左绍远1 钱金栿1 方淑环2 张翠香1
（1云南省大理学院 云南大理 671000；2广州中医药大学 广东广州 510405）
【摘要】目的：观察红花蜂花粉多糖(PBPC)对荷S180肉瘤小鼠的肿瘤抑制作用。方法：通过建立小鼠S180肉瘤模型，观察PBPC的体内抗肿瘤活性及对小鼠免疫器官的影响，用ELISA法测定荷瘤小鼠血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。结果：以 50，100，150 mg?kg-1剂量的PBPC灌胃给药，连续14d, 能明显抑制小鼠S180肉瘤生长，抑制率分别为36.99%、41.78%与49.32%。PBPC对小鼠的免疫器官具有保护作用，PBPC 100，150 mg?kg-1的剂量能明显增加荷瘤小鼠的胸腺和脾腺指数。另外，PBPC 50，100，150 mg?kg-1剂量组均能使荷瘤小鼠血清TNF-α显著升高，TNF-α含量分别为314.62，357.34与363.42 pg.L-1。结论：PBPC能明显抑制小鼠S180 肉瘤的生长，增加荷瘤小鼠的胸腺和脾腺指数及血清TNF-α含量。提示PBPC促进荷瘤小鼠血清TNF-α的分泌从而引起肿瘤的坏死，可能是其抗肿瘤作用的途径之一。
【关键词】红花蜂花粉多糖(PBPC) S180荷瘤小鼠 抗肿瘤 肿瘤坏死因子-α
【中图分类号】R73-36 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）01-0042-02
【Abstract】Objectives: To observe the anti-tumor activity of of polysaccharide from bee pollen of carthamus tinctorius(PBPC). Methods: The model of S180-bearing mice was established to study the anti-tumor activity and effect on immune organs of PBPC in vivo. Then the serum content of TNF-α was tested by ELISA method Results: With the dosages of 50, 100, 150 mg?kg-1 by ig administration for 14 days, PBPC could significantly inhibit the tumor growth, the inhibition rates were 36.99%、41.78%与49.32% respectively. On the other hand, compared with the model control group, PBPC 50, 100, 150 mg?kg-1 dosages could markedly increase serum TNF-α in tumor-bearing mice, the concentration of TNF-α were 314.62，357.34 and 363.42 pg.L-1 respectively. In addition, PBPC could increased the thymus and spleen index. Conclusion: PBPC can significantly inhibit the tumor growth in S180-bearing mice, increase the serum TNF-α level. The effect of PBPCⅡ promotes secretion of TNF-α to enhance tumor necrosis may be one of the pathways for PBPC’s effect of anti-tumor.
【Key words】polysaccharide from bee pollen of carthamus tinctorius (PBPC) S180 - bearing mice anti-tumor TNF-α
蜂花粉系蜜蜂从蜜源植物雄性花蕊内采集的花粉粒，经蜜蜂加工而成的扁圆形状物，具有多种生物学活性和药理作用[1][2]。为综合开发利用云南丰富的红花蜂花粉这一新的药用资源，本实验观察了红花蜂花粉多糖（以下简称PBPC）的体内抗肿瘤作用及对免疫功能的影响，并初步分析了其可能的作用机制，以期为红花蜂花粉多糖的抗肿瘤活性及其作用机制的进一步研究提供基础数据。
1 材料
1.1试剂与仪器 小鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）酶联免疫检测试剂盒，南京建成生物工程研究所产品，环磷酰胺（cyclophosphamide），江苏恒瑞医药股份有限公司产品（批号：11050622), 其余试剂均为国产分析纯。红花蜂花粉多糖(PBPC)，按前文方法自行制备[3],（批号：20110326），为白色粉末。HH-W420/600恒温水浴箱（金坛市瑞华仪器有限公司）,AG 135电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司) ，UV2550 型紫外可见分光光度计（日本岛津苏州仪器有限公司），DTL冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂) ，680型BIO-RAD伯乐酶标仪（美国BIO-RAD 公司）。
1.2 动物和瘤株 昆明种小鼠，雌雄各半，体重（18±2）g, 由昆明医学院实验动物中心提供，合格证号 SCXK2011（滇) 0008号。小鼠肉瘤细胞株 S180由中国科学院上海细胞库提供。
2 方法
2.1 小鼠肿瘤模型的建立 按移植性肿瘤研究法建立小鼠肿瘤模型[4]。无菌获取接种7 d的S180瘤种鼠腹水，以生理盐水调整细胞浓度为1×107个?mL-1。取小鼠60只，称重。随机分为6组：正常对照组、模型组、环磷酰胺阳性对照组以及PBPC低、中、高剂量组。除正常对照组外，其余各组小鼠右腋下作常规消毒后皮下接种瘤细胞悬液，每只0.2 mL。接种24h后开始灌胃给药，正常对照组和模型组均给等量的生理盐水，环磷酰胺组剂量为20mg?kg-l，PBPC低、中、高3个剂量组分别为50、100、150 mg?kg-1?d-1。连续14d。末次给药24h后，颈椎脱臼处死小鼠，摘取瘤块、脾脏、胸腺并称重，按一下公式分别计算抑瘤率、胸腺及脾指数。
抑瘤率=[(荷瘤对照组平均瘤重(g)-实验组平均瘤重(g))／荷瘤对照组平均瘤重(g)] ×100％。
脏器指数=相应脏器重量(mg)／小鼠体重(g)。
2.2 血清肿瘤坏死因子TNF-α的测定 末次给药后24h,小鼠眼球取血,在4℃，3000r.min-1离心15 min，分离血清，按试剂盒说明书，用酶标仪在450nm 波长测定吸光度(A)。将各样品吸光度值代入标准曲线方程求出 TNF-α的终浓度。
2.6 统计学处理 采用 SPSS11.0统计软件进行统计处理，实验数据用x-±s表示，组间差异按方差分析进行检验，并用最小显著差法检验作两两比较。以 P＜0.05表示差异有统计学意义。
3 结果
3.1 PBPC对荷S180肉瘤小鼠的肿瘤抑制作用 结果见表1。结果表明，PBPC低、中、高剂量均能明显抑制S180肉瘤的生长，抑制率分别为36.99%、41.78%与49.32%，与模型对照组相比，P＜0.01。另外，环磷酰胺对肿瘤的抑制作用明显高于PBPC，但同时也显著抑制对小鼠体重增长，而PBPC对荷瘤小鼠体重增长无明显影响。
4 讨论
恶性肿瘤是严重危害人类健康、威胁人类生命的主要疾病之一，药物的毒性反应和耐药性的产生一直是肿瘤疾病中难以解决的问题。因此寻找高效低毒的抗肿瘤药物成为肿瘤研究和治疗的重要内容。而不同来源的多糖类因具有良好的抗肿瘤活性而不良反应较低，正成为现代药物开发的热点[5]。
本实验结果表明，PBPC对S180肉瘤具有明显的抑制作用，在50、100、150 mg.kg-1剂量时，抑瘤率分别为36.99%、41.78%与49.32%，与模型对照组相比，差异显著（P＜0.01），具有剂量依赖性。并且对小鼠的生长和免疫器官没有明显不良的影响。
TNF-α是一种由活化的单核巨噬细胞产生的细胞因子，是直接杀伤肿瘤细胞最强的细胞因子之一[6]。本实验结果显示，与模型对照组相比，PBPC 50、100、150 mg.kg-1剂量组均能使荷瘤小鼠血清TNF-α明显升高，提示PBPC对肿瘤的抑制作用可能与促进荷瘤小鼠产生TNF-α，从而促进肿瘤的坏死有关。但PBPC是否通过其他途径抑制肿瘤的生长尚需进一步深入研究。
参考文献
[1] 赵凤奎，胥保华. 蜂花粉的抗氧化作用[J].中国蜂业, 2013，64（2）：38-42
[2] 任乃艳，卢荣，程妮，等.蜂花粉活性成分研究进展[J].中国蜂业，2011，62(10):76-79
[3] 左绍远，钱金栿.云南产红花蜂花粉多糖的分离提取及含量测定[J].时珍国医国药,2012，23（11）：2765-2766
[4] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社，2002,1758-1762
[5] 崔换天，边育红，王丽.中药多糖对免疫功能调节的研究进展[J].中国现代中药,2013,15(4):286-289
[6] 李涛，陈正望.TNF-α在肿瘤中的作用[J].现代生物医学进展,2011，11(18)：3586-3588
基金项目：云南省高新科技计划项目（No.GX10-2004）
论文作者:左绍远1,钱金栿1,方淑环2,张翠香1
论文发表刊物:《医药前沿》2014年第1期供稿
论文发表时间:2014-4-2
标签：小鼠论文; 肿瘤论文; 肉瘤论文; 多糖论文; 剂量论文; 抑制论文; 作用论文; 《医药前沿》2014年第1期供稿论文;