1.河北唐山工人医院 河北 唐山063000;
2.华北电力大学(河北)校医院 河北071000;
3.河北以岭医院 河北050091;
4.河北唐山药检 河北063000。
[摘要] 目的:建立高效液相色谱法测定肾康胶囊中大黄(以大黄素和大黄酚计)含量的方法。方法:采用紫外检测器，以大黄素和大黄酚为对照品对自制的肾康胶囊中大黄(以大黄素和大黄酚计)进行含量测定 ,色谱柱: ：phenomsil BDS C18柱（250mm×4.6mm 5μm） ；流动相：乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（45∶40∶15）；流速：1.0ml/min；柱温:：30℃；进样量：10μl。结果: 在选定的色谱条件下 ，大黄素在3μg/ml -30μg /ml（ r=0.9990），大黄酚在10μg/ml -50μg /ml（r=0.9992）之间浓度与峰面积线性关系良好，其平均加样回收率大黄素为98.8%，RSD为1.4%；大黄酚为99.3%，RSD为1.1%。结论: HPLC法具有准确、 简便、灵敏度高、无干扰而且重现性好的优点 ，适合用于肾康超微粉胶囊中大黄含量的测定。
关键词 大黄素和大黄酚；高效液相色谱；肾康超微粉胶囊
【中图分类号】R336.1【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0137-02
大黄是蓼科植物的一种，药用部位为药用大黄、唐古特大黄或掌叶大黄的干燥根或茎，在中国分布范围广。在过去几千年里，在中国传统中医治疗中具有很高的药用价值，同时在国际中医药市场上地位重要。近年来、对大黄的研究也越来越重视，大多在其对破积滞、泄热毒、凉血、行瘀血等作用方面的研究，同时也用来治疗肾病、糖尿病肾病、糖尿病、黄斑病变及动脉硬化症等等[6]。含有大黄成分的药物也不断被研制。通肾络胶囊是含大黄（120g）等十一味草药微粉（1500g）的中药复方制剂。《中国药典 》2010年版一部规定大黄药材的指标成分测定为大黄酚和大黄素［1］。本实验用高效液相色谱法测定肾康大黄提取物中大黄酚和大黄素，以求建立一种灵敏、高效、经济、简便的检测方法。
1 材料
1.1仪器 二极管阵列检测器，高效液相色谱仪 (美国 Waters公司)，天平：METTLER AJ150电子天平，感量：0.1mg，Ｓartorius BP211电子天平，感量：0.01mg。
1.2 试剂
大黄素对照品( 中国药品生物制品检定所, 批号: 110756-201013，供含量测定) ，大黄酚对照品( 中国药品生物制品检定所, 批号: 110796-201017，供含量测定用，含量以99.6%计) ；肾康（通肾络）胶囊提取物（以大黄素和大黄酚的总量计不得少于0.55％）( 自制) ； 甲醇为分析纯；水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液制备
取大黄素和大黄酚对照品适量 ,溶解于甲醇并制成1ml约含大黄素10μg、大黄酚25μg的混合液，即得。
取大黄酚对照品适量 ,溶解于甲醇并制成1ml约含大黄酚25μg的混合液，即得[9]。
2.2 样品溶液制备【2】[7]
精密取 5.0062g通肾络胶囊内容物(相当于大黄约0.4g),置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超声（功率500W，频率40kHz）提取30分钟，放冷至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。[8][10]
2.3色谱条件：[13][14]
色谱柱：规格：phenomsil BDS C18柱（250mm×4.6mm 5μm） ；流动相：乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（45∶40∶15）;流 速:1.0ml/min；柱温: 30℃；进样量：10μl。[11][12]
2.4专属性考察：
按照上述实验条件和仪器 , 将供试品溶液、阴性对照溶液、大黄素和大黄酚混合对照品溶液、大黄酚对照品溶液分别注入液相色谱仪测定。结果供试品和对照品色谱图中色谱峰有相同保留时间 , 且分离度好、基线平稳 , 而阴性对照在此保留时间无色谱峰。
2.5 线性关系考察
精密称取大黄素对照品适量，分别加甲醇制成3μg／ml、6μg／ml、10μg／ml、15μg／ml、20μg／ml、25μg／ml、30μg／ml的溶液,摇匀 ,分别进样 10μl。以峰面积为纵坐标 ,以大黄素浓度为横坐标进行线性回归 ,得回归方程为: Y=1.421×10-3X+1.086，相关系数r=0.9990(n=7)。大黄素在3μg/ml -30μg /ml范围内浓度与峰面积线性关系良好。
精密称取大黄酚对照品适量，分别加甲醇制成10μg／ml、15μg／ml、20μg／ml、25μg／ml、30μg／ml、40μg／ml、50μg／ml的溶液,摇匀 ,分别进样 10μl。,以大黄酚浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标进行线性回归 ,得回归方程为: Y=4.91×10-3X +1.096，相关系数r=0.9992(n=7)。大黄酚在10μg/ml -50μg /ml范围内浓度与峰面积有良好的线性关系。
2.6 精密度试验
精密取对照品混合溶液10μl进样，重复6次，测得各次峰面积 。计算大黄素和大黄酚对照品RSD分别为0.9%和0.6%，(RSD应不大于2.0%)，精密度符合规定。
3．讨论：
3.1 波长的选择 参照《中国药典》2010年版一部测定大黄及三黄片制剂中的大黄素、大黄酚在254 nm处【1】有较好的紫外吸收，且在该方法下测定，色谱峰型较好，相应值显著，故选用测定波长为254 nm。
3.2 流动相的选择 用不同的流动相甲醇-水（80∶20）、乙腈-0.2%磷酸（83∶17）【3】、乙腈-水-冰醋酸（60∶40∶1）【4】、乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（42∶23∶35）【5】及不同比例的乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液进行试验，结果发现用流动相乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（45∶40∶15）时，分离度达到要求，基线稳定，峰型好。因此最终确定流动相为乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液（45∶40∶15）。[15]
3.3提取条件的选择 试验中比较了回流提取法【1】和超声提取法，结果超声提取30分钟与回流提取1小时效率无差异，超声提取操作简单，因此选择超声提取，提取溶剂分别比较了甲醇、乙醇、氯仿，结果甲醇提取杂质峰较少，被测成分峰面积较大，故选甲醇为提取溶剂。比较了超声提取20、30、40、50、60分钟，结果发现超声提取30分钟再延长时间提取量不再变化，因此选择超声提取时间为30分钟【2】。
参考文献
国家药典编委会.中华人民共和国药典[S] .2010年版.一部. 22-23,457-459
2 师永清，康淑荷，王爱军.HPLC法同时测定黄连双清丸中栀子苷、芍药苷、黄芩苷
盐酸小檗碱和大黄素的含量［J］.药物分析杂志，2013,33（9）：1612-1616
3 孙建新,李志浩,吴进等.RP-HPLC测定小儿化毒散中大黄素和大黄酚的含量［J］. 中医药导报，2010,10：99-101
4 杨萍.HPLC法测定胆石通片中大黄素和大黄酚的含量［J］.中国药师，2010,13（3）：64-65
5 李静，赵排风. HPLC法测定肾康丸中大黄酚、大黄素的含量［J］. 中国药师，2012 ,15（9）：1356-1357
6荆 晶，陆小丹，周旭美. HPLC法测定大黄相关制剂中大黄素的含量[J]. 遵 义 医 学 院 学 报, 2010,33(4):393-395
7韩刚，王彦雪，康欣，刘莉，喇万英. 18p一甘草酸对大黄酸在大鼠体内药物动力学的影
响[J]. 中药新药与临床药理,2010,21(3):19-21
8韩刚, 肖倩,索炜, 刘莉, 康欣 ,王彦雪. 大承气汤中大黄酸在大鼠体内的药动学研究[J]. 中国实验方剂学杂志,2011,17(18):137-139
9韩 刚,刘 莉,康 欣,王彦雪 ,赵 媛,肖 倩,郭肖菲. 大黄酚固体分散体的制备及体外溶出研究[J]. 中成药, 2011,33(10):1803-1805
10 韩 刚，阎林奇，索 炜，王成强，刘 莉，赵 媛. 大黄素固体分散体的制备及其溶出度测定[J]. 中草药，2011， 42（3）490-49
论文作者:杨素芹1 刘文惠 2张继敏,3王太亮4
论文发表刊物:《中国医院药学杂志》2016年9月
论文发表时间:2016/10/31
标签：大黄论文; 甲醇论文; 溶液论文; 色谱论文; 含量论文; 黄素论文; 河北论文; 《中国医院药学杂志》2016年9月论文;