1.郴州市第一人民医院南院耳鼻喉头颈肿瘤外科；2.郴州市第一人民医院检验医学中心 湖南省郴州市 423000
【摘 要】目的：探讨放射处理对非小细胞肺癌白介素31表达及细胞HT1299凋亡的影响，为肺癌的治疗提供科学依据。方法：应用Elisa法测定HT1299细胞经2Gy X线照射前后细胞培养上清炎症因子的浓度变化，hochest33253染色法分析细胞经照射处理前后细胞凋亡的改变。结果：细胞经2Gy X线照射IL31显著增多，凋亡细胞数增多。结论：放射可能损伤细胞，导致IL-31分泌增多，促进非小细胞肺癌细胞凋亡。可作为肺癌放射治疗期间体内免疫状态和预后判断的指标。
【关键词】IL31；放疗；肺癌
The influence of Radiation on the cytokine（IL31）expression and apoptosis of lung Cancer cells
[Abstract]：Objective To explore the effect of radiation on the expression of IL31 or induced apoptosis in the lung cancer cells HT1299
Methods The HT1299 cells were cultured in the normal condition and divided into the control group and radiation group（cells were explored in the 2Gy X ray）.then the culture media were collected and the expression of IL31 were detected by ELISA，the cell apoptosis stained with hochest33258 were detected by fluorescence microscope.
Results The concentration of IL31 increased in the radiation group than the control group.Significant apoptosis cells occurred in the radiation group.
Conclusion Radiation might induce the cells apoptosis and improve the secretion of IL31，thus increased inflammatory injury.
KEY WORDS：IL31，radiation，lung cancer
肺癌是危害人类健康的呼吸系统恶性肿瘤之一，由于癌细胞本身的失控性生长，导致局部形成低氧微环境。放射治疗是局部杀伤癌肿病灶的一种手段，促使肿瘤细胞丧失增殖能力而最终被清除。
本研究以人肺癌细胞HT1299为对象，探讨低剂量X线照射细胞后培养上清白介素的表达水平及细胞凋亡的变化情况，以期了解放疗对肺癌的影响。
1 材料与方法
1．1 材料 人肺腺癌细胞系H1299由本室保存。RPMI1640培养基，小牛血清购于Gibco公司。
1.2 细胞培养 H1299细胞在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中培养，将其分为对照组及放射照射组，对照组在5% CO2 37℃培养箱中培养，待细胞生长至60%汇合状态时，放射照射组采用X线辐射仪进行单次2Gy照射。
1.3 细胞形态学观察 照射48 h后，冰冷PBS洗涤各组细胞，室温下4%多聚甲醛固定10分钟，PBS洗涤，hochest33253染色剂（Promego公司，一种可激发荧光的核染色物质）染色10 min，荧光显微镜观察照射前后细胞的凋亡情况。
1.4 ELISA法检测细胞培养上清IL31的浓度 收集细胞上清液，3000 rpm/min离心l0m，ELISA法检测IL31含量，按试剂说明操作，绘制标准曲线，计算待测标本含量。
2 结果
2.1 细胞形态变化观察 细胞经X线照射后凋亡细胞数明显增多，凋亡细胞经hochest33253染成蓝色，细胞体积缩小，胞核固缩，核碎裂，染色质分割成块，细胞呈亮珠状蓝色荧光和形成凋亡小体等典型的凋亡细胞形态改变。而对照组细胞大小一致，被透过活细胞膜的hochest33253染成蓝色，荧光均匀。（图1）
2.2 ELISA结果：
收集细胞培养上清，ELISA法检测IL31的浓度，结果显示，经X线照射后，IL31的浓度从0.36ng/ml增高到1.8ng/ml.
3 讨 论
肺癌目前仍是死亡率最高的恶性肿瘤[1]，手术仍然是肺癌早期治疗的首选，术后采用放化疗相结合的方法进行巩固治疗，以防复发和转移。但放化疗在杀死肿瘤细胞的同时，对免疫系统的破坏也非常大。免疫失衡在肺癌的预后中发挥重要作用。有报道称多种免疫炎症因子在肺癌组织中高表达，并且与NSCLC的发生、发展以及预后密切相关[2-7]。
IL31属IL6家族成员，主要由CD4+Th2细胞产生，可参与多种细胞的生长、分化和功能调节[8]。本实验采用Elisa法检测细胞培养上清的IL31的浓度，发现放射照射实验组浓度明显增高。从形态学观察发现照射组肺癌细胞凋亡细胞数也明显增多。以上结果提示放射造成细胞损伤且促进IL 31的分泌。IL31参与NSCLC放疗后的慢性炎症反应，并通过趋化作用，聚集更多的免疫细胞到达炎症部位，炎性因子聚集，从而加剧机体的炎症反应。
由于放疗对细胞的损伤作用导致细胞凋亡，加速细胞分泌炎症因子。因而，监测治疗过程中患者血清 IL31有助于对肺癌预后的判断，指导临床医师评估病情及预后，从而实施更有效的治疗，提高肺癌治疗有效率。
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作者简介：
侯春燕，女，33岁，硕士，主治医师，主要从事耳鼻喉头颈肿瘤外科。
*通讯作者：
谭潭，Email：tantan1413@126.com
基金项目：（湖南省卫生厅科研项目（B2010-127）；郴州市市科技局（2011-33）
论文作者:侯春燕1,刘娟2,付翔杰2,谭潭2
论文发表刊物:《航空军医》2016年第9期
论文发表时间:2016/6/23
标签：细胞论文; 肺癌论文; 凋亡论文; 白介素论文; 郴州市论文; 炎症论文; 浓度论文; 《航空军医》2016年第9期论文;