肖宁[1]2010年在《Aurora激酶抑制剂VX-680对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡影响的实验研究》文中认为研究背景：膀胱癌在全球恶性肿瘤中位居第九位,其中在男性恶性肿瘤中居第七位,而女性中居第十七位,其中移行细胞癌(BTCC)占90%以上,给患者家庭和社会带来沉重的心理压力和经济负担。虽然在我国膀胱癌发病率远低于西方发达国家,但是近年来,我国部分城市膀胱癌发病率有增高趋势,且城市居民膀胱癌死亡率明显高于农村。非肌层浸润性膀胱癌行经尿道膀胱肿瘤电切术(TUR-BT)后并行膀胱内灌注化疗或免疫治疗后仍容易复发,易发展为肌层浸润性膀胱癌。而肌层浸润性膀胱癌,根治性手术难度高、并发症多以及辅助性化疗和放疗效果不佳。所以探索膀胱癌有效治疗的新方法一直是肿瘤治疗研究的热点。细胞增殖是高度有组织的时序调控过程。细胞进行有丝分裂必须依靠纺锤体检查点(spindle checkpoint),又称有丝分裂检查点(mitotic checkpoint)监控纺锤体形态、染色体着丝点与微管连接及其产生的张力、染色体排列,确保姐妹染色单体精确分离完成有丝分裂。纺锤体检查点功能缺陷将导致染色单体错误分配,产生非整倍体子代细胞,致使最终肿瘤发生。有丝分裂缺陷产生非整倍体导致的肿瘤在众多肿瘤发生中已得到证实。Aurora蛋白家族是一种丝／苏氨酸蛋白激酶,在细胞有丝分裂的进程中起重要作用,它包括Aurora A, Aurora B, Aurora C 3种,业已证明许多实体肿瘤都存在Aurora A的过度表达。目前正在开发的3个小分子Aurora激酶抑制剂(ZM447439,Hesperadin, VX-680)均非针对某一种Aurora激酶的特异性抑制剂。研究提示,VX-680对激酶的抑制作用更有临床应用作用。肿瘤细胞水平的实验证实VX-680可诱导多种肿瘤细胞凋亡,能抑制包括乳腺癌、淋巴瘤、前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、颈部肿瘤等众多肿瘤细胞增殖。所以Aurora激酶抑制剂将有可能成为肿瘤治疗的有力武器。Aurora激酶抑制剂在治疗肿瘤中具有广阔前景,我们通过体外实验研究VX-680对人膀胱癌T24细胞的抑瘤作用,并从诱导细胞凋亡、调控细胞分裂和增殖等方面对其作用机理进行较深入的研究,为BTCC的治疗提供新的思路。第一章人膀胱移行细胞癌中Aurora A, CyclinD1, CyclinB1和Bcl-2的表达及其相关性的研究目的：探讨Aurora A, CyclinD1, CyclinB1和Bcl-2在BTCC中的表达及其意义方法：用免疫组化的方法检测Aurora A, CyclinD1, CyclinB1和Bcl-2在56例BTCC和15例正常膀胱组织中的表达情况,并分析其与BTCC临床病理因素的关系。结果：膀胱癌组织Aurora A阳性率为51.8%(29／56),高于正常膀胱组织的13.3%(2/15), (P<0.01); CyclinD1阳性率为46.4%(26／56),高于正常膀胱组织的6.7%(1/15), (P<0.01); CyclinB1阳性率为75.0%(42／56),高于正常膀胱组织的33.3%(5／15),(P<0.01)；Bcl-2的表达为62.5%(35／56),高于正常膀胱组织的6.7%(1/15), (P<0.01)。Aurora A, CyclinB1和Bcl-2阳性率与BTCC的病理分级呈正相关,但是CyclinD1随病理分级增加而阳性率下降。Aurora A阳性率与临床分期呈正相关,CyclinD1则呈负相关；CyclinB1和Bcl-2阳性率与临床分期无关。Aurora A阳性率与CyclinD1 (R=0.508, P<0.01)、CyclinB1 (R=0.594, P<0.01)和Bcl-2 (R=-0.535, P＜0.01)阳性率明显相关。结论：1.BTCC组织中Aurora A、CyclinD1、CyclinB1和Bcl-2的阳性率高于正常膀胱组织。2. BTCC组织中Aurora A、CyclinD1、CyclinB1和Bcl-2的阳性率高低与BTCC的肿瘤病理分级明显相关,病理分级与Aurora A、CyclinB1和Bcl-2阳性率呈正相关,与CyclinD1阳性率呈负相关。3. BTCC的肿瘤临床分期与Aurora A阳性率呈正相关,与CyclinD1阳性率呈负相关,与CyclinB1和Bcl-2阳性率与临床分期无关。第二章Aurora激酶抑制物VX-680对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡影响目的：探讨Aurora激酶抑制物VX-680对人膀胱癌T24细胞生物学行为的影响,即细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法：设定不同浓度的Aurora激酶抑制物VX-680作用不同时间于T24细胞,利用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测T24细胞的凋亡指数,Hochest染色观察细胞形态学变化。结果：Aurora激酶抑制物VX-680不同浓度(0nM,100nM,300nM,500nM)作用T24细胞于四个不同时间(12h,24h,48h,72h),MTT法检测细胞的生长抑制率,流式细胞术检测其凋亡率,Hochest染色观察细胞形态学变化,均发现呈明显的剂量效应关系和时间效应关系(P<0.05),分别在72h和500nM时其效应最明显,在72h时VX-680的IC50=761.222nM。MTT法检测72h时细胞存活率,VX-680浓度100nM：0.790±0.038,300nM：0.737±0.033,500nM：0.532±0.013,各浓度间均有差异(P<0.05)。流式细胞术检测其凋亡率,72h时VX-680浓度为0nM：(0.493±0.033)%,100nM：(6.608±0.550)%,300nM：(12.225±1.232)%,500nM：(18.275±4.986)%,各浓度组间两两相比差异性显着(P<0.01)。Hochest染色可见到不同程度的凋亡细胞,低剂量VX-680(100nM)处理细胞后,细胞凋亡较少,增加VX-680剂量(500nM),细胞凋亡明显增多,并且可见凋亡小体形成。结论：1.VX-680作用于人膀胱癌T24细胞后,对T24细胞的增殖有明显抑制作用,并且呈显着的剂量效应关系和时间效应关系。2.VX-680作用于人膀胱癌T24细胞后,明显诱导细胞凋亡,凋亡的诱导作用呈显着剂量效应关系和时间效应关系。第叁章Aurora激酶抑制物VX-680抑制人膀胱癌T24细胞分子生物学机制的研究目的：探讨VX-680抑制人膀胱癌T24细胞的分子生物学机制。方法：设定不同浓度的VX-680作用不同时间于T24细胞,半定量RT-PCR检测T24细胞的Aurora A, CyclinD1, CyclinB1和Bcl-2mRNA的变化,Western blot检测Aurora A, CyclinD1, CyclinB1和Bcl-2蛋白的表达。结果：半定量RT-PCR检测,不同浓度(0nM,100nM,300nM,500nM) VX-680作用不同时间(12h,24h,48h,72h)于T24细胞后,降低Aurora A、CyclinD1、CyclinB1和Bcl-2 mRNA表达比值和其蛋白表达比值,并呈明显的时间效应关系和剂量效应关系。不同VX-680浓度作用72h时Aurora A mRNA表达比值(Aurora A/ GAPDH)分别为,0nM组：0.749±0.012,100nM组：0.638±0.014,300nM组：0.272±0.011,500nM组：0.253±0.003,各组间差异均有统计学意义(P<0.05); CyclinD1、CyclinB1和Bcl-2 mRNA表达比值在72h时也有类似趋势。Western blot检测,Aurora A、CyclinD1、CyclinB1和Bcl-2基因在蛋白表达水平。72h时各浓度组细胞Aurora A蛋白表达比值(Aurora A/GAPDH)分别为,0nM组：0.766±0.016,1O0nM：0.637±0.013,300nM：0.478±0.009,500nM：0.335±0.004,各组间均差异明显(P<0.01); CyclinD1、CyclinB1和Bcl-2 mRNA基因在蛋白表达比值在72h时也有类似趋势。但是短时间(12h)作用于T24细胞时,不同浓度VX-680(0 nM,100 nM,300 nM,500 nM)对Aurora A、CyclinD1、CyclinB1和Bcl-2mRNA表达比值下降不明显,各浓度组间均无统计学意义(P>0.05)。结论：1.VX-680引起的Aurora A、CyclinD1、CyclinB1和Bcl-2的表达下调可以从多个通路抑制细胞增殖和诱导凋亡,并呈剂量效应关系和时间效应关系。2. Aurora A与CyclinD1、CyclinB1和Bcl-2基因及蛋白的表达下调呈现明显相关性,他们之间可能存在相互调控。
徐鑫[2]2008年在《受体型酪氨酸磷酸酯酶PTPRO表达调控机制的研究》文中进行了进一步梳理人PTPRO是受体型酪氨酸磷酸酯酶家族的一员,其功能主要涉及肾脏肾小球细胞的结构和功能,神经组织中轴突的生长和导向,以及肿瘤抑制。与其功能相对应,PTPRO主要表达于不同发育时期的肾脏组织和神经组织,而在很多肿瘤细胞中则通过DNA甲基化沉默。例如,在肾脏中,PTPRO表达于发育早期的肾小球细胞顶部和发育成熟的肾小球足细胞顶部;在脑中,PTPRO最高表达出现于妊娠中后期,这一时期也是脑部轴突发生的主要时期;由高甲基化介导的PTPRO的沉默常见于不同的肿瘤和肿瘤细胞系中。尽管存在表达差异,但是我们对PTPRO表达的调控机制了解很少。我们详细地研究了PTPRO表达调控的机制。首先,我们发现PTPRO是一个新的E2F1的靶基因。过表达E2F1能上调PTPRO的mRNA水平并且激活PTPRO启动子荧光素酶报告基因活性;PTPRO启动子上存在两个E2F1的结合位点;EMSA和ChIP实验表明E2F1能够结合于PTPRO的启动子。其次,我们发现一个小的microRNA簇—miR-17-92也能够调控PTRPO的表达。生物信息学分析发现PTPRO mRNA的3’UTR区存在miR-17-92的结合位点;报告基因的实验结果表明这些位点对于PTPRO mRNA的稳定性是重要的,miR-17-92能下调PTPRO的mRNA和蛋白水平。最后,我们发现E2F1和miR-17-92在细胞周期进程中协同调控PTPRO的表达。PTPRO的mRNA在细胞周期的S期上调,这与E2F1上调于G1/S期,以及miR-17-5p(miR-17-92家族的一个成员)上调于后S期的结果相一致。我们还分别检测了PTPRO启动子和3’UTR荧光素酶报告基因的活性,发现启动子的活性高峰出现在S早期,而3’UTR的活性则于S后期下降,这与E2F1和miR-17-92的表达是一致的。总之,我们发现PTPRO能够被E2F1和miR17-92协同调控。
邱开阳, 张国玺, 邹晓峰[3]2019年在《UBA2与肿瘤关系的研究进展》文中认为UBA2是小泛素相关修饰物(Small ubiquitin related modifier,SUMO)激活酶的关键组分,是介导SUMO修饰的第一步。研究表明,UBA2在多种肿瘤中过表达,与肿瘤的发生、发展及预后密切相关,但其作用机制目前尚不清楚。本文就UBA2的生物特性及其与肿瘤的关系作一综述。
武磊, 李洁, 邹余粮[4]2019年在《miR-145在肿瘤耐药中的研究进展》文中提出恶性肿瘤是严重危害人类生命健康的疾病。化疗是其治疗的重要手段之一,而耐药限制了恶性肿瘤化疗的临床疗效。尽管耐药机制受到了广泛的探索,但至今仍未找到有效治疗途径。miRNA负性调控相关靶基因的表达,与肿瘤的发生、发展及肿瘤细胞对化疗药的敏感性与耐药性密不可分。miR-145是研究较为深入的miRNAs之一。miR-145在大多数肿瘤细胞中表达下降,是机体的保护基因。增强miR-145的表达可发挥逆转耐药作用。以miR-145为作用靶点,与化疗药相结合发挥协同作用可为临床提供一种有效治疗途径。
参考文献：
[1]. Aurora激酶抑制剂VX-680对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡影响的实验研究[D]. 肖宁. 中南大学. 2010
[2]. 受体型酪氨酸磷酸酯酶PTPRO表达调控机制的研究[D]. 徐鑫. 东北师范大学. 2008
[3]. UBA2与肿瘤关系的研究进展[J]. 邱开阳, 张国玺, 邹晓峰. 赣南医学院学报. 2019
[4]. miR-145在肿瘤耐药中的研究进展[J]. 武磊, 李洁, 邹余粮. 医学综述. 2019