（连云港市药品检验所 江苏 连云港 222006）
【摘要】 目的:建立中成药、保健食品中非法添加的13种抗风湿化学成分的快速测定方法。方法:采用高效液相色谱四极杆飞行时间串联质谱法( HPLC–QTOF- MS法)，使用Agilent ZORBAX Extend -C18 RRHT色谱柱(2.1mm×50mm,1.8μm)，以甲醇(A) -20mmol-1醋酸铵溶液为流动相，梯度洗脱。结果:上述13种化学成分在一定范围内具有较好的线性关系，r值均大于0.9821，精密度RSD均小于10%，加样回收率均在97.2%～103.8%之间。结论:该方法灵敏度高，专属性强，适用于对抗风湿类中成药、保健品中非法添加成分的高通量筛选。
【关键词】 快速测定；高效液相色谱四级杆飞行时间质谱；方法验证
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）26-0043-05
Rapid detection of anti rheumatic chemical components in Chinese patent medicine and health food by LC-MS/MS method
Jiang Yan, Chen Hongyan.The Institute of Drug Control of Lianyungang City, Jiangsu Province, Lianyungang 222006, China
【Abstract】 Objective To establish a method for the simultaneous screening 13 chemical components in Trad itional Medicine and Chinese health food. Methods The determination was performed by HPLC -QTOF -MS.It was used on the Agilent ZORBAX Extend-C18RRHT column( 2. 1mm × 50mm,1. 8μm) with the mobile phase consisting of methanol( A) -20mmol?L-1 ammonium acetate solution (B) in gradient elution. Results All the 13 chemical composition showed good linearity ( r >0. 9821).The RSD of the precision were less than 10%. The average recoveries were in the range of 97. 2%-103. 8%.Conclusion The m ethod was sensitive and sufficiently selective to screen chemical components in health food and Chinese Traditional Medicine.
【Key words】 Rapid determination; HPLC-QTOF-MS; Method validation
风湿病在我国具有较高的发病率。风湿性及类风湿性关节炎以疼痛、麻木、关节活动不灵为主要症状，是一种致残性非常强的疾病[1]。因此，抗风湿类中成药及保健食品在市场上比较畅销。不法商家受到利益的驱使，为了提高所谓的“疗效”，会在抗风湿类中成药和保健食品中非法添加化学物质。由于这类产品中非法添加的化学药物，未经试验验证、临床验证，对人体健康具有非常大的隐患，因此对于抗风湿性类中成药及保健食品非法添加的监测十分重要[1-3]。药检部门现行的标准是国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件（批准件编号2009025）。该方法采用三相系统对抗风湿类中成药和保健食品中非法添加化学物质进行检测。在日常检测中，采用该三相系统检测较为耗时，特别是大批量的筛查在操作上显得更为繁琐。本实验探讨运用一组流动相在较短时间内完成对需要监测的十三种非法添加的化学药物的检测。目前，在标准监测范围内的13种化学成分的结构式，如图1所示
图1 抗风湿类中成药及保健食品中需筛查的13种化学成分
a.氢化可的松、b.地塞米松、c.醋酸泼尼松、d.双氯芬酸钠、e.阿司匹林、f.吲哚美辛、g.氨基比林、h对乙酰氨基酚、i布洛芬、j甲氧苄啶、k吡罗昔康、l萘普生、m保泰松
1.仪器与试药
AG135十万分之一天平( Mettler Toledo公司)，Agilent 1260 Infinity HPLC(配备DAD检测器、元泵系统、高通量自动进样器)，Agilent 6530B Accurate-Mass Q -TOF(电喷雾离子源，正负离子模式)。
氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松、阿司匹林、氨基比林、布洛芬、双氯芬酸钠、吲哚美辛、对乙酰氨基酚、保泰松、萘普生、吡罗昔康、甲氧苄啶的对照品均购自中国食品药品检定研究院，批号分别为100152-200206、100129-201105、100012-200105、100113-201405、100503-200301、100179-201105、100334-200302、100258-200904、100018-200408、100481-200601、100198-201004、100177-200603、100031-200304；特效筋骨康胶囊（专项抽检，规格：每粒装0.3g）。甲醇、醋酸铵均为色谱纯，超纯水由Mili-Q制备。
2.实验方法
2.1 标准溶液的配制
取上述对照品10.24mg、10.31mg、10.09mg、10.00mg、10.44mg、10.08mg、10.02mg、10.17mg、10.60mg、10.35mg、10.04mg、10.33mg、10.07mg分别置于50ml的量瓶中，加甲醇25ml溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为储备液。
2.2 样品溶液的配制
取特效筋骨康胶囊内容物粉末约0.88g，精密称定，置50ml量瓶中，先加入甲醇25ml，超声处理20分钟，放冷至室温，加水稀释至刻度，振摇，放冷至室温后再加水至刻度，混合均匀，滤过。精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，用50%的甲醇溶液稀释至刻度。
2.3 色谱条件
按表1梯度洗脱：
流动相：A为甲醇，B为0.02 mol/L NH4Ac溶液
色谱柱型号：ZORBAX Extend-C18，2.1×50mm，1.8μm 所编号：SLYJ/SPZ-090
流速：0.21ml/min 柱温：30 ℃ 进样量：各 1 ?l
2.4 质谱条件
离子源：ESI 干燥气温度：350℃ 干燥气流速：8L/min
雾化器压力：35psi 毛细管出口电压：140V
检测模式：正负离子模式检测
3.结果与讨论
3.1 色谱条件优化
本实验考察了甲醇-水、甲醇-0.02mol/L NH4Ac流动相系统，见表4～12。通过比较这两个系统发现：甲醇-水在不同的比例下13种化合物分离效果较差且灵敏度较低。采用甲醇-0.02mol /L NH4Ac在进行梯度洗脱，13种化合物具有较好的分离度，峰形较好，如图2。另外，实验表明，氢化可的松、地塞米松、醋酸泼尼松相比于标准中采用负离子模式检测，其在正离子模式下检测的相应更高。本文对这三个化合物采用了正离子模式检测。
图2 混合对照品提取离子色谱图
（a.吲哚美辛 b.对乙酰氨基酚 c.萘普生 d.氨基比林 e.甲氧苄啶 f.保泰松 g.吡罗昔康 h.氢化可的松 i.地塞米松 j.醋酸泼尼松 k.阿司匹林 l.布洛芬 m.双氯芬酸钠）
3.2 质谱条件优化
本实验分别考察了干燥气温度(300、320、340、350℃)、毛细管出口电压(90、100、120、140、170V)、干燥气流量(8、9、10、11L·min-1)、毛细管电压(3500、4000V) 相应的离子响应值，结果表明干燥气温度为350℃，毛细管出口电压为140V，干燥气流量为8L·min-1，毛细管电压为4000V时，各种对照品的响应值最高。各对照品的一级质谱见图3。
图3 对照品一级质谱图
（a.对乙酰氨基酚 b.氨基比林 c.甲氧苄啶 d.保泰松 e.吡罗昔康 f.氢化可的松 g.地塞米松 h.阿司匹林 i.布洛芬 j.双氯芬酸钠 k.吲哚美辛 l.醋酸泼尼松 m.萘普生）
3.3 方法学验证
3.3.1线性范围、检测限及精密度
将储备液稀释成一系列不同浓度的混合标准溶液，按上述液质联用条件进样分析，以峰面积(Y)对质量浓度(X)进行线性回归,得13种成分的回归方程和相关系数。将对照品储备液逐步稀释，照上述液质条件测定，以S/N=3,计算各化学成分的检测限。精密吸取混合对照品溶液1μL，注入液质联用仪，重复进样6次测定，以峰面积积分值计算RSD，结果见表2。
4.总结
本文建立了抗风湿类中成药及保健食品中非法添加13种消炎镇痛的快速检测方法。考察了甲醇-水、甲醇-0.02mol /L NH4Ac流动相系统，结果表明采用甲醇-0.02mol/L NH4Ac体系进行梯度洗脱，13种化合物具有较好的分离度，峰形较好。考察了在不同的干燥气温度、毛细管出口电压、干燥气流量、毛细管电压的条件下，其相应的离子响应值。结果表明干燥气温度为350℃，毛细管出口电压为140V，干燥气流量为8L·min-1，毛细管电压为4000V时，各种对照品的离子响应值最高。相比于之前的检测标准，该方法采用一个体系的流动相，使得日常检测在操作上更为方便，节省了时间，对标准进行了补充。
【参考文献】
[1]黎雪清等.抗风湿类中成药和保健食品中非法添加化学成分的高液相色谱-质谱/质谱法检测[J]. 中国医药导报，2015,12(6):86-90.
[2]王丽平，林淑英.我国保健食品行业的发展历程与展望[J].现代食品与药品杂志，2006,16（1）：1-3.
[3]李丹，文红梅等.LC-MS/MS法快速测定中成药、保健食品中非法添加的36种化学成分[J].药物分析杂志，2010，30(8):1527-1532.
论文作者:姜燕,陈洪岩
论文发表刊物:《医药前沿》2016年9月第26期
论文发表时间:2016/9/9
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