武冈市人民医院 湖南邵阳 422400
摘要：目的 针对肺癌患者在临床上病理特征研究的过程中，确定微小miR-340-5p血清在患者体内的表达，并充分确定其与患者相关临床病理特征之间的相关性，分析其是否能够作为潜在肿瘤的早期诊断依据。方法 采用逆转录方式的定量聚合酶链式反应进行分析，将我院在2015年6月至2016年5月期间收治的108名患者作为研究对象，所有患者中55例为肺癌患者，21例健康患者，其余32名患者患有良性的肺部疾病，良性肺部疾病患者采用miR-340-5p检测，确定两组患者血清中miRNA的表达水平，并根据研究过程中确定的表达谱进行比对，为肺癌的诊断提供临床参考价值。在研究过程中，将t检验作为统计学意义检测。结果 肺癌患者血清中的miR-340-5p检测水平显著高于健康组以及良性疾病患者，具有统计学研究意义（P＜0.05）。结论 miR-340-5p指标在肿瘤患者中表达程度较高，在临床诊断的过程中具有一定的特异性以及灵敏性，是目前对于肺癌诊断的有效指标。
关键词：血清miR-340-5p；检测；肺癌诊治；临床价值研究
肺癌是目前医学界最为常见的肿瘤之一，肺癌的致死率近40年来有了急剧的提升，是目前全球致死率最高的疾病之一，每年全球约增加160万肺癌患者，并且有130例患者死亡。对于肺癌的早期诊断是增加肺癌存活率的关键性方式。根据相关研究表明，miRNA在动物血清内普遍存在，是大量细胞分化、增值的表达基础，而肿瘤患者由于癌细胞的大量分化，会引起血清呢miRNA表达程度加强。肿瘤的标志物是早期肺癌的诊断基础，并且有着较高的特异性，且血清中miR-340-5p属于微小的RNA基因，能够在诊断的过程中进行针对性的表达程度判断，从而通过miRNA基因进行肿瘤患者的前期诊断标志。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取108例患者作为研究对象，患者在我院均接受临床检测，其中55例患者确诊患有肺癌，21例患者为健康研究对象，其余32例患者检测出非肿瘤的良性疾病。根据肺癌诊断的研究标准，在所有肺癌患者中挑选处于疾病I/II期的患者，并且采用病理学检测确诊患有肺癌。其中肺癌患者组中有男性30例，女性2例，平均年龄为（60.25±9.85）岁；健康组患者中有男性患者12例，女性患者9例，所有患者平均年龄为（65.47±8.75）岁；肺部良性疾病患者中男性占20例，女性占12例，平均年龄为（63.54±10.24）岁。所有患者的年龄、性别、病程等无关变量不存在显著差异，不具有统计学意义（P＞0.05）。
1.2 方法
1.2.1 标本采集
所有患者的检测过程中在早晨6；00~9；00保持空腹并服用EDTA抗凝血管静脉采血5.5mL，并通过混匀沉淀抗凝，保持在4℃的环境中静置30min，采用3000r/min的离心机进行10min的离心，患者的上层血浆装在1.0mL的冷冻管中，保持在-80℃的环境中留存备用。
1.2.2 miＲNA 提取
采用目前医学研究中常用的实际对血清进行处理，并使用miＲeasy Mini Kit 试剂进行miRNA的提取，主要步骤如下：（1）首先需要在400μl的血浆中加入2.0mL的QIAzol试剂进行处理，并且在室温的环境中放置5min；（2）需要在静置的血浆中加入100%浓度的氯仿，在常温环境下防止3min‘（3）将血浆在4℃的环境中进行离心，采用12000r/min的离心机常规离心15min，在离心结束后与环境温度一致静置；（4）将离心后的上层水相300μl提取出来，加入浓度为100%的乙醇，充分搅拌均匀；（5）将所有混合的液体转移到ＲNeasy Mini spin column 柱中，并常用常温15s时间内12000r/min的离心，取上层清液；（6）加入Buffer ＲWT约700μl，在此进行上步骤中的离心；（7）加入RPE约500μl，进行上步骤相同的离心，保留上层清液，重复一次；（8）更换新收集管，离心机空转2min后收集清液；（9）采用30μl的RNease-free-water对RNA进行溶解，并保持在-70℃的环境中留存备用，并采用25fmol的合成线虫miR-54，保证其数据的标准化。
1.2.4 分析定量 PCＲ 数
采用目前先进的RT-qPCR检测技术对处理后血浆中miR-340-5p中的表达程度。将miR-340-5p作为目的基因，Cel-miR-54作为内参基因进行检测，将数据进行标准化的处理。其中目的基因的具体表达量（Re）应该采用-△CT公式作为计算标准，△CTc=CTc目的基因-CTc内参基因，△CTc=CTn目的基因-CTc内参基因。并且对于目的基因的相关表达量采用对数处理（log2Re=-△CT）。
1.3 统计学处理
本文研究过程中所有数据均采用SPSS17.0软件进行统计学分析，确定miR-340-5p表达水平在组间分布的差异性将P＜0.05作为统计学意义判定标准。将P＜0.05作为统计学意义判定标准。
2 结果
肺癌组患者血清中miR-340-5p中表达水平体现的检测结构均值为11.79，标准差为2.28；非肺癌患者包括健康组与肺部良性疾病患者采用样本检验的均值为14.78，标准差为3.95.两组患者在的组间-△△CT检测为2.70，且miR-340-5p在肺癌组检测的含量与非肺癌组倍数FC为6.42。具体情况如表1所示。
3 讨论
RNA属于非编码基因，且其长度约为19bp~25bp，其中miRNAs在人体血液循环的过程中能够保持稳定的形式存在，并且环境因素的变化对其影响较小，能够承受酸碱、温度等极端条件的变化，是目前基因表达中起到核心调控作用的基因，其具体的表达量一般随着肿瘤疾病的变化而变化，并且根据目前医学界相关研究表明，肿瘤疾病与miRNA的表达量有着直接的关系。由于miRNA参与到细胞的增殖、分化、凋亡、生长的各个过程中，对于血管的生成以及具体调节有着关键性的作用。对于肿瘤而言，肿瘤细胞属于高度分化的细胞，并且繁殖能力较强，在肿瘤生长的过程中，miRNA基因的表达水平相比正常细胞有着显著提升，并且通过目前相关研究显示，肺癌疾病中能够促使miRNA表达发生变化，且目前通过miRNA芯片杂交的方式确定了大部分恶性肿瘤的具体表达谱，因此，在临床肿瘤疾病检测的过程中，miRNA能够作为早期肿瘤的参考判定依据。
近年来，世界上恶性肿瘤致死率逐年上升，并且肿瘤的发病率显著提升，由于肿瘤的前期检测一直以来是医学界的难题，导致大部分肿瘤的治疗手段较为无力，后期的恶性肿瘤只能采用药物尽可能的环节肿瘤的扩散，难以进行根治。根据目前有效的研究证明，miR-340-5p在肿瘤前期的表达水平较高，且其在采集血清稳定的情况下容易被检测，并且miR-340有着较高的灵敏度以及特异性，能够较为准确的表达出来。根据实验结果能够得出，miR-340-5p可以作为肿瘤的具体参考指标，并且在临床前期的肿瘤诊断过程中能够有效进行表达，作为特定的参考依据作为临床诊断标准。
综上所述，对于肺癌患者在临床诊断的过程中，采用对血清内miR-340-5p检测能够确定miRNA的表达水平，对于肺癌的临床诊断有着较强的可参考意义。
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论文作者:刘其贵
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2017年第16期
论文发表时间:2017/11/23
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