广东省人民医院 广东省医学科学院耳鼻咽喉头颈外科 广东广州 510080
摘要：目的 对喉癌标本库进行规范化管理及维护，为喉癌的科学研究提供高质量的标本。 方法 采集并保存喉癌组织和血标本，定期提取部分标本总RNA进行质量鉴定，加强对标本的统一管理和对设备的保养和维护。结果 对广东省人民医院喉癌标本库进行规范化管理和维护，低温冰箱等设备运转正常，对喉癌组织标本和血标本进行的质量检测均显示质量良好。 结论 喉癌标本库得到了良好的管理和维护，有助于充分保护、合理利用喉癌标本资源，对喉癌的研究具有重要的意义。
关键词： 喉癌 ； 标本库 ； 维护
Management and maintenance of laryngeal cancer biobank
GONG Suiqing, ZHANG Siyi, LU Zhongming, LIANG Shuyi. Department of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery, Guangdong General Hospital and Guangdong Academy of Medical Sciences, Guangzhou 510080, China
Corresponding author: ZHANG Siyi
Abstract: Objective To manage and maintain a standardized laryngeal cancer biobank and provide high-quality specimens for studies. Methods The laryngeal cancer tissue and blood specimens were collected and preserved. Total RNA of a few specimens were extracted for quality control. Management and maintenance of laryngeal cancer biobank were conducted. Results The management of specimens and maintenance of equipments were improved. Various equipments including low temperature refrigerator were in good conditions. The samples were high-quality. Conclusion The laryngeal cancer biobank is well managed and maintained. It can preserve laryngeal cancer specimens for studies. A well managed laryngeal cancer biobank is important for medical research.
Key words: laryngeal cancer ；biobank ； maintenance
喉癌是最常见的头颈癌之一，在头颈恶性肿瘤中居第二位，而且其发病率逐年上升[1]。喉癌的病理类型绝大多数为鳞癌，尽管治疗手段有进步，喉癌的生存率并未得到提高[2]。目前喉癌的发病机制仍不清楚，有待于进行深入的研究。肿瘤标本是进行科学研究的重要资源，我院于2010起开始建立喉癌标本库，最大限度地保护喉癌标本资源。为了合理利用并为分子生物学及临床研究提供充足、高质量的标本，促进喉癌的研究，我科在临床管理中探讨喉癌标本库的规范化管理和维护，取得良好效果，特报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料 肿瘤标本及血液样本均采集于2010年1月至2016年12月在广东省人民医院耳鼻喉科接受喉癌手术的病人。
试剂及仪器：
-80 ℃超低温冰箱（日本三洋），4℃冰箱（中国华凌），离心机（德国Eppendorf），采血管（美国BD），RNAlater组织保存液（德国Qiagen），NanoDrop 1000 分光光度计（美国Thermo）。
1.2 标本收集、处理、保存方法：
1.2.1 组织标本的收集：将标本切成最大直径小于0.5 cm的小组织块，投入到RNAlater液中或放在标记好的EP管并将其投入液氮中，然后转移放入-80℃超低温冰箱保存。
1.2.2 血清和血浆的采集及处理：患者分别在手术前、术后1周采血，每次采16mL，分成四份标本，2份4mL血标本不抗凝，室温下静置 1 h后，2000 r/min离心15 min，用移液器小心吸取上层血清，按每管1200μL分装成两管；另2份4mL血标本经EDTA抗凝后1 h内2000 r/min离心15 min分离，上层血浆分装成两管。上述标本作好标记，在采血后2 h内冻存在-80 ℃超低温冰箱中。
1.2.3 标本的标记和储存：标本分装入标本瓶内，作好标记：喉癌组织(Lt)、癌旁正常组织(Lnt)、术前血浆(Lp)、血清(Ls)、术后一周血浆(Lpw)、血清(Lsw)。
2 标本库的管理和维护
2.1 制定标本库管理制定和标准操作规程（SOP） 明确标本库工作人员职责，制定《标本库的管理制度》、《人员培训制定》、《标本采集程序》、《设备使用、保养程序》以及《数据采集、保存程序》等。
2.2 加强标本质量管理 首先要加强标本采集管理，组织标本要求取材部位必须准确无误，严格控制组织和血液标本离体至冻存时间，要求在30分钟以内；其次，加强标本库的设备管理，搞好设备的保养和维护，每台冰箱电源线路必须是专线，而且要有备用电源，要求冰箱温度控制在±10C以内，标本库工作人员每天填写冰箱温度记录表，如电源出现故障，应立即更换电源，如冰箱出现故障应立即及时把标本转移到备用冰箱，避免标本反复冻融，避免组织DNA、RNA和蛋白质的降解，同时要立即报告设备科进行维修，并填写冰箱维修档案；建立定期随机抽检机制，定期对所保存标本的质量进行鉴定，用分光光度计检测，若吸光度OD260/OD280>1.6，再用1%的琼脂糖凝胶电泳后，可两条明显的带28s和18s，若28s亮度比18s要高1-2倍，则表明RNA标本保存完好。
2.3 加强相关工作人员培训 所有与标本库工作相关的人员必须接受专业知识培训，工作人员包括：标本采集人员、标本库管理人员、相关课题组成人员等，具体培训内容有：“三基三严”和标本库各项规章制度的培训和考核，标本采集和保存知识，标本的检测知识，设备的使用和保养知识；定期选送人员到科研单位学习和培训。提高相关人员的相关知识水平，确保标本采集、保存过程中各项操作有序、科学、规范、统一，最大限度的提高标本保存质量。
图1 样本的采集规范
3 结果
3.1 纳入标本库喉癌患者 共采集了386例喉癌病人的肿瘤组织及癌旁正常组织和82例喉癌病人的术前、术后血浆和血清标本。
3.2 标本的RNA提取及鉴定 随机提取了肿瘤或癌旁组织的RNA，对样品经分光光度计检测，所有样本提取的总RNA的A260/280均在1.9～2.1之间；琼脂糖凝胶电泳：28s和18s的RNA呈现明显、锐利的条带，而且28s与18s条带之比约为2∶1。结果表明所有样品总RNA的质量可靠，没有降解或污染，可用于各种后续实验。
3.3 成效 喉癌标本库的建立，使我科对标本做到了科学有序的管理，并做到统一标准、统一方法、专人负责、信息化管理、及时维护，为科研提供资源，节省了临床医务人员的宝贵时间，缩短了科研周期，加快了研究进程，节省了科研经费，提高了科研效率。
4 讨论
标本库由于具有规范统一的取材标准及定期的质量控制而保证了标本的有效性及稳定性，而且可节省工作时间，加快研究进程。自上世纪末西方发达国家先后建立起肿瘤标本库以来，肿瘤标本库的战略地位越来越受到研究者的重视。然而长期以来国内大多数医院没有建立起规范的肿瘤组织库和标本管理方法，存在许多问题，亟待大力改善。虽然近年来国内部分单位已开始建立了肝癌等多个标本库，但大规模的喉癌标本库在国内至今仍未见相关报道。
建立规范的喉癌标本库，收集和保护喉癌病例资源，对于喉癌的进一步深入研究至关重要。由于之前大多研究者仅为完成某一特定研究项目而收集相关标本，课题结束后标本收集也随之结束，其所收集的标本因后续无人管理而保存不当甚至不再进行保存，造成了标本的遗失浪费。
从建立喉癌组织和血标本库至2018年6月，我科共成功收集386例配对的喉癌/癌旁正常组织标本和246例血浆及血清标本，分光光度计和凝胶电泳检测显示标本质量良好。科室标本库的日常工作由专人负责，人员相对固定，责任明确，便于管理。建立喉癌病人全面、准确的信息库，提高了标本管理和使用的效率和准确性。
肿瘤患者的组织标本保存有多种方法，如液氮、1640液、RNAlater等。液氮速冻的标本可用于多种研究; 1640液保存的标本可用于细胞培养。RNAlater是一种新型的组织保存试剂，能确保下游分析结果准确，其缺点是价格较昂贵。我科为了保证实验结果可靠，需要提取RNA的标本全部使用RNAlater进行保存。组织标本的离体时间对于标本的保存质量十分重要。我科的经验是在肿瘤离体半小时内留取组织较为合适。
肿瘤病人血液标本库也是研究肿瘤病因的重要基础[8]，是一个贮藏肿瘤血标本的系统，专为今后的研究而建立。它可为研究肿瘤提供可追溯性样本资源，为重大科研课题提供充足的研究素材。然而，对血标本的质控要求比组织标本要高得多。有研究显示，样本储存时间对基因的表达没有明显影响，但使用肝素抗凝可能会明显抑制基因表达。
喉癌标本库的规范化管理和维护对肿瘤标本及血液样本提供了质量保证，有助于充分保护、合理利用喉癌标本资源，具有十分重要的意义。
参考文献
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论文作者:陈赡 龚穗清 王利平* 张思毅 卢仲明 梁淑仪 郭少丽
论文发表刊物:《中西医结合护理》2019年第03期
论文发表时间:2019/4/23
标签：标本论文; 喉癌论文; 肿瘤论文; 组织论文; 冰箱论文; 血浆论文; 血清论文; 《中西医结合护理》2019年第03期论文;