邱晓莉1 李张宇2 刘佳2
（1西南药业股份有限公司 重庆 400038；2太极集团有限公司 重庆 401174）
【摘要】 目的：建立楂曲平胃合剂的质量控制方法。方法 用薄层色谱法鉴别楂曲平胃合剂中得厚朴、苍术；用高效液相色谱法测定制剂中的橙皮苷含量。结果 薄层色谱中斑点清晰、易于识别；HPLC法精密度、重现性良好，橙皮苷进样量在12.4～124μg/ml范围内与峰面积线性关系良好（r=0.9991），平均加样回收率为102.1%，RSD为1.73%（n=5）。结论 所建立的定性定量方法可有效控制楂曲平胃合剂的质量。
【关键词】 楂曲平胃合剂；薄层鉴别；高效液相色谱法；橙皮苷；含量
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）12-0368-02
楂曲平胃合剂是太极集团重庆桐君阁药厂独家品种，由山楂、六神曲、苍术、厚朴、鸡内金、陈皮、甘草等制成，具有燥湿健脾、消食散满的功效，用于治疗脾胃不和，不思饮食，脘腹胀满，呕吐恶心，噫气吞酸，大便溏泄[1]。其原标准仅有性状鉴别项，不能很好地控制药品质量。为进一步控制药品的内在质量，保证临床用药安全有效，我们开展了提高其质量标准的实验研究，增加了方中厚朴、苍术的薄层鉴别和橙皮苷的含量测定。
1.仪器与试药
1.1仪器
HP1100型高效液相色谱仪；Zorbax（Agilent）色谱柱（C18，250-4.6mm，5μm）；AEG-45SM型电子天平(十万分之一，日本岛津公司）。
1.2试药
楂曲平胃合剂（批号：77060001，77060002，77060003）。橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚对照品及苍术对照药材均购自中国药品生物制品鉴定所提供。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1薄层层析鉴别
2.1.1厚朴的薄层鉴别
参照2005版药典藿香正气口服液鉴别（1）项下条件[2]，以厚朴酚、和厚朴酚为对照品，以石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯-甲酸（85﹕15﹕2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在100℃加热至斑点显色清晰。并分别考察了以下样品处理方法：①取本品30ml，用氯仿提取2次，每次30ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。阴性对照溶液同法处理。②取本品30ml，用石油醚（30~60℃）提取2次，每次30ml，合并石油醚提取液，低温蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。阴性对照溶液同法处理。结果表明，样品处理方法②所制供试品的色谱在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照溶液无斑点；而样品处理方法①所制得的供试品溶液和阴性对照溶液在对照品色谱相应的位置上均无相似的斑点。故样品处理方法最后确定选择②法。经多批样品鉴别实验表明，该方法可靠，重现性好，结果见附图1。
2.1.2苍术的薄层鉴别
参照九味羌活丸中苍术的薄层鉴别[3]，以苍术药材为对照，以石油醚（60~90℃）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸溶液，在100℃加热至斑点显色清晰。苍术对照药材的处理参照2005版药典苍术药材(藿香正气口服液)的鉴别[4]，并分别考察了以下样品处理方法：①取本品50ml，用乙醚提取2次，每次50ml，合并乙醚提取液，自然挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。阴性对照溶液同法处理。②取本品50ml，置烧瓶中，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再用移液管加入乙酸乙酯1ml，然后连接回流冷凝管，加热至微沸，并保持2小时，放冷，分取乙酸乙酯液，作为供试品溶液。阴品对照溶液同法处理。结果表明，样品处理方法②所制供试品的色谱在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照溶液无斑点；而样品处理方法①所制得的供试品溶液和阴性对照溶液在对照品色谱相应的位置上均无明显特征斑点。故样品处理方法最后确定选择②法。经多批样品鉴别实验表明，该方法可靠，重现性好，结果见附图2。
2.2 含量测定
2.2.1色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-5.5%醋酸(20：80)，检测波长283nm。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于1500。
2.2.2溶液的制备 对照品溶液：精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.13mg的溶液，即得。
供试品溶液：取本品10ml，精密加入40ml甲醇。回流提取1小时，过滤，残渣用甲醇清洗，合并转移至50ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，作为供试品溶液。
阴性对照溶液：取阴性对照溶液10ml，同供试品溶液配制方法制备得阴性对照溶液。
2.2.3专属性试验
精密量取对照品溶液、阴性对照溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，橙皮苷色谱峰保留时间约8min，阴性对照溶液与供试品溶液在保留时间约12min位置处有相同吸收峰，但在橙皮苷对应位置无吸收峰。图谱如下：
A：对照品溶液，B：阴性对照溶液，C：供试品溶液
2.2.4线性范围考察 精密称取橙皮苷对照品3.1mg至25ml容量瓶中，用甲醇溶液溶解，定容。分别精密吸取上述对照品溶液1ml、2ml、4ml、6ml、8ml至10ml容量瓶中，分别注入高效液相色谱仪，测定橙皮苷峰面积积分值，以橙皮苷的浓度为横坐标，其峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程：
y = 17.083x+4.3855 r= 0.9991
结果表明橙皮苷浓度在12.4～124μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.2.5精密度实验 取同一标准品溶液，用0.45μm滤膜滤过，精密量取续滤液，注入液相色谱仪，重复进样6次，记录色谱图，计算得橙皮苷峰面积的RSD为0.6%。
2.2.6重复性实验 取同一批号样品（批号77060001 ），照上述供试品溶液的制备方法制备5份供试液，进样测定，记录色谱图，计算得橙皮苷峰面积的RSD为0.19%。
2.2.7稳定性实验 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8小时进样测定，记录色谱图，计算得橙皮苷峰面积的RSD为1.71%，表明供试品溶液在8小时内稳定。
2.2.8加样回收率实验 采用加样回收法测定回收率。精密量取本品5份，每份1ml，分别精密加入8ml（0.14mg/ml）的橙皮苷对照品，约1.12mg，精密加入甲醇4ml。回流热提1小时，残渣用甲醇清洗，合并转移至50ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，作为供试品溶液。进样测定，计算得平均回收率为102.1%，RSD为1.73%。
2.2.9样品测定 取3批样品，照前法测定含量，其结果分别为1.615 mg/ml，1.610 mg/ml，1.650 mg/ml。
3.讨论
3.1 流动相的选择
根据文献和药典中橙皮苷含量测定方法，我们筛选了不同比例不同浓度的乙腈-4.0%醋酸(20：80)、乙腈-4.5%醋酸(15：85)、乙腈-5.5%醋酸(20：80)等体系。根据试验结果，选择流动相为乙腈-5.5%醋酸(20：80)，检测波长283nm，柱温30℃，流速1ml/min为测定条件，阴性无干扰，结果稳定，方法简便易行。
3.2 提取方法的选择
根据文献，目前橙皮苷的提取方法有回流热提、超声提取等，且橙皮苷易溶于热甲醇。因此，结合实际情况，对于本合剂选用甲醇回流提取。我们考察了不同浓度（70%、80%、90%）的甲醇回流提取0.5h、1h、1.5h对其含量结果的影响。结果表明，80%浓度的甲醇，回流提取样品1小时，所得供试品的指标含量较高，因此我们最终将提取方法确定为采用80%的甲醇回流提取1h。
4.结果
楂曲平胃合剂是复方制剂，成分复杂，干扰较大，本研究建立了方中厚朴、苍术的TLC鉴别法，便于该制剂的快速质量控制。HPLC法测定其有效成分橙皮苷的含量约为1.6 mg/ml，考虑到生产加工过程中的损失及药材质量差异较大，故确定本品橙皮苷含量不低于1.400 mg/ml。
【参考文献】
[1] WS3-B-1449-93，卫生部药品标准中药成方制剂（第七册）[S].
[2] 中华人民共和国药典(一部)，北京：化学工业出版社，2005：660.
[3] 苗明三，李振国. 现代实用中药质量控制技术，北京：人民卫生出版社，2000：499.
[4] 中华人民共和国药典(一部)，北京：化学工业出版社，2005：9.
论文作者:邱晓莉1,李张宇2,刘佳2
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第12期供稿
论文发表时间:2015/7/31
标签：溶液论文; 甲醇论文; 色谱论文; 阴性论文; 苍术论文; 橙皮论文; 方法论文; 《医药前沿》2015年第12期供稿论文;