陈茂文 高超 邹茜 刘龙珠 李耀
（长沙医学院 湖南长沙 410100）
【摘要】自舍格伦综合征这个概念提出以来，对其诊断方法就一直成为口腔医生的研究热点。舍格伦综合征是一类自身免疫疾病，病因复杂多样，诊断难度大。随着病理学技术的不断进步，对舍格伦综合征的诊断中具有重要的意义。本文旨在系统回顾各种病理学技术在舍格伦综合征诊断中的应用。主要包括免疫荧光技术，酶联免疫吸附检测，SP染色法和ISH技术，拉曼光谱特征研究，免疫印迹法免疫细胞分离钝化和PCR扩增技术等，为提高舍格伦综合征诊断效率提供依据。
【关键词】 病理学技术；舍格伦综合征；SS诊断标准
【中图分类号】R44 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）02-0057-02
舍格伦综合征(Sjogren ssyndrome，SS)是一种破坏自身外分泌腺如泪腺、唇腺的一种自身免疫性疾病，特征表现为口腔黏膜及结膜干燥，并伴有各种自身免疫性疾病。病变局限于外分泌腺者称为原发性舍格伦综合征，而伴发风湿性关节炎，系统性红斑狼疮等其他自身免疫病者称为继发性舍格伦综合征。[1]病理表现为淋巴细胞大量侵润腺体及组织细胞增生，其中侵润细胞主要为T细胞。[1-2]SS的发病机制尚未明确。早在二十世纪三十年代，瑞典的眼科医生Sjogren首先报道了干燥性角膜炎伴口干症的病例，部分患者伴有其他免疫性疾病。随着人们对SS进一步的认识和病理学技术的发展，SS被认为是一种自身免疫性疾病，正常人群中的发病率为0.6%，男女比例为1:9[3-4]。
1.SS的诊断标准
SS的诊断多采用综合性治疗的方案，目前国际上较多的是2002年国际诊断分类标准。诊断标准①口干症状②眼干症状③口干体征，放糖实验30min内未化；④眼干体征，施墨实验≤5mm/5min；⑤组织学检查，唇腺淋巴细胞侵润灶＞1；⑥血清学检查，类风湿因子，抗SS-A，抗SS-B至少一项为阳性。SS在无任何潜在疾病的情况下，有下述任何两条即可诊断：①符合上述分类标准4条或4条以上，但必须含有第4条和第6条。②2,4,5,6中任何3项阳性，继发性SS患者有潜在的疾病，而符合上述分类标准1,2中的任何一条，同时符合3,4,5中的任何两项即可诊断[5]。
2.病理学技术的应用
随着医学技术的发展和进步，使病理技术进入了一个崭新的时代，新的技术，产品的投入应用推动着病理技术的发展，逐渐形成了传统病理技术的石蜡切片，HE染色与免疫组化染色，分子生物的密切结合，形成了新的现代病理学技术。目前已近进入数字病理时代[6]。病理学技术在对口腔疾病的诊断中越来越占有重要的地位，特别是在口腔黏膜病，头颈部肿瘤，以及唾液腺疾病的诊断中被广泛应用。本综述主要回顾现代病理学技术在舍格伦综合征诊断中的应用。
3.病理学技术在舍格伦综合征诊断中的应用
3.1 免疫荧光技术在SS诊断中的应用
免疫荧光技术是免疫组化技术的一种手段，运用抗体和抗原结合的原理，再辅以标记物能在组织中或细胞内显示抗体或抗原成分及其分布的方法[7]。包括直接免疫荧光技术和间接免疫荧光技术。由于免疫荧光技术具有组织特异性和抗原组织的精确性，故已成为医学领域中广泛的研究及检测方法之一。
随着该技术的发展，在口腔疾病诊断中已得到广泛应用。在对SS诊断中，由于在舍格伦综合征中患者腺体内的腺管上皮细胞变性，腺泡被大量淋巴细胞取代，机体产生自身循环抗体和抗导管抗体，可通过间接免疫荧光技术和直接免疫荧光技术检测出来[8]。
3.2 酶联免疫吸附检测
酶免疫技术(ELISA)基本的原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价键结合后，酶标记抗体可以与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合[9]。加入底物浓度后，酶作用下使其所含的氢供体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现呈色反应[10]。
由于ELISA敏感性高，操作简便，配套仪器的使用发展视操作程序规范化和自动化，并进一步提高的稳定性，被运用于舍格伦综合征的病理诊断中。骨桥蛋白（OPN）是今年发现的一种炎症细胞因子[11]。广泛存在与炎症部位的细胞外基质中，通过调节T,B细胞的分化和功能，在舍格伦综合征发病，发展中起着关键作用。一些研究表明TNF-α作为CD4＋T分泌的最重要因子，在SS病患的唾液腺和泪腺病损中起着调节作用[12-14]。TGF-β是多功能细胞因子，抑制T.B细胞分化和增殖，是一种负性免疫调节因子[15]。在对SS患者血清ELISA检测中发现骨桥蛋白，TNF-α，TGF-β比正常者有明显增高。
3.3 SP染色法和ISH技术在诊断中的应用
Sp染色也是免疫组化的一种，同样是利用抗原抗体结合的原理通过将活化的生物素和免疫球蛋白等共价偶联后，加入与荧光或过氧化物酶结合的卵白素，利用生物素和卵白素的亲和结合，显色的方法[16]。
在对SS患者血清特异性蛋白的诊断中广泛应用的技术，人类防御素-2（HB-2）,原发BAX蛋白在SS发病中起到促进的作用。HB-2通过趋化因子活化T,B细胞的活性调节体液免疫和细胞免疫，参加机体特异性免疫。对于BAX蛋白的研究国内外报道的比较少，近年来大量文献显示SS疾病的发展可能与细胞凋亡有关。BAX作为一种内源性的凋亡途径蛋白，在凋亡增强时表达量增加。CytC作为呼吸链传递物质也是一种细胞凋亡先关的蛋白[17]。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆正常情况下BAX存在胞质中，CytC存在于线粒体内膜。当受到凋亡刺激时BAX被释放到线粒体外膜促进CytC的释放。
3.4 免疫印迹法在诊断中的应用
免疫印迹技术是用凝胶电泳分离蛋白质，并将与分析的蛋白质转移到膜上，然后利用特异性抗体进行检测。一般由凝胶电泳，样品印迹和免疫检测三部分组成[18]。由于此技术能够对特异性蛋白进行测定，因此被用于SS的诊断治疗中。
近年来关于α-胞衬蛋白抗体诊断的研究很多，2012年白明茹 发表了关于α-胞衬蛋白抗体对诊断ss的价值，通过免疫印迹技术对α-胞衬蛋白抗体进行免疫检测并通过QUADAS标准进行比较。证实了免疫印迹技术对SS有较高的诊断价值一说。
3.5 免疫细胞分离钝化和PCR扩增技术
随着免疫技术的不断发展，研究水平从细胞水平达到了分子水平，免疫细胞的的分离和钝化技术的原理是利用血液中的细胞成分存在密度差异，血浆和血小板密度最低，分布于上层，红细胞和粒细胞密度最大，将存在于底部，而密度略低于分层液，故分布于表层。通过免疫细胞分离得到的目的细胞在进行PCR的扩增研究分子水平的差异。
在SS患者诊断中免疫细胞分离钝化及PCR扩增技术主要是用来检测T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3（TIM-3）和mir-146a的表达量。TIM-3表达与Th1细胞表面在自身免疫疾病发病中起关键作用。研究发现，TIM-3表达紊乱ss疾病进程相关，提示TIM-3在SS中是一个关键的靶点。研究证实，SS患者外周血中TLR9存在差异性表达升高，mir-146a作为TLR9的负反馈调节[19]。
虽然目前关于SS的病情评估已有较多的实验室标记物，但任不足以清晰的判断病情发展及预后。已有研究表明TIM-3参与了系统性红斑狼疮，类风湿关节炎等自身免疫疾病。孔伟等。在对33例SS患者和33例正常者外周血单个核细胞TIM-3mRNA表达量分析是发现SS患者比正常者TIM-3mRNA明显升高。同样，在运用免疫细胞分离钝化及PCR扩增技术对mir-146a检测中发现SS患者比正常人明显升高。因此免疫细胞分离钝化及PCR扩增技术可用于诊断SS疾病。
综上所述，2002国际SS诊断标准是一个临床可行的客观指标。免疫荧光技术在鉴定ANA
ENA，IFNα方面显色效果明显。酶联免疫吸附敏感性高，操作简便在对OPN，TNF-α，TGF-β检测中目前最有效的方法。SP染色法和ISH技术，对HB-2，BAX蛋白的鉴定特异性高，目前运用地还是不很广泛。拉曼光谱特征研究近年来在SS诊断中运用开来，具有无创，快速，便捷，准确等优势，不仅对于SS病变中大分子物质的改变可鉴定，还具有临床鉴别诊断功能。免疫印迹法能够对α-胞衬蛋白抗体等特异性蛋白进行鉴定，并具有较高的诊断价值。而免疫细胞分离钝化和PCR扩增技术主要运用于SS分子水平的诊断中，例如mir-146a和TIM-3mRNA表达量的分析。
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论文作者:陈茂文,高超,邹茜,刘龙珠,李耀
论文发表刊物:《心理医生》2016年2期
论文发表时间:2016/7/27
标签：免疫论文; 技术论文; 综合征论文; 细胞论文; 抗体论文; 格伦论文; 蛋白论文; 《心理医生》2016年2期论文;