（1广东省东莞市东华医院病理科 广东 东莞 523110）
（2广东省广东医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室 广东 东莞 523808）
（3广东省广东医科大学法医学教研室 广东 东莞 523808）
（4广东省广东医科大学检验学院 广东 东莞 523808）
【摘要】目的：探讨IL-37对宫颈癌细胞侵袭及相关分子表达的影响。方法：培养宫颈癌C33A细胞，分为NC组：C33A细胞转染空质粒组；实验组：C33A细胞转染IL-37质粒组。细胞转染后48h分别提取总RNA及总蛋白，RT-qPCR和Western Blotting检测基因表达。Transwell法检测IL-37对宫颈癌C33A细胞侵袭行为的影响。结果：1.C33A细胞转染IL-37后IL-37 mRNA表达上升约1510倍，WB结果发现NC组几乎无肉眼可见条带，而实验组IL-37呈现显著蛋白条带，表明成功表达IL-37。2.IL-37基因转染抑制了细胞侵袭能力，在48h细胞的侵袭抑制率约为27.6%。3.C33A细胞转染IL-37调控了多种癌相关基因的转录表达。IL-1、MMP2等的mRNA表达分别下降了约42%、33%。结论：IL-37对宫颈癌C33A细胞的侵袭能力具有显著抑制作用，调控了多种癌基因的表达，是一种潜在的抗癌分子。
【关键词】宫颈癌; IL-37; 侵袭
【中图分类号】R73 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）02-0024-02
【Abstract】Objective To study the influences of IL-37 on the invasion and gene expression of cervical cancer cells. Methods Groups were: NC group (blank plasmid group) and experiment group (IL-37 transfection group). RT-PCR and Western Blotting (WB) were used to assess the gene expression. Transwell method was employed for cell invasion detection. Results IL-37 mRNA increased by about 1510 times compared with the NC group. And the obvious protein bank was found in the Experiment group, indicating the successful expression of IL-37. The invasion inhibition rate was 27.6% at 48h after IL-37 transfection. IL-37 expression also suppressed IL-1 (42%) and MMP2 (33%) expression. Conclusion IL-37 regulated the expression of some oncogenes and suppressed the cell invasion. This molecule may be a potential drug for cancer treatment in future.
【Key words】 Cervical cancer; IL-37; Invasion
宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤，极大地危害着女性健康，宫颈癌的防治研究具有重要的社会意义。IL-37是IL-1家族的第七位成员（IL-1F7）,该基因定位于2号染色体，包括5个剪切变异体，其中IL-1F7b是最大的变异体，分子量25KDa，本文中IL-37指该分子[1]。在本研究中，我们探讨了IL-37对宫颈癌C33A细胞的侵袭能力的调控作用以及其对多种癌基因表达的影响。
1.材料和方法
1.1 主要材料
宫颈癌C33A细胞、空载体pIRES2-EGFP、IL-37表达载体由本课题组保存。转染试剂Hilymax购于同仁化学研究所，DMEM培养液购于GIBCO公司。逆转录试剂盒买自TaKaRa公司。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆引物合成公司为上海生工。IL-37引物（5'- F：GATCACAAAGTACTGGTCCTGG -3' ；5'- TCCTTTATCCTTGTCACAGTAG -3'）；IL-1引物（5 '-CCACTCCATGAAGGCTGCATG-3' , 5'-GGTGCTGACCTAGGCTTGATG-3'）；MMP2引物（5'-GCGGATCCAGCGCCCAGAGAGACAC-3'；R：5'-TTAAGCTTCCACTCCGGGCAGGATT-3'）。
1.2 细胞转染及侵袭实验
将细胞放入温度为37℃、CO2浓度为5%的细胞培养箱进行培养。细胞转染分组，NC组：C33A细胞转染空质粒组；实验组：C33A细胞转染过表达质粒组。侵袭实验时，重悬细胞并铺到Transwell板小室的上室。在下室加入含血清的培养基及纤维粘连蛋白FN，48h后细胞计数，拍照，统计结果。
1.3 RT-qPCR
提取细胞总RNA，TaKaRa反转录试剂盒合成cDNA。qPCR的反应体系（20μl）：SYBR10μl，上下游引物各0.8μl，cDNA1μl，高压水补足20μl。反应结束采用2－△△Ct分析基因表达。
1.4 Western Blotting(WB)
细胞铺板、分组、转染后行细胞总蛋白提取并行蛋白浓度测定。蛋白电泳后250mA转膜115分钟，显影曝光处理后进行灰度扫描分析。
1.5 细胞侵袭实验
实验结果使用软件SPSS17.0进行统计分析。
2.结果
（1）RT-qPCR结果显示C33A细胞转染IL-37后IL-37 mRNA表达上升约1510倍(P<0.001)。蛋白表达检测结果显示，C33A细胞转染IL-37后NC组几乎无肉眼可见条带，而实验组IL-37呈现非常显著的蛋白条带。上述结果表明,1.宫颈癌细胞的IL-37基础表达量极低；2，转染后IL-37 RNA和蛋白在宫颈癌细胞中得以大量显著表达。
（2）IL-37基因转染抑制了细胞的侵袭能力。与NC组相比，在48h实验组的宫颈癌细胞的侵袭抑制率约为27.6%(P＜0.05)。
（3）IL-37早前已被报道能够同smad3结合形成复合体，而后入核发挥转录调控功能。这里我们发现C33A细胞转染IL-37调控了多种癌相关基因的转录表达。IL-1、MMP2等的mRNA表达分别下降了约42%(P＜0.05)、33%(P＜0.05)。
3.讨论
目前全球对IL-37的基因功能及生物学功能的研究尚处于起始阶段。在本研究中，我们探讨了IL-37对C33A细胞侵袭能力的调控作用及对多种基因表达的影响，为以后的临床应用奠定一定基础。
我们发现，IL-37对宫颈癌细胞的侵袭能力具有良好抑制作用。IL-37的过表达不仅抑制了细胞侵袭，而且调控了多种癌相关基因如MMP2、IL-1等的表达。在其他肿瘤如肾癌中，IL-37通过IL-6信号通路发挥功能[2]。作者前期参与的研究构建了IL-37质粒并发现，IL-37对宫颈癌细胞增殖有抑制作用[3,4]。总之，IL-37是一种潜在的功能复杂且有效的抗癌分子。接下来我们还会以其为目标进行更多临床研究，希望IL-37以后能够在临床的诊断和治疗上发挥相应的作用。
【参考文献】
[1] Nold MF,Nold-Petry CA,Zepp JA,et al.IL-37 is a fundamental inhibitor of innate immunity[J].Nature immunology 2010,11(11):1014-1022.
[2] Jiang Y, Wang Y, Liang L,et al.IL-37 mediates the antitumor activity in renal cell carcinoma[J]. Medical Oncology,2015,32(11):1-10.
[3] Wang S,An W,Yao Y,et al.Interleukin 37 Expression Inhibits STAT3 to Suppress the Proliferation and Invasion of Human Cervical Cancer Cells[J].J Cancer, 2015,6(10):962-969.
[4]陈荏槐,胡新荣,姚运红等.新型抗炎因子IL-37真核表达载体pIRES2-EGFP/IL-37的构建及鉴定[J].广东医学院学报,2014,(5): 607-609.
本文系广东省科技计划课题项目,项目名称:新型抗炎因子IL-37对宫颈癌EMT的调控及其分子机制研究,项目编号:2013B021800062
基金项目：国家自然科学基金项目(8130224),广东省科技计划项目（2013B021800062，2016A020215147）;广东省医学科研基金（A2016208）,东莞市社会科技发展重点项目（2013108101051）.
论文作者:陈荏槐,郭洪胜,王森,赖小平,陈章权,果海娜
论文发表刊物:《医药前沿》2017年1月第02期
论文发表时间:2017/2/6
标签：转染论文; 细胞论文; 宫颈癌论文; 基因论文; 广东论文; 实验组论文; 广东省论文; 《医药前沿》2017年1月第02期论文;