列腺素A1，准确度高，方法可行。
2.10 前列腺素A1重复性试验 取线性项下配制的前列腺素A1100%浓度的溶液，取50μl连续进样6次。结果：连续进样6次的平均主峰面积为233.04206，RSD为0.3%，说明用HPLC法测定前列腺素A1的精密度良好。
2.11 前列腺素A1检查
取本品1瓶（批号：13102023、13103123、13103125），按上述前列腺素A1测定法进行测定。结果：三批样品前列腺素A1均为0，结果符合规定。
3 讨论
本品的有关物质参照《中国药典》2010年版二部收载注射用前列地尔的有关物质前列腺素A1检查方法进行检查。方法学验证结果表明，方法的专属性、耐用性较好，检测灵敏度较高。该方法简便、快捷，可准确检测注射用前列地尔的有关物质前列腺素A1的量。
参考文献：
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论文作者:田建民1,陈青连1,冯洁2
论文发表刊物:《健康世界》2016年第11期
论文发表时间:2016/7/16
标签：前列腺素论文; 溶液论文; 前列论文; 色谱论文; 色谱仪论文; 注射用论文; 精密论文; 《健康世界》2016年第11期论文;