苏州工业园区星海医院 江苏苏州 215021
【摘要】目的：探讨常规切片的方法改良后，其制片质量在临床中的运用价值。方法：选取我院（2010年1月~2017年6月）存档的65例脂肪组织标本为研究对象，材料为常规组织处理后难以切片的脂肪瘤蜡块；冷冻切片为43例脂肪源性肿瘤，22例术中保乳手术标本。按照制片方法不同分为观察组与对照组，观察组33例，采用改良后的制片方法，对照组32例，采用常规制片方法，观察常规切片方法与改良方法后脂肪组织的制片情况和染色情况。结果：常规的切片方法和冷冻切片方法制作出的切片，脂肪细胞有重叠现象，乳腺组织周边的脂肪组织也有破碎、重叠情况；而改良切片方法后，细胞平整，厚薄均匀，没有出现重叠现象，同时乳腺组织周边的脂肪组织镜下细胞平整，厚薄均匀，没有出现重叠情况。结论：脂肪组织常规切片方法经改良后，能使切片细胞平整，厚薄均匀，无重叠现象，有效提高制片质量。
【关键词】脂肪组织；切片改良；临床价值
脂肪组织是由大量的脂肪细胞构成的，由于其结构比较特殊，同时其还具有很多的油脂成分，所有在制片上，比其他的组织更为困难，特别是在术中冷冻的时候[1]。另外很多病理科在脱腊时也没注意组织的不同，导致切片有大量的空洞、破碎，很难切片，所以，脂肪组织已经被归类为不合适在术中进行活检的一种组织[2]。但实际的手术过程中，又不可避免的会出现脂肪组织，因此不可以逃避这个过程，为了提高脂肪切片的质量，本文结合作者本人在实际工作中的探索发现，对制作脂肪组织常规切片方法进行改良，改进了很多方面，提高了脂肪组织制片质量，报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院（2010年1月~2017年6月）存档的65例脂肪组织标本为研究对象，材料为常规组织处理后难以切片的脂肪瘤蜡块；冷冻切片为43例脂肪源性肿瘤，22例术中保乳手术标本；冷冻切片机选用德国Leica，型号：RM2235。按照制片方法不同分为改良切片组与常规切片组，改良切片组33例，采用改良后的制片方法，常规切片组32例，采用常规制片方法，两组标本相比无明显差异，无统计学意义（P>0.05），可进行对比。
1.2 方法
对照组采用常规进行处理，正常切片和制片；观察组采用改良后的制片方法如下：（1）首先将包埋后的脂肪组织粗修一下，到最大切面即可，然后将其放入冷冻箱里面1-2h，温度保持在零下20℃；（2）取出腊块后立即放于Leica冷冻切片机上，然后沿着先前的粗修方向进行切片，厚度保持在6~8μm；（3）切好后放入温水中展开，温度大约40℃，不能放入乙醇中展片，在裱片以及后面捞片的时候都需要快速，最后进行烤片、脱蜡、染色、封固等常规工作。冷冻切片：（1）按照常规的冷冻剂包埋方法进行包埋，温度保持在零下22℃，完成速冻后首先将脂肪组织进行粗修，暴露其最大面；（2）如冷冻机为双压缩，则开始就将稳温度下降至零下40℃，在粗修完成后需将组织放置5~10min；（3）然后顺着粗修的方向使用Leica冷冻切片机迅速切片，一般情况下这种切片都会有弯曲现象，这时可以利用干净的毛笔来帮助扫平，最后进行染色、封固等常规工作[3]。如果是单压机，须将组织重新放入速冻台，速冻5~10min后，再把厚度调整到10~14μm，后续操作也同上。
1.3 观察指标
观察常规切片方法与改良方法后脂肪组织的制片情况和染色情况。
2 结果
常规的切片方法和冷冻切片方法制作出的切片，脂肪细胞出现了重叠现象，乳腺组织周边的脂肪组织也有重叠、破碎情况，见图1、2；而改良切片方法后，厚薄均匀，细胞平整，无重叠现象，同时乳腺组织周边的脂肪组织镜下厚薄均匀，细胞平整，没有出现重叠情况，见图3、4。
3 讨论
脂肪组织是由大量的脂肪细胞构成的，而其细胞内有聚满脂肪滴，同时有由于其结构比较特殊，所以在常规的脂肪组织制片中，那些试剂很难渗透入其中。同时如果脱水液在很长时间内没有进行更换，很容易导致脂肪组织浸腊、脱水、固定不足，由于包埋组织太过柔软，在切片就容易将其切出空洞，破碎等，很难切片。但实际工作中又需要对其进行切片。所以对制作脂肪组织常规切片的方法加以改良很有必要。熊红梅[4]等人为了提高脂肪组织的切片质量，在日常工作中不断探索，在常规的方法上做了很大的改进，结果制作出的切片无细胞重叠、厚薄完整、切片完整。本研究在脂肪组织常规切片的方法上进行改良，结果改良切片方法后，细胞平整，厚薄很均匀，没有出现重叠现象，同时乳腺组织周边的脂肪组织镜下细胞平整，厚薄很均匀，没有出现重叠情况，与文献研究结果相似。
在实际的工作中，脂肪组织腊块一般都很少，所以一般会将其集中了再处理。而在常规的制片方法中，成批的修切法通常是使用冷台和冰盘来冷冻脂肪腊块，但一般冰盘达不到需要的温度，另外冷台的温度也在零下5℃左右，这种方法不仅延长了冷冻时间，还加厚了切片厚度。虽然这样的切片会更完整，但是由于其在切片机上停留时间的延长，也会导致组织变软，不利于切片，切出来也不够完整，只有前面几张会较为完整。而本研究，将常规切片方法进行改良，首先将腊块进行粗修，然后将其放入零下20℃的冷冻箱里面1-2h，这里就将常规的冷冻时间延长了30~80min，凝固了脂质，更利于切片。
冷冻切片是通过低温，让组织标本内的水分形成小冰晶，由于小冰晶很多，众多小冰晶集合在一起就会增加整个组织标本的硬度，在切片时能更好的切片[5]。但是脂肪大多是由脂肪细胞构成的，只有少部分的结缔组织，而脂肪细胞又是由脂滴组成，所以其含水量少到可以忽略不计，而虽然结缔组织具有水分，但也很稀少，所以对于脂肪组织来说，很难对其进行冰冻僵硬。一般的组织标本，在零下20℃左右之时就变得僵硬，很利于切片，切片也很完整，但是脂肪标本，即使处于零下20℃，也会是柔软的，对于镜检的要求很不符合，就算处于零下30~40℃其按照以往的方法也很难进行切片，易空洞，破碎。为了更好的切片，作者先将脂肪组织放入零下22℃的速冻台进行速冻，变硬后快速取出进行粗修，然后又迅速将其放入速冻台进行速冻，然后在增加切片厚度的同时进行切片，此时的切片就很完整均匀，是理想的切片。
另外作者认为在进行切片的时候还需要注意以下几点：（1）由于脂肪组织油脂过多，所以冷冻时间应该延长；（2）脂肪组织蜡切片和冷冻切片都不能太薄、太厚，最好是腊切片6~8μm，冷冻切片10~14μm；（3）再用冷冻切片机进行切片时，需要快速切片，以避免细胞堆积;(5)切片时应观察原来的粗修方向，切片时也跟着粗修的方向进行。
综上所述，脂肪组织常规切片方法经改良后，能使切片细胞平整，厚薄均匀，无重叠现象，有效提高制片质量，值得推广运用。
参考文献
[1]丁亚云.制作脂肪组织常规切片方法的改良[J].中国血液流变学杂志,2016,26(2):238-238.
[2]肖栩,郑芳,付先利,等.制作脂肪组织冷冻切片的体会[J].临床与实验病理学杂志, 2016,32(2):231-231.
[3]潘超,王灿铭.制作脂肪组织冷冻切片方法的改良[J].医药前沿,2014(30):370-370.
[4]熊红梅,邱晓明.脂肪组织切片方法的改良及应用体会[J].诊断病理学杂志,2015,22(6):375-375.
[5]杨世峰.脂肪组织恒低温冷冻切片方法的改进[J].解剖学杂志,2010,33(6):711-711.
论文作者:曹康
论文发表刊物:《临床医学教育》2017年11月
论文发表时间:2017/12/15
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