长沙医学院口腔医学院 410219
【摘要】 目的 探讨骨髓间充质干细胞不同途径移植对肝硬化模型大鼠的效果差别，为临床干细胞移植提供依据。方法 用四氯化碳液体橄榄油混合液皮下注射和酒精喂养的方法建立肝硬化大鼠模型,将肝硬化模型随机分为肝硬化未移植组、门静脉移植组、肝动脉移植组、尾静脉移植组，构建对比实验，观察并评估。结果 三种不同的途径移植MSCS肝硬化模型到小鼠体内，四周后移植组较未移植组肝功能明显改善，转氨酶明显降低，纤维化程度均明显改变，三种移植方式无明显统计学差异。 结论 骨髓间充质干细胞MSCS移植肝细胞大鼠后，门静脉，肝动脉组，尾静脉组移植MSCS数量均无统计学差异，对肝硬化的质量均有效，而且三种治疗效果类似。
【关键词】 大鼠 骨髓间充质干细胞 移植途径 肝硬化
随着社会城镇化、老龄化的出现、器官组织病变以及细胞组织因素的增多患病的风险几率增高，人体机能器官细胞内不断适应甚至损伤。肝硬化是临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。早期由于肝脏代偿功能较强可无明显症状，后期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并有多系统受累，晚期常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症。通过此类病情的发展将选择有利的因素进行对肝硬化进行治疗，所以通过骨髓间充质干细胞(MESENCHYMAL Stem Cells，MSCS)不同途径移植对肝硬化模型大鼠的效果差别进行研究。成体干细胞具有多潜能分化的作用,在肝硬化的微环境中可以转分化为肝细胞,或者与残存肝细胞融合,或者通过旁分泌的作用,改善肝功能。大量实验及临床已经证明,骨髓间充质干细胞移植治疗,可以减轻肝硬化程度,改善肝脏功能。
实验材料与方法
1、1 实验材料
1、1、1 实验对象 选取48只5日龄的健康大鼠，雌雄不限，重量200-220g之间，用于分离成熟的肝细胞，由长沙医学院机能实验室提供。
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1、1、2 实验仪器与试剂 Ⅳ 型胶原(collagen Ⅳ)，四氯化碳分析纯，橄榄油分析纯，胰蛋白酶，染色剂，一次性无菌注射剂，35 mm培养皿，培养液，培养箱，同型对照抗体，手术显微镜一套等。
1.2 实验方法
1.2.1大鼠模型的构建 取48只健康大鼠，分为两组正常组8只为对照组，肝硬化模型组40只，用四氯化碳液体橄榄油混合液皮下注射和酒精喂养的方法建立肝硬化小鼠模型,4周之后，对大鼠肝脏进行病理学检查，将肝硬化模型随机分为肝硬化未移植组(n=8)、门静脉移植组(n=8)、肝动脉移植组(n=8)、尾静脉移植组(n=8)。8周之后，将处死所有大鼠并取出肝脏。
1.2.2 MSCS的获取制备 无菌条件下分别将四组门静脉、肝动脉、尾静脉等移植到肝细胞悬液中，通过不同方法构建三种对比试验，提取健康SD小鼠骨髓,利用全骨髓贴壁的方法原代培养骨髓MSCS,利用CM-DIL(活细胞染色剂)标记间充质干细胞，无菌条件获取股骨，去除骨上肌肉组织，培养液反复冲洗收集细胞悬液，培养传代3次。,然后通过3种途径分别进行移植 ，均需常规麻醉，备皮，消毒，铺巾，打开腹腔，用一次性注射器注射MSCS悬液。
1.2.3 病理学检查 HE染色切片观察，正常的大鼠肝脏，肝小叶清晰可见，形态正常。实验组肝细胞有些脂肪病变，部分坏死并有炎症，肝小叶不清晰，肝细胞索杂乱，形成许多假小叶，符合肝硬化诊断标准。实验组较正常组对比，转氨酶显著升高，血清蛋白明显降低，肝纤维化严重，有明显伤害。MSCS移植后，肝细胞有所恢复，结构有所改善，肝细胞损伤降低，三种途径对大鼠肝硬化有明显效果，但三种方式效果相似无明显区别
讨论
肝硬化（Cirrhosis Of Liver）是临床常见的慢性进行性肝病，是我国常见的主要死亡原因之一。在我国大多数为肝炎后肝硬化，少部分为酒精性肝硬化和血吸虫性肝硬化。病理组织学上有广泛的肝细胞坏死、残存肝细胞结节性再生、结缔组织增生与纤维隔形成，导致肝小叶结构破坏和假小叶形成，肝脏逐渐变形、变硬而发展为肝硬化。肝移植手术价格贵，危险系数大，治疗受限。在多年探讨下，所以通过骨髓间充质干细胞不同途径移植对肝硬化模型小鼠的效果差别，生长激素(GH)/胰岛素样生长因子-1(IGF-1)轴在蛋白质代谢中发挥重要作用,肝脏是GH/IGF-1轴的中心器官,肝硬化存在血浆氨基酸谱和GH/IGF-1轴的变化。大量实验及临床已经证明,骨髓间充质干细胞移植治疗,可以减轻肝硬化程度,改善肝脏功能。但临床上肝动脉、门静脉以及外周静脉不同移植方法对治疗效果影响的对比少。从中利用肝硬化模型,将骨髓MSCS通过临床中常用的3种移植方式输入到模型大鼠体内,通过移植后大鼠肝硬化标本大体形态、纤维化程度、肝功能、干细胞定植的数量选择最适中的方法为临床进行干细胞移植治疗终末期肝病的移植途径选择提供实验依据,进行全面的研究。
理论结合实际，根据研究的三种不同方式的移植，我们讨论得出MSCS通过三种方式进入大鼠体内，4周后可以移植到肝脏中，并且移植的MSCS数量无明显的统计学差异，移植后8周，肝细胞开始恢复，肝功能改善，肝的纤维化程度降低，三种治疗方式均有效，并且治疗效果类似。
参考文献
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论文作者:郭惠,李梅芳（通讯作者）
论文发表刊物:《中国医学人文》2016年第15期
论文发表时间:2017/2/16
标签：肝硬化论文; 干细胞论文; 大鼠论文; 骨髓论文; 模型论文; 三种论文; 肝脏论文; 《中国医学人文》2016年第15期论文;