摘要：目的：探究分析P16蛋白在子宫颈鳞状上皮病变中的阳性表达率、与CIN分级的关系及其临床诊断价值。方法：采用免疫组织化学技术S-P法对所选取77例子宫颈上皮内瘤变（CIN）患者、5例子宫颈鳞癌患者、30例子宫颈慢性炎以及30例正常子宫颈患者的P16蛋白表达情况，并进一步分析其与CIN分级的关系。结果：子宫颈慢性炎和正常子宫颈组的P16蛋白阳性表达率为0，子宫颈鳞状上皮内瘤变和子宫颈癌患者的P16蛋白阳性表达率相对较高，其中CINⅢ级、CINⅡ级、CINⅠ级患者的P16蛋白阳性表达率分别为100.00%、88.24%、81.25%，随着CIN分级程度的加重，其P16蛋白的阳性表达率不断增加，两者呈现正相关性。且CINⅢ级患者P16蛋白诊断敏感性和均较CINⅡ级、CINⅠ级患者高，不同CIN分级的患者其P16蛋白的临床诊断敏感性存在明显统计学意义（P<0.05）。结论：P16蛋白在不同子宫颈鳞状上皮病变类型中的阳性表达率存在一定差异，可将其作为子宫颈鳞状上皮病变的临床诊断参考指标，对提高CIN分级判断具有积极的临床意义。
关键词：P16蛋白；子宫颈鳞癌；宫颈上皮内瘤变
随着我国社会主义现代化建设的不断发展，我国的医疗卫生水平得到了极大的提升。宫颈癌作为一种严重的妇女癌疾病，威胁着患者的生命安全，且经过异型增长，可发展成为原位癌，使患者的病情出现恶化。现阶段，多数相关医学学者在不断发展的分子生物学影响下将筛查宫颈鳞状上皮内病变程序中生物标志物的应用价值作为研究的热点[1-2]。由于P16蛋白属于子宫颈鳞状上皮病变进展中的生物学标志物，通过采用免疫组织化学方法，能够对子宫颈鳞状上皮病变患者组织P16蛋白进行检测，进而提高其早期诊断率[3]。本组研究中选取不同子宫颈病变患者共142例作为研究对象，对P16蛋白的检测进行了阳性表达率分析，现报告如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
随机选取我院2014年1月~2016年10月收治的142例宫颈活检疑为子宫颈鳞状上皮病变患者作为研究对象，其中子宫颈慢性炎 30 例，平均年龄为（35.8±8.4）岁；子宫颈上皮内瘤变患者 77 例，其中CINⅢ级 28 例，平均年龄为（43.7±5.4）岁，CINⅡ级 17 例，平均年龄为（50.4±6.2）岁，CINⅠ级 32例，平均年龄为（38.4±6.1）岁；子宫颈鳞癌患者5例，平均年龄为（40.5±4.1）岁；另选取30例正常子宫颈患者。经 2 名经验丰富的病理科医师实施病理诊断。患者的标本均采用10%的甲醛溶液进行处理，并用石蜡进行包埋。所有患者均符合子宫颈鳞状上皮病变的临床诊断标准，所有患者来自本院门诊和住院部，使用患者的各种资料时，均经过患者的知情同意以及伦理委员会的批准。其在年龄、病程、文化程度等方面的指标差异不大（P>0.05），无统计学意义，可进行比较分析。
1.2 方法
试剂：由北京中杉金桥生物有限公司提供的鼠抗人P16单克隆蛋白。
仪器：采用由瑞士 Roche公司提供的全自动免疫组化染色仪（型号：BenchMark XT）；德国LEICA公司提供的切片机（型号：RM2235）等。
操作过程严格按照试剂盒说明书进行，由10%中性缓冲福尔马林固定液固定病理标本，取材后经过脱水、透明 和石蜡包埋，切成3μm的连续小片，经过苏木素浸染5分钟，然后用自来水冲洗1分钟，用1%盐酸酒精分化3秒钟，然后用自来水冲洗30分钟后后使用0.5%伊红酒精浸染1分钟。浸染后使用无水酒精脱水3秒钟，之后在二甲苯中透明10分钟，取出后用盖玻片封闭。采用二步法免疫组织化学检测法进行检测。对于一抗作阴性对照则用磷酸盐缓冲液(PBS)代替，后续作阳性对照则用已知阳性切片进行[4]
1.3 观察指标[5-6]
p16 阳性标准：细胞质或细胞核着棕黄色颗粒色。P16的阳性表达主要集中在细胞核与细胞质部位，且呈现出棕黄色的颗粒形态。P16阳性为上皮弥漫连续性表达(鳞状上皮基底和副基底细胞连续性表达,表层细胞有或没有表达),没有表达、鳞状上皮或腺体局灶性表达为阴性。
1.4 统计学分析
采用统计学软件SPSS19.0对本次的研究结果进行统一的分析和处理，以P＜0.05，差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 p16 蛋白的阳性表达率分析
结合统计分析看来，142例研究对象中68例阴性、74例阳性，其中子宫颈鳞状上皮内瘤变患者中不同CIN分级的患者其P16阳性率表达不同，随着CIN分级程度的增加，P16阳性率不断升高，CINⅢ级患者P16蛋白阳性率表达达到了100.00%，CINⅡ级患者的P16蛋白阳性表达率为88.24%，CINⅠ级患者的P16蛋白阳性表达率为81.25%，不同分级的P16蛋白阳性表达率比较存在明显统计学意义（P<0.05）。见表1：
表1 宫颈组织中 p16蛋白的表达分析
注：相比于正常子宫颈组织，*P＜0.01。
2.2 p16 蛋白在子宫颈鳞状上皮病变诊断中的应用价值
由于子宫颈鳞状上皮内瘤变患者的CIN分级不同，其P16蛋白阳性表达率不同，不同分级的子宫颈鳞状上皮内瘤变患者的临床诊断敏感性也存在一定差异，其中CINⅢ级患者P16蛋白诊断敏感性相对较高，与CINⅡ级、CINⅠ级患者比较存在明显统计学意义（P<0.05）。见表2：
表2 子宫颈鳞状上皮病变诊断的敏感性与分析
注：相比于正常子宫颈组织，*P＜0.01。
3 讨论
子宫颈病变是妇科临床诊疗中较为常见的疾病类型，其中以鳞状上皮内瘤变和子宫颈癌为主，对女性的生命健康造成了严重危害，在造成女性癌症患者死亡的因素中位居全球第四[7]。子宫颈病变受多种基因表达的影响，目前临床医学中对子宫颈上皮内瘤变进行深入研究，并取得了一定的研究成果，P16的表达与子宫颈上皮内瘤变有着密切的相关性。P16能够直接参与人体的细胞调控，有效控制细胞的分裂、增殖，可以将其作为一种抗癌基因，它位于染色体部位，能够对癌细胞进行抑制，降低癌细胞的扩散；在其病理诊断方面，宫颈鳞状上皮内瘤变（CIN）的级别判定尚缺客观依据，加重了对此病实施治疗的难度[8]，CINⅠ级的病变有着接近60%的消退率，显然易发生消退，较低的病变比例持续存在并进展为浸润性宫颈癌。此外，CINⅢ级的病变易进展为浸润性癌，且持续存在，显然不宜发生逆转，所以病理诊断是患者疾病进展的重要指标[9-10]。
宫颈癌主要是一个从宫颈CIN逐渐发展到早期浸润癌，随后又继续恶化发展的缓慢过程，治疗该病，在五年之内效果较好，会有较高的生存率。因此，早期筛查、处理子宫颈病变C IN与早期癌，能够有效预防子宫颈病变癌。P16为WTSI的表达产物，国外学者在实验中发现，该蛋白能够抑制周期半代依赖性激酶4，发挥抑制癌基因的作用[11]。也有学者研究指出在正常子宫肌层人群中P16的表达呈阴性，在子宫颈肿瘤中均为阳性表达[12]。究其原因，可能为子宫颈上皮细胞在病毒增殖阶段正常分化成熟，同时将大量病毒颗粒产生并释放出来，而在细胞转化阶段将E7蛋白产生出来，使P16基因丢失下游抑制性信号，也就是pRB基因失活，无法控制细胞生长周期，进而导致子宫颈鳞状上皮内瘤变的发生。
临床及流行病学研究均证实[13]，稳定或自行消退的CINⅠ、CINⅡ病变占较大比例，向CIN3及癌进展的CINⅠ、CINⅡ病变比例占较小比例，因此要想对早期CIN患者的病变进程进行早期诊断或者有效控制，可以通过对早期CIN病变进展的标记物进行检测。目前，易导致病理诊断出现偏差的情况有以下几类：（1）CIN 病变与老年萎缩性改变等鉴别方面，出现了老年性萎缩中的鳞状上皮细胞会造成细胞有高的核浆比，常出现正常成熟丧失，基底细胞增生，局限于鳞状上皮的下1/3的基底和旁基底细胞，均容易与 CIN 病变相混淆等；（2）送检组织小、破碎，诊断受到镜下观察上皮结构不完整的影响较大；（3）CGIN 的诊断与分级，同 CIN 相似，取决于核异型性及核分裂、细胞增生情况，主观性较强；（4）早期浸润性鳞癌诊断困难。而P16作为一种敏感性和较强的子宫颈鳞状上皮病变诊断蛋白，在子宫颈鳞状上皮病变早期诊断中具有较高的应用价值。P16基因在子宫颈良性反应性病变中呈阴性表达,而且P16基因表达与不同级别子宫颈鳞状上皮内瘤变之间也有着明显差异，级别越高，P16的表达就越强，呈现出正相关的关系。以往医学研究的结论在以往的文献报道中，P16在人类其他组织恶性疾病中呈现低表达的现象，仅为55.3%[14]，有学者[15]认为，P16会随着CIN级别的升高而出现表达增加的现象，系高危型HPV感染引起了宫颈上皮细胞内P16抑癌基因表达负反馈调节失控所致，提示细胞周期出现严重紊乱，癌前病变的几率在增加。因此，对P16与CIN准确分型关系的检测对子宫颈鳞状上皮内瘤变的早期预警与防治有着重要的临床意义。
综上所述，临床上可将P16蛋白检测作为子宫颈鳞状上皮病变诊断的重要参考指标，提高CIN分级的临床评估效果。
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论文作者:张琳
论文发表刊物:《中国医学人文》2017年第1期
论文发表时间:2017/5/18
标签：子宫颈论文; 蛋白论文; 患者论文; 宫颈论文; 阳性论文; 组织论文; 细胞论文; 《中国医学人文》2017年第1期论文;