湛川 刘宝帅 赵玉龙 荣延龙 张远石 中国医科大学附属第四医院骨科 辽宁 沈阳 １１００３２ 自然科学基金项目名称:周期性压应力通过Mapk通路影响椎间盘退变的机制的研究项目编号:２０１３０１００１５－４０１ 作者简介:湛川,中国医大四院,东南大学医学院,学士,副教授,副主任医师,骨科副主任【摘要】 目的 分析探讨P３８MAPK 信号通路与腰椎间盘退变的关系,为患者的临床治疗提供可供参考的依据.方法 选择我院收治腰椎间盘退变患者４０例作为本次研究的实验组,收治时间在２０１３年２月至２０１４年２月期间,另选择同时期我院收治的４０例腰椎骨折患者作为对照组,两组患者均进行免疫组织化学技术定位检测、WesternBlot技术定量检测,分析P３８MAPK表达量的灰度值.结果 对照组P３８MAPK蛋白表达图像的灰度值为(０．８５６１±０．０２７４),实验组中纤维环完整组P３８MAPK蛋白表达图像的灰度值为(０．１６２３±０．０１３３),纤维环破裂组P３８MAPK蛋白表达图像的灰度值为(０．３５６７±０．０１３５),三组之间具有明显的统计学差异(P＜０．０５),对照组的蛋白含量少于纤维环完整组、纤维环破裂组.结论 P３８MAPK的表达含量和腰椎间盘退变程度呈正比的关系,腰椎间盘退变程度越严重,髓核细胞中的P３８MAPK表达含量越高. 【关键词】 P３８MAPK; 腰椎间盘退变; 关系; 分析【中图分类号】R４７３．７【文献标识码】B 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０２５９－０２
本文为进一步探究P３８MAPK 信号通路与腰椎间盘退变的关系,特选择了我院收治的４０例腰椎间盘退变患者作为实验组,另选择４０例腰椎间盘骨折患者作为对照组,现将报告整理完毕,具体陈述如下.
１ 研究资料和方法
１．１ 研究资料选择我院收治腰椎间盘退变患者４０例作为本次研究的实验组,收治时间在２０１３年２月至２０１４年２月期间,另选择同时期我院收治的４０例腰椎骨折患者作为对照组.实验组患者的年龄范围在２９－７３岁之间,平均年龄为(４１．０９±７．５２)岁, 男性患者数量和女性患者数量的分布比值为２４:１６,其中有１３例Ⅲ级患者、１６ 例Ⅳ级患者及１１例Ⅴ级患者.按照Spengler分型标准,纤维环完整组和纤维环破裂组各占２０例. 对照组患者的的年龄范围在２９－７３岁之间,平均年龄为(４１．０９±７．５２) 岁,男性患者数量和女性患者数量的分布比值为２３:１７.其中有１３例Ⅲ级患者、１７例Ⅳ级患者及１０例Ⅴ级患者. 纳入标准:实验组和对照组均经CT、X线及MRI检验确诊为腰椎间盘突出症及腰椎骨折患者;均经腰后路手术治疗且疗效欠佳患者;对本次研究目的和方法知情了解者. 排除标准:伴有其他病史、病变患者;血液系统、精神系统异常者;脊柱结核、脊柱肿瘤患者. 经确认,实验组和对照组患者的年龄等研究资料无明显差异(P＞０．０５),差异不存在统计学意义,两组的数据资料可用于研究对比中.
１．２ 方法两组患者均进行免疫组织化学技术定位检测、WesternBlot技术定量检测,分析P３８MAPK表达量的灰度值. 免疫组织化学技术定位检测:将石蜡切片放入至二甲苯脱蜡中脱蜡,梯度酒精水化后,放入浓度为３％的过氧化氢液中孵育,并使用蒸馏水冲洗３分钟. 加入枸橼酸盐缓冲液于压力锅中,浸没整张切片,使用大火加热,直至沸腾,进行高温高压组织抗原修复,加热至喷气后,使用自来水冲淋冷却,取出切片,使用PBS冲洗[１].WesternBlot技术定量检测:将标本组织剪切成细小的碎片,并加入１５０ul 的裂解液,充分裂解后,离心５分钟,收集上清备用,取一块９６孔板的板块,并加入２０ul不同样品的蛋白裂解液,用加样枪吹打均匀后,在３７摄氏度的环境下放置６０分钟[２].
１．３ 观察指标 对实验组和对照组患者的P３８MAPK蛋白表达图像的灰度值进行观察,P３８MAPK蛋白表达图像的灰度值越高,P３８蛋白含量越高. １．４ 数据处理 对实验组和对照组患者的P３８MAPK蛋白表达图像的灰度值使用SPSS１８．０软件进行数据处理,以９５％作为可信区间,P３８MAPK 蛋白表达图像的灰度值使用计量资料表示,采用t检验,若两组数据间的P值小于０．０５,代表组间的差异具有统计学意义. ２ 结果本研究统计结果表明,对照组P３８MAPK 蛋白表达图像的灰度值为(０．８５６１±０．０２７４),实验组中纤维环完整组P３８MAPK 蛋白表达图像的灰度值为(０．１６２３±０．０１３３),纤维环破裂组P３８MAPK蛋白表达图像的灰度值为(０．３５６７±０．０１３５),三组之间的具有明显的统计学差异(P＜０．０５),对照组的蛋白含量少于纤维环完整组、纤维环破裂组.具体详情如表１所示.
３ 讨论
腰椎间盘突出症是临床常见的中老年疾病,以坐骨神经痛和下腰痛为主要临床特征,常伴随着腰腿疼痛.腰椎间盘突出症的发病机制较为复杂,目前临床上尚未对该疾病的发病原因有明确的阐述,但多认为该疾病与椎间盘活性细胞减少、细胞外基质合成减少和组成变化等密切相关[３].３８kD 的酪氨酸磷酸化蛋白激酶———p３８MAPK(丝裂原活化蛋白激酶),主要是由３６０个氨基酸组成的３８KU 酪氨酸磷酸化蛋白激酶,在炎症和细胞凋亡中发挥重要的参与作用,同时p３８MAPK的活性又可以提高炎症因子的含量[４]. 相关的临床资料表明,退变腰椎间盘组织一般伴有细胞外基质合成和降解失衡、纤维环胶原变性、髓核含水量下降和粘弹性降低等[５],除此之外,蛋白多糖含量降低和炎症介质的大量释放也是导致椎间盘生物力学功能下降的重要原因,椎间盘弹性下降,纤维环变薄弱甚至破裂,会导致椎间盘组织突出的发生[６].P３８蛋白激酶通过内毒素刺激哺乳动物细胞,从纯化的酪氨酸磷酸蛋白激酶中分离出来,P３８是MAPK家族控制炎症反应的重要组成部分,在生理性应激、脂多糖、渗透性应激和紫外线照射下容易被激活.脂多糖、肿瘤因子、血小板激活因子、再灌注等炎症刺激,能诱导单核细胞和内源性免疫细胞内的P３８ 激活,P３８MAPK通路信号被结合蛋白激活,介导转化生长因子的信号转导,P３８激活后发生核转位,对许多蛋白激酶和转录因子具有激活和磷酸化的作用[７].P３８丝裂原活化蛋白酶信号通路是细胞内重要信号的传递者,并且参与到细胞的生长、发育、凋亡、炎症反应及应激反应的调控中,p３８MAPK 是P３８MAPK信号通路的关键酶,p３８MAPK信号通路可以参与到应激条件下细胞的免疫调节中,并对炎症反应和细胞凋亡过程有较为清晰的反映,是细胞坏死、凋亡、增殖及分化的共同通路,本研究中,对照组的蛋白含量少于纤维环完整组、纤维环破裂组,说明P３８MAPK 信号通路可使细胞出现相应的生物学效应.综上所述,P３８MAPK的表达含量和腰椎间盘退变程度呈正比的关系,腰椎间盘退变程度越严重,髓核细胞中的P３８MAPK表达含量越高.
参考文献[１] 杨海亮．P３８MAPK信号通路与腰椎间盘退变关系的实验研究[D]．福建医科大学,２０１３． [２] 熊承杰．人巨噬细胞移动抑制因子及其受体在椎间盘退变过程中的表达及其功能研究[D]．第三军医大学,２０１３． [３] 王淑君,刘立宾,黎关龙等．三七皂苷单体R１抑制低氧高二氧化碳诱导的肺动脉平滑肌细胞p３８MAPK 信号通路的活化[J]．中国病理生理杂志,[ ２０１２,２８(１):１０５－１０８． ４] 高雪松,宫丽荣,余剑波等．p３８MAPK 信号通路在电针减轻内毒素休克诱发兔急性肺损伤中的作用:与Nrf２的关系[J]．中华麻醉学杂志,２０１５,[ ３５(４):４８１－４８５． ５] 孙晓乐,杨孜,王伽略等．游离脂肪酸对滋养细胞线粒体脂肪酸氧化功能的影响及其与p３８MAPK信号通路的相关性[J]．中华医学杂志,２０１３,９３ (４７):３７８６－３７９０． [６] 刘曌宇,曾和松,李鹏程等．p３８MAPK及ERK信号通路激活在CD１５１促进内皮细胞迁移中的作用机制[J]．华中科技大学学报(医学版),２０１５,４４ (３):２５８－２６２． [８] Joko,T．,Shiraishi,A．,Akune,Y．etal．InvolvementofP３８MAPKinhumancornealendothelialcellmigrationinducedbyTGF－２[J]．ExperiＧmentalEyeResearch,２０１３,１０８:２３－３２．
论文作者:湛川 刘宝帅 赵玉龙 荣延龙 张远石
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年12月供稿
论文发表时间:2016/3/3
标签：患者论文; 蛋白论文; 灰度论文; 实验组论文; 细胞论文; 信号论文; 纤维论文; 《中国综合临床》2015年12月供稿论文;