【摘要】目的：分析实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)在妇女生殖道病原体感染诊断中的应用价值。方法：我院2015年1月至2017年12月疑似生殖道病原体感染的女性患者200例为研究对象，分别采取免疫层析胶体金检测法、SAT比较沙眼衣原体（CT）的阳性检出率。采用培养法和SAT比较解脲支原体（UU）的阳性检出率，采用SAT检测生殖支原体（MG）的阳性率。结果：在CT检测中SAT的阳性率为6%，胶体金阳性率为4%，经卡方检验，χ2=0.01,P>0.05差异无统计学意义。对4份SAT阳性而胶体金阴性的差异样本进行双脱氧酶终止法检测，结果：4份均为阳性。在UU检测中SAT的阳性率为35.5%，培养法阳性率为30.0%，经卡方检验，χ2=0.01,P>0.05差异无统计学意义。对4份培养阳性而SAT阴性的差异样本进行双脱氧酶终止法检测，结果1份为阳性，3份为阴性；对15份培养阴性而SAT阳性的差异样本进行双脱氧酶终止法检测，结果14份为阳性，1份为阴性。SAT检测MG的阳性率为3.5%（7/200）。结论：培养法是UU检测的临床金标准，然而却存在一定的不足之处，如费时、操作繁琐、敏感性低等，更需要进一步确认。胶体金法检测CT则耗时较长，且检测工艺较为繁琐。采用SAT检测女性生殖道沙眼衣原体、解脲支原体、生殖支原体具有较好的应用效果，检测时间短、成本低，在临床可作为病原体感染判断依据。
【关键词】实时荧光核酸恒温扩增技术；病原体感染；生殖道
【中图分类号】R711 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）30-0126-02
解脲支原体（UU）、沙眼衣原体（CT）、与生殖支原体（MG）为临床中泌尿生殖道疾病的常见致病病原体，正确的诊断疾病的感染类型，实施针对性治疗是对抗女性生殖道病原体感染疾病的重要途径[1]。以往采取培养法检测，但现有研究提出SAT在病原体诊断中具有更好的效果，敏感度更高[2]，为进一步探索SAT在CT、UU、MG 3种病原体感染中的诊断价值，本研究将SAT与其他检测方法进行对比，获得一些收获，现将本研究报道如下：
1.资料与方法
1.1 一般资料
我院2015年1月至2017年12月女性患者共200例为研究对象。所有患者均存在尿频、瘙痒、白带增多等临床症状。所有患者年龄范围（24～49）岁，平均年龄（31.74±6.25）岁。所有样本均为女性宫颈拭子，将专用无菌拭子深入阴道内取5份宫颈样本，2份用于沙眼衣原体检测、2份用于解脲脲原体检测、1份用于生殖支原体检测。取样后立即送检。培养使用的样本立即进行培养，胶体金检测的样本根据试剂说明书操作，使用SAT检测的样本放入保存液中待测（4℃）。
1.2 实验材料与试剂
使用奥林巴斯智能生物图像导航仪进行观察，SAT由上海仁度生物科技有限公司生产，上海天美科学仪器有限公司提供的紫外-可见分光光度计。
1.3 方法
对获取的样本分别采用胶体金法和SAT检测CT；用培养法和SAT检测UU；对于检测的差异样本用双脱氧链终止法验证；用SAT检测生殖支原体。
1.4 结果分析法
结果使用阳性结果数量、阴性结果数量和阳性率表达，将结果输入SPSS20.0，计数资料采取χ2检验，计量资料进行t值检验，t＜0.05为差异具有统计学意义。
2.结果
2.1 在CT检测中SAT与免疫层析胶体金法比较，其中SAT的阳性率为6%，胶体金阳性率为4%，经卡方检验，χ2=0.01，P＞0.05差异无统计学意义。对2份SAT阳性而胶体金阴性的差异样本进行双脱氧酶终止法检测，结果 2份均为阳性。在UU检测中SAT与培养法比较，经SAT的阳性率为60.5%，培养法阳性率为56%，卡方检验，χ2＞0.02，P＞0.05，差异无统计学意义。对6份培养阳性而SAT阴性的差异样本进行双脱氧酶终止法检测，结果1份为阳性，5份为阴性；对15份培养阴性而SAT阳性的差异样本进行双脱氧酶终止法检测，结果14份为阳性，1份为阴性。SAT检测MG的阳性率为3.5%（7/200）。综上表明SAT的灵敏度高，特异性相对较好，可较好应用于CT、UU、MG的临床检测中。
表1 CT-SAT与CT-免疫层析胶体金检测结果比
3.讨论
临床检验工作中培养法作为多数微生物检测金标准而存在，但其培养时间长，阳性率低导致其成为病原微生物诊断的瓶颈。分子诊断技术为临床提供了快速诊断疾病的可能。常规的聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）检测的是DNA，但是DNA在环境中较为稳定，会出现假阳性的情况，在临床上影响疾病诊断[3]。近些年SAT技术在临床中的应用范围越发广泛，成为病原体感染检查的主要手段之一，具有扩增效率高，在整个诊断耗时短的特点。其产物和模板均为RNA，更有利于RNA扩增，其灵敏度高、特异性高，同时具备反应条件简单，操作简便的优势；另RNA容易降解，可大大减少污染。许多学者均提出实时荧光核酸恒温扩增技术在生殖道病原体感染中具有较好效果[4]。包杰，陈丹[5]在其研究中提出SAT技术较液体培养能够更准确的诊断不孕不育人群中解脲支原体感染，阳性率高于液体培养法，且认为该种检验方法成本低廉，检验迅速。本研究对我院疑似CT、UU、MG感染的女性患者实施SAT检测，发现对患者沙眼衣原体的检测，SAT技术阳性率（6%）高于胶体金技术（4%）；对患者解脲脲原体的检测，SAT技术阳性率（35.5%）高于培养法（30.0%），本研究效果满意与前人的研究结果相一致。
MG的分离培养时间需50天以上，临床上无法实际应用，而抗体免疫的方法存在交叉感染，准确性很低，无实际临床意义。2013年世界卫生组织的性传播疾病诊断指南将核酸扩增法（NAAT）列为生殖支原体唯一的诊断方法并指出利用16S rRNA为靶标的RNA检测技术，在灵敏度上比PCR要高，它是目前一种灵敏度、特异度均非常高的MG检测技术[6]。本研究采用SAT技术检测患者生殖支原体感染情况，阳性率为3.5%，与国内生殖支原体发病率保持一致。
综上所述，疑似沙眼衣原体、解脲支原体、生殖支原体的女性进行实时荧光核酸恒温扩增技术检测具有较好的应用效果，检测时间短，成本低，具有较好的临床价值，可用于临床病原体感染的诊断。
【参考文献】
[1]张宏萍,包杰.实时荧光核酸恒温扩增技术和尿液快速检测法对孕前优生健康检查人群中淋球菌检测的应用比较[J].数理医药学杂志,2018,31(06):907-909.
[2]石瑛,王云凤,路璐,任静静,马丹,李琳.实时荧光核酸恒温扩增技术在解脲脲原体检测中的临床应用价值[J].检验医学,2017,32(11):1043-1045.
[3] Balsat M,Ｇalicer L,Wargnier A,et al.Diagnosis of Ure-a plasma urelyticum septic polyarthritis by PCR assay and electrospray ionization mass spectrometry in a patient with a-cute lymphoblastic leukemia[J].J Clin Microbiol,2014,52(9):3456-3458.
[4]肖秀美,李昂,马啸龙,刘宠,李晶,郑佳佳,姚贝.实时荧光核酸恒温扩增方法检测男性生殖道感染的临床观察[J].中国皮肤性病学杂志,2017,31(11):1217-1219.
[5]包杰,陈丹.实时荧光核酸恒温扩增技术和液体培养法在不孕不育人群解脲脲原体检测中的应用比较[J].实验与检验医学,2017,35(05):673-676.
[6] World Health Organization.Laboratory diagnosis of sexually transmitted infections, including human immunodeficiency virus[M].Geneva: World Health Organization, 2013.
论文作者:石艳艳,朱巧英,罗红权,陈新敏,雷萍,李宁
论文发表刊物:《心理医生》2018年30期
论文发表时间:2018/12/10
标签：阳性论文; 支原体论文; 病原体论文; 胶体论文; 阴性论文; 核酸论文; 样本论文; 《心理医生》2018年30期论文;