莫志成[1]2002年在《GAGA样元件结合蛋白的筛选克隆及其对Hsp90基因调控作用的初探》文中指出热休克蛋白家族成员中的分子量为90kD的热休克蛋白(Hsp90)是真核细胞中最丰富的蛋白质之一。Hsp90能使在热休克等应激反应中积累的误折迭蛋白重新折迭，并可促进已变性的蛋白质降解。Hsp90还参与激素受体、某些转录因子、信号途径和翻译起始阶段的激酶及一氧化氮合酶的成熟、胞内转运和活性调节。因此Hsp90在真核细胞中有着广泛而重要的功能。对人hsp90基因调控的研究发现，很多转录因子可以通过在hsp90基因中的调控元件参与对hsp90基因的表达调控，如：CREB，p300，p53等，本组以往对人hsp90基因调控序列进行的研究发现，在人hsp90基因的调控序列中有GAGA样重复序列分布。GAGA元件在果蝇热休克基因(hsp)和一些与发育相关基因的5’上游序列中较为常见，GAGA因子(GAGA Factor，GAF)是一种通用的、组成性表达的转录因子，它在hsp基因及发育相关基因的调控、维持染色质结构及在细胞周期等方面发挥重要作用。但这些序列对人hsp90基因的调控的作用尚不清楚，关于在人类细胞中是否存在与GAGA样元件结合的蛋白至今尚未见报道。 利用含有GAGA元件核心序列的寡核苷酸片段作探针，与42°C热休克处理前后的Jurkat细胞核抽提物进行电泳迁移率变更分析(EMSA)检测，发现在热休克前后均出现特异结合带，而且在热休克后更明显，提示在人Jurkat细胞核抽提物中可能存在GAGA样元件的特异结合蛋白，并且在热休克时结合活性增加。为筛选人Jurkat细胞中GAGA样元件的结合蛋白，我们采用酵母单杂交体系对人Jurkat细胞MATCHMAKER cDNA文库进行了筛选，结果出现63个His~+阳性克隆。进一步进行β-半乳糖苷酶活性分析，发现其中9个克隆显示较强的β-半乳糖苷酶活性。 为了排除假阳性，我们用反转录反应标记Jurkat细胞总cDNA探针，与上述9个候选的阳性克隆进行分子杂交，结果显示其中6个克隆出现阳性杂交信号，表明该6个阳性克隆确实来自Jurkat细胞基因。经电泳迁移率变更分析进一步验证，其中两个阳性克隆表达产物可与GAGA样元件序列特异结合，分别命名为GLBP1与GLBP2。测序结果显示，得到的GLBP1具有完整的开放阅读框架，其cDNA编码478个氨基酸
王宁[2]2003年在《hsp90β基因远端DNaseI高敏感位点的研究及其5’上海远端相关基因组片段功能的初步研究》文中提出HSP90是热激蛋白家族(HSP)的主要成员之一，它在细胞中呈高组成性表达，热激和其他应激条件可以进一步诱导其表达。HSP90作为分子伴侣广泛参与细胞的信号转导、激素应答及细胞周期调控过程，对细胞在生理、病理及应激条件下的生存发挥了重要作用。因此研究HSP90蛋白基因表达调控机制具有重要的生物学意义。 热休克蛋白的表达调控是一个极为复杂的过程，包括染色质水平的活化、特异性转录诱导因子--热休克因子(HSF)的活化、热休克蛋白mRNA稳定性的增加、热休克蛋白与活化的热休克因子结合，反馈抑制形成，从而使体内HSP的表达量与所处的环境相适应。这是一个极为精细的调控过程，对其机制的阐明将为真核基因表达调控的研究建立一个良好的模型。 热休克蛋白家族的成员多达数十个，但它们的表达调控机制却有很多的共同点，特别是它们的转录调控，具有基本相似的模式，这也是热休克蛋白保守性的一个重要表现。热休克蛋白基因的启动子区通常包括介导基础转录的一系列反式因子SP1、CAAT结合蛋白和ATF等的结合序列，在它们的5’上游是介导应激条件下转录活化的数个热休克元件。这些顺式元件的共同作用保证了HSP在正常和应激状态下充分发挥其功能。 Wu于1980年在研究活化染色体的结构改变以及活化染色体对基因表达调控作用的影响过程中，首次在果蝇的hsp70基因上发现了多个DNaseI高敏感位点。Michael于1981年研究了果蝇hsp22,hsp23,hsp26,hsp28基因座5’端的DNaseI高敏感位点。1992年Kullum和Schedl进一步证实果蝇的hsp70基因的一个DNaseI高敏感位点scs具有隔离子样的功能。1995年Zhao等发现并鉴定出与此scs位点相互结合并发挥隔离子作用的结合蛋白BEAF。 从染色质水平研究基因的表达调控机制，能够真实可靠的反映体内自然状态下基因调控的机制。为了从染色质水平了解hsp90β基因的调控情况，我们对Jurkat细胞中人hsp90β基因远端的DNaseI高敏感位点进行了分析。 1．Jurkat细胞中hsp90β基因远端的DNaseI高敏感位点的研究 参照本实验室刘秉胜博士对hsp90β基因DNaseI高敏感位点研究的实验结果，
参考文献：
[1]. GAGA样元件结合蛋白的筛选克隆及其对Hsp90基因调控作用的初探[D]. 莫志成. 中国协和医科大学. 2002
[2]. hsp90β基因远端DNaseI高敏感位点的研究及其5’上海远端相关基因组片段功能的初步研究[D]. 王宁. 中国协和医科大学. 2003