(1.江门市新会中医院,广东江门 529100;2.江门市药品检验所 广东江门 529030)
摘要:目的 建立肝胆消炎片的质量控制方法。方法 用薄层色谱法(TLC)对制剂中黄苓和大黄进行定性鉴别;高效液相色谱法(HPLC),以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水-磷酸(45﹕55﹕0.2)为流动相;检测波长设为315 nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000,测定黄苓苷的含量。结果 薄层色谱鉴别斑点明显;高效液相色谱法测定含量,黄苓苷在0.40~4.00 μg范围内呈良好的线性关系(r =0.9996),平均加样回收率为95.52%,RSD=1.16%。结论 该方法简便准确、重现性良好,可有效控制肝胆消炎片制剂质量。
关键词:肝胆消炎片﹕质量控制
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肝胆消炎片是我院自行研制的纯中药制剂,由黄芩、柴胡、金钱草、银花、茵陈和大黄等多种中药制成,具有疏肝利胆、清热解毒的功效,临床主要用于治疗急慢性胆囊炎等疾病,发挥了良好的临床治疗效果。该制剂虽然应用多年,但至今对于内在质量的控制方法未作过探讨。黄苓是制剂方剂中主要组成药材之一,黄苓苷为黄苓中的主要有效成分[1],因此,本文拟采用薄层色谱法[2],对肝胆消炎片中黄苓和大黄进行定性、高效液相色谱法对黄苓苷进行定量,控制制剂成品内在质量,结果满意。
1 仪器与试药
1.1 仪器
安捷伦1200高效液相色谱仪。
1.2 试药
黄苓苷对照品(批号:110756-200110中国药品生物制品检定所);硅胶G(青岛海洋化工有限公司);肝胆消炎片(批号:20111016、20120526、20121108)和缺黄苓的肝胆消炎片阴性样品均由我院提供;甲醇:色谱纯;磷酸、甲醇,分析纯,(广州化学试剂厂);水为超纯水。
2 方法与结果
2.1黄芩的薄层色谱鉴别
取本品20片,刮去外层包衣,研成细粉,称取粉末5 g,加甲醇15 ml浸泡2-3h,时加
振摇,静置,取上清甲醇液,残渣加再甲醇5 ml洗涤,静置,取上清甲醇液,合并甲醇液,置水浴蒸发浓缩至2-3 ml,作为供试品溶液。另取黄芩对照药材粉末1 g及缺黄芩的阴性对照品粉未5 g,同法制成对照药材溶液及阴性对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验,吸取上述两种溶液2~3 ?l,分别点于同一含甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5﹕3﹕1﹕1)为展开剂,展开,取干,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。而阴性对照品溶液无相应的斑点。
2.2 大黄的薄层色谱鉴别
取2.1黄芩的薄层色谱鉴别供试品溶液作为供试品溶液。另取大黄对照药材1 g及缺大黄的阴性对照品粉未5 g,同法制成对照药材溶液及阴性对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验,吸取上述两种溶液2~3 ?l,分别点于同一含甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以正丁醇-乙酸乙酯-水(4﹕1﹕5)为展开剂,展开,取出,晾干,置氨气中熏后,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。而阴性对照品溶液无相应的斑点。
2.3 黄苓苷的含量测定
2.3.1色谱条件: 参考复方鱼腥草片的含量测定条件[2],以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水-磷酸(45﹕55﹕0.2)为流动相;检测波长设为315 nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。
2.3.2 对照品溶液的制备: 取黄芩苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 mL含黄芩苷20 ?g的溶液,即得。
2.3.3 供试品溶液制备: 取本品,除去包衣,研细,精密取粉末0.1 g,置50 mL容量瓶中,加70%乙醇35 mL,超声处理30min,放冷,加70%乙醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.3.4色谱条件与检测波长选择: 参考复方鱼腥草片的含量测定条件,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水-磷酸(45﹕55﹕0.2)为流动相;检测波长设为315 nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。照上述方法,黄芩苷与肝胆消炎片中其它成分均能达到良好的分离,阴性无干扰结果见图1、2、3。
图1 黄芩苷对照品的高效液相色谱图 图2 肝胆消炎片中黄芩苷的高效液相色谱图 图3 缺黄芩阴性样品的高效液相色谱图
2.3.5 线性关系考察: 精密量取40 ug/mL的黄芩苷对照品溶液,分别精密吸取1、2、4、6、8、10 ul,注入高效液相色谱仪,记录峰面积,以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为:y = 83.498x – 0.3522,相关系数r =0.9996。
2.3.6 测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 ?l,注入液相色谱仪,测定,即得。
2.3.7精密度试验: 分别精密吸取同一供试品溶液,连续重复进样6次。结果精密度良好,RSD=0.16%。
2.3.8精密度试验: 分别精密吸取同一供试品溶液,连续重复进样6次。结果精密度良好,RSD=0.16%
2.3.9稳定性试验: 分别精密吸取同一供试品溶液,于配制后0、2、4、6、8、12 h内进样测定,RSD=0.65%。结果表明,供试品溶液在12h基本稳定。
2.3.10 重复性试验: 分别精密称取同一批样品各6份,按供试品溶液制备方法制备,测定黄芩苷含量,RSD=1.55%。结果表明本法重复性良好。
2.3.11 回收率试验: 采用加样回收法,取已知含量的样品0.05 g(11.26 ug/g),分别加入黄芩苷对照品溶液(0.51 ug/mL)8 mL、10 mL、12 mL。按供试品溶液的制备方法制备与测
定,结果平均回收率95.52% RSD =1.16.
2.3.12 样品测定:取肝胆消炎片3批次,进行含量测定,结果见附表。
附表 样品含量测定结果(n = 5)
批 号 含 量(μg/g) RSD(%)
20111016 11.32 1.26
20120526 11.12 1.43
20121108 12.49 1.37
3讨论
采用本文方法能较好地进行肝胆消炎片制剂中黄苓、大黄的薄层鉴别;HPLC法检测黄苓苷含量,简便、灵敏、准确,重复性好,可用于本制剂的质量控制。
参考文献
[1]苗明三.李振国编著.现代实用中药质量控制技术[M].北京:人民卫生出版社,2000:66.
[2]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社, 2010:917.
论文作者:林子安1 , 张健民1,,曾志坚2, ,蒋三员1 ,余
论文发表刊物:《卫生部公告》2015年第4期供稿
论文发表时间:2015/8/24
标签:溶液论文; 黄芩论文; 色谱论文; 消炎片论文; 薄层论文; 肝胆论文; 甲醇论文; 《卫生部公告》2015年第4期供稿论文;