孙远[1]1997年在《bBMP单链抗体的构建与表达研究》文中研究指明骨形成蛋白(BMP)作为一种骨肿瘤的相关抗原，在骨肿瘤的临床医学研究中具有重要意义。1990年我科在国内外首先研制出抗牛BMP单克隆抗体(bBMP-McAb)，研究中发现，该单抗可选择性地集中于有新骨形成的区域，而正常骨组织内含量很少；用放射性碘元素标记的bBMP-McAb可聚集于患者体内的骨肉瘤部位；免疫组化研究显示骨、软骨肉瘤细胞内含有丰富的BMP。由此可见，bBMP-McAb在骨、软骨肉瘤的导向治疗中具有极大的潜在应用价值。由于鼠源性单抗直接用于人体时易发生免疫反应，从而限制了该种抗体的临床应用。近年来基因工程技术的不断发展，多种鼠源性单抗的改建成功，为鼠源性单抗的临床应用开辟了广阔前景。在此背景下，作者对bBMP-McAb进行了改建研究。 首先，作者对液氮冻存的bBMP-McAb杂交瘤细胞进行筛选，并制备bBMP-McAb，通过免疫组化染色和bBMP生物活性阻断实验，证明该抗体具有良好的活性。收集培养的bBMP-McAb杂交瘤细胞，并提取细胞总RNA，应用oligo-(dT)为引物反转录生成cDNA。以cDNA为模板，利用两对根据小鼠免疫球蛋白J区和V区序列设计合成的寡核苷酸引物，通过聚合酶链式反应，分别扩增出bBMP-McAb重链、轻链可变区基因片段(V_H、V_L)。分别将V_H、V_L克隆入pUC18、19载体中，并以重组的pUC18、19为模板，利用Sanger's双脱氧链终止反应，测定V_H、V_L基因序列，序列测定结果输入计算机进行网络基因库比较分析。结果显示，V_H基因全长345bp，编码115个氨基酸，隶属小鼠IgG2BV_H
孙远, 杨连甲[2]1998年在《bBMP单链抗体的构建与表达的研究》文中研究指明目的：本研究是在成功的研制小鼠抗牛骨形成蛋白单克隆抗体的基础上,利用分子克隆技术研制导向能力强、基本无抗原性的抗 bBMP 基因工程抗体,为诊断和治疗骨肿瘤提供新手段。方法：收集 bBMP—McAb 杂交瘤细胞,提取细胞总 RNA,反转录生成 cDNA。以 cDNA 为模板,利用两对寡核苷酸引物,通过 PCR 分别扩增出抗体重、轻链可变区基因片段 (V_H、V_L)。分别将 V_H、V_L 克隆入 pUC18、19载体中,利用双脱氧链终止反应,测定 V_H、V_L 基因序列,序列测定结果输入计
孙远, 杨连甲[3]1998年在《bBMP单链抗体的构建与表达的研究》文中认为目的:本研究是在成功的研制小鼠抗牛骨形成蛋白单克隆抗体的基础上,利用分子克隆技术研制导向能力强、基本无抗原性的抗bBMP基因工程抗体,为诊断和治疗骨肿瘤提供新手段。方法:收集bBMP—McAb杂交瘤细胞,提取细胞总 RNA,反转录生成cDNA。以cDNA为模板,利用两对寡核苷酸引物,通过PCR分别扩增出抗体重、轻链可变区基因片段
赵伟, 李敬达, 刘庆平[4]2018年在《重组蛋白下游连续纯化技术的研究进展》文中研究表明重组蛋白质的纯化一直是限制其生产的瓶颈环节,传统纯化工艺以批次模式为主,普遍存在成本高,处理效率及回收率低等问题。近年来,随着连续离心,过滤,层析技术的开发和应用,传统工艺的缺陷得到有效的克服。主要以下游纯化工艺为主线,对工业大规模纯化过程中所涉及的连续技术的特点及应用进行了归纳分析。对纯化工艺中的核心技术-层析,以及未来重组蛋白质的纯化技术进行了展望,旨在为重组蛋白质生产工艺的优化提供新的理论依据和指导思想。
何扩, 张秀媛, 王云峰, 赵瑞平, 李育峰[5]2019年在《抗甲硝唑单链抗体融合蛋白的表达及其ELISA检测方法建立》文中研究说明为实现甲硝唑单链抗体(single-chain variable fragment,scFv)在大肠杆菌中的可溶性表达,以甲硝唑抗体可变区基因(VH、VL)为模板,扩增甲硝唑的scFv基因,scFv双酶切后与PLIP6/GN载体重组,构建重组质粒PLIP6/GNscFv,转化大肠杆菌JM109,阳性克隆转大肠杆菌BL21经温度诱导表达重组单链抗体,并通过聚丙酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对其鉴定。采用竞争酶联免疫(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明诱导表达的scFv分子量接近33 kDa,能够特异性识别兽药甲硝唑,半抑制率(IC50)为(0.72±0.04)ng/mL。选择虾样品进行添加回收试验,建立的方法检测其回收率在88.54%到113.27%之间。这说明成功构建重组质粒PLIP6/GN-scFv并实现可溶性表达并可用于实际样品检测。
参考文献：
[1]. bBMP单链抗体的构建与表达研究[D]. 孙远. 第四军医大学. 1997
[2]. bBMP单链抗体的构建与表达的研究[C]. 孙远, 杨连甲. Abstracts of the 2nd Chinese International Congress on Oral and Maxillofacial Surgery in Conjunction with 5th National Congress on Oral and Maxillofacial Surgery. 1998
[3]. bBMP单链抗体的构建与表达的研究[C]. 孙远, 杨连甲. 第二届中国国际暨第五届全国口腔颌面外科学术会议论文集. 1998
[4]. 重组蛋白下游连续纯化技术的研究进展[J]. 赵伟, 李敬达, 刘庆平. 中国生物工程杂志. 2018
[5]. 抗甲硝唑单链抗体融合蛋白的表达及其ELISA检测方法建立[J]. 何扩, 张秀媛, 王云峰, 赵瑞平, 李育峰. 食品研究与开发. 2019