（天水四〇七医院检验科；甘肃天水741000）
摘要：目的 了解本地区儿童呼吸道感染流感嗜血杆菌的分布及耐药情况，从而有效指导临床合理用药。方法 采集我院呼吸道感染患儿的痰及咽拭子等呼吸道标本，应用嗜血杆菌专用巧克力培养基分离细菌，进行药敏试验。结果 758份标本分离得到156株流感嗜血杆菌，分离率为20.5％。β-内酰胺类抗生素的耐药性较低，尤其是头孢类抗生素，而对复方新诺明的耐药率较高。结论 应重视儿童呼吸道感染流感嗜血杆菌的检测及耐药性监测指导临床合理使用抗菌药物。
关键词：流感嗜血杆菌；耐药性
嗜血杆菌是引起儿童呼吸道感染的主要治病菌之一，常可引起肺炎、支气管炎、鼻炎、咽喉炎、中耳炎等。患者主要集中在是5岁以下儿童，4～18个月的儿童为重要易感人群[1］。为了解本地区儿童呼吸道感流感嗜血杆菌的致病及耐药情况，我们对2106年1月～2017年8月门诊及住院的758例呼吸道感染儿童的痰及咽拭子等呼吸道标本进行流感嗜血杆菌分离检测及耐药分析。
1. 资料与方法
1.1 病例 2016年1月～2017年8月我院门诊及住院部呼吸道感染患儿758例，年龄范围为6个月～10岁。其中上呼吸道感染标本321例42.3％下呼吸道感染标本437例57.6％。患儿由专人用鼻咽拭子采取鼻咽分泌物标本，或者用一次性负压吸痰器经鼻导管抽吸痰液，样品在低倍镜下观察痰白细胞和上皮细胞数留取合格痰标本进行细菌培养。
1.2 分离培养与鉴定 将分泌物标本及痰液接种于哥伦比亚型血平板增菌培养基、嗜血杆菌专用巧克力培养基（赛默飞世尔生物化学制品公司）。放置于35℃、5％CO?的环境中，培养18～24h后观察结果。挑取灰白色、扁平、湿润、半透明的可疑菌落鉴定。革兰染色及卫星试验作初步鉴定。属内鉴别可利用细菌对X、V因子的需要和溶血性，初步区别不同的嗜血杆菌种。在血琼脂及MH琼脂上做卫星试验，血琼脂上卫星试验阳性，MH琼脂上卫星试验阴性，且菌落不溶血，初步鉴定为流感嗜血杆菌。血琼脂及MH琼脂上卫星试验同时为阳性者初步鉴定为副流感嗜血杆菌，进一步的鉴别可通过生化试验进行。
1.3 药敏试验及β-内酰胺酶试验 用湖南长沙天地人生物科技有限公司的奈瑟/嗜血杆菌生化-药敏试验卡，按说明进行判断和操作结果，并用流感嗜血杆菌质控菌株ATCC 49247做质量控制。 用头孢硝噻酚显色反应(英国Oxoid公司生产的Nitrocefin 纸片)做β-内酰胺酶试验。在β-内酰胺酶纸片上加一滴生理盐水，将菌落涂于Nitroce纸片上，10min内黄色变红极即为阳性，表示该菌产β-内酰胺酶，不变色即为阴性。
2.结果
2.1流感嗜血杆菌分离结果 从758份标本中分离到156株嗜血杆菌，检出率为20.6％。其中流感嗜血杆菌135株检出率17.8%，副流感嗜血杆菌21株，检出率2.7%,未检出其他嗜血杆菌。在分离156株嗜血杆菌其中痰液标本中检出嗜血杆菌株118株，检出率为75.6%；鼻咽分泌物标本中检出嗜血杆菌38株，检出率为24.4%。
2.2 118株流感嗜血杆菌的耐药菌情况统计，见表1.
2.3流感嗜血杆菌产酶率 β-内酰胺酶检测结果118流感嗜血杆菌株中39株对β-内酰胺酶显阳性，产酶率33.1%。
3.讨论
嗜血杆菌是引起儿童呼吸道感染的主要治病菌之一，常可引起肺炎、支气管炎、咽喉炎、上呼吸道感染、菌血症等。本研究从20.6%的小儿呼吸道标本中检出了嗜血杆菌，从而很好的了解和体现了流感嗜血杆菌在本地区儿童呼吸道感染中的重要意义。
嗜血干菌生长中需要X、V因子，营养要求高，临床上分离培养阳性率低。在嗜血杆菌的分离培养过程中，使用巧克力培养加入V因子和X因子，另用杆菌肽抑制杂菌，可大大提高分离培养的选择性，我室分离率达到20.6%，与国内文献接近甚至略高。[2～3］
我们通过118株流感嗜血杆菌耐药性监测发现，与几年前[5］相比，流感嗜血杆菌对多种抗生素的耐药性呈上升趋势。特别是对β-内酰胺类抗生素的耐药性也有所上升，由报道的4.8%-9.7%上升到33.1%。产生β-内酰胺酶是嗜血杆菌耐药的主要机制，其主要是产生了质粒介导的TME-1型β-内酰胺酶［4］。本研究结果流感嗜血杆菌的 β-内酰胺酶阳性率为33.1%，未发现有非β-内酰胺酶介导的耐氨苄西林嗜血杆菌菌株。因此，加强对嗜血杆菌的耐药性监测是很重要的。
在研究中显示本地区流感嗜血杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性有所上升，对复方新诺明的耐药率更是高达65.0%，高于天津的54.32%及上海42.78%[6］，显示嗜血杆菌的耐药性在地区存在差异。
鉴于流感嗜血杆菌的耐药性的存在地区性差异，因此了解本地区目前的流感嗜血杆菌的耐药情况，对于本地区开展对流感嗜血杆菌的防治和更好的指导临床合理用药，意义重大。
参考文献：
[1］刘芳，虞涛，鲍连生，余星.武汉地区儿童流感嗜血菌耐药的分析[J］.中华医院感染学杂志，2011（6）：129.
[2］郭品娥，凌代文，张永生等.提高痰中流感嗜血杆菌阳性分离率的方法[J］.中华医学检验杂志,1994,17:102.
[3］项明洁,江勇，徐蓉等.两种培养基对嗜血杆菌属分离鉴定的比较[J］.中华医学检验杂志，1997,20:32-34.
[4］赵胜,周惠琴.嗜血杆菌的分离培养及耐药性检测[J］.苏州大学学报（医学版）,2002,22(1):40-41
[5］杨永弘,陆权,邓力,等.四地儿童肺炎链、流感嗜血杆菌抗生素敏感性检测（2000-2001）[J］.中华儿科杂志,2002,40(4):461-466
[6］钱利强,程薇,华春珍.流感嗜血杆菌对氨苄西林耐药性及耐药机制研究进展[J］.中国抗生素杂志.2009(02):78
论文作者:范增成
论文发表刊物:《医师在线》2017年9月下第18期
论文发表时间:2017/12/7
标签：杆菌论文; 嗜血论文; 流感论文; 耐药性论文; 标本论文; 检出论文; 儿童论文; 《医师在线》2017年9月下第18期论文;