周睿 曹云 丁宇
（上海市黄浦区疾病预防控制中心 上海 200023）
【摘要】 目的：建立利用HPLC-UV仪测定动物源性食品中喹诺酮类抗生素残留的方法。方法：采用有机溶剂提取，正己烷脱脂后经固相萃取小柱净化的前处理技术，处理液经适宜的仪器条件检测。结果：方法的线性范围：0.01～5.00mg/L，仪器检出限：0.0012～0.0032μg/ml，方法检出限：0.0303～0.0385μg/g，精密度：3.3667～16.0285%，回收率：82.2～112.9%。结论：该方法可以同时检测动物源性食品中6种喹诺酮类抗生素残留。
【关键词】 高效液相色谱；紫外检测器；动物源性食品；喹诺酮类
【中图分类号】R155.5+1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）16-0351-02
DETERMINATION OF QUINOLONES ANTIBIOTICS RESIDUES IN ANIMAL DERIVED FOOD BY HPLC-UV
【Abstract】 Objective To establish a method for determination of quinolones antibiotic residues in animial derived food by HPLC-UV. Method The methods use organic solvent extract, pre-treatment technology is by the hexane defatted and solid phase extraction (SPE) clean up, the treatment of liquid after testing the appropriate instrument conditions. Results The linear range : 0.01 ~ 5.00mg / L, the instrument detection limit : 0.0012 ~ 0.0032μg/ml, the method detection limits : 0.0303 ~ 0.0385μg/g, precision: 3.3667 ~ 16.0285%, recoveries: 82.2 ~ 112.9%.Conclusion The method can simultaneously detect 6 kinds of quinolones antibiotics residues in animal derived food.
【Key words】 High efficiency liquid chromatography; UV-detector; Animal derived food; Quinolones
饲用抗生素是指以促进动物生长、预防和治疗疾病为目的，添加到健康动物饲料中的抗生素。[1]随着现代化养殖业的高度集约化发展，不可避免地给畜牧生产带来大量的疫病问题，从而导致兽药产业的长足发展，兽药品种及使用范围的不断扩大据统计，1996年全球抗生素饲料添加剂用量已占全部饲料添加剂量的45.8％，而世界上抗生素总产量的50％左右用于畜牧养殖业。我国每年生产抗生素原料大约21万吨，其中有9.7万吨抗生素用于畜牧养殖业，占全年抗生素用量的46.1％。[2, 3]2001年，世界卫生组织统计，全球每年消耗的抗生素总量中，有90％被用于食用动物，每年约有12000吨和900吨抗生素分别被用于食用动物的饲料添加剂和治疗用药。抗生素滥用产生的危害包括：①产生耐药性菌株；②严重损害动物机体免疫细胞的功能；③造成动物机体二重感染；④造成药物残留，对人体具有“三致”作用。[4]本实验室结合自身条件，用高效液相色谱-紫外检测器（HPLC-UV）对肉类中喹诺酮类抗生素残留进行测定。
1.材料与方法
1.1 试剂与仪器
1.1.1 标准品及主要试剂
氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、单诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星：纯度≥99.0%，0.1g，德国Dr.Ehrenstorfer GmbH公司。
乙腈、甲醇、正己烷：HPLC级，德国Merck公司。
无水硫酸钠、氨水、甲酸：分析纯，国药集团化学试剂有限公司。
磷酸、盐酸：优级纯，国药集团化学试剂有限公司。
1.1.2 主要仪器设备
Dionex高效液相色谱仪：配P680 泵，ASI 100自动进样器，AT-330柱温箱，Ultimate 3000紫外波长检测器、IKA T25 均质机、CP512 电子天平：精确至0.01g、固相萃取装置、HAMILTON微量注射器、水浴氮吹仪、TDL-5C 离心机、漩涡混合器、超声波清洗器、50ml塑料离心管、10ml玻璃试管、10ml容量瓶、0.45μm针式滤膜、1.5ml样品瓶、PXA固相萃取小柱：150mg，6ml，迪马公司。
1.2 方法
1.2.1 样品前处理
称取2.0g左右样品于50ml离心管中，加入20ml乙腈，2.0g无水硫酸钠后，10000r/min均质1.0min。于超声波清洗器中超声萃取5min，4000r/min离心5min。取上清液于50ml离心管中，原样品管中加入20ml乙腈，重复超声，离心步骤后，合并上清液于50ml离心管。加入10ml正己烷于装有上清液的50ml离心管中，漩涡混合1.0min，静置分层，去除上层正己烷层。再加入10ml正己烷，重复上述步骤后，水浴氮吹仪上50℃氮气吹干。先于PXA固相萃取小柱中加入6ml甲醇，再加入6ml纯水活化PXA固相萃取小柱，活化液弃去。于氮气吹干的50ml萃取液离心管中，加入2.0ml5%氨水溶液，过PXA固相萃取小柱，重复两次。先加入6ml纯水，再加入6ml甲醇淋洗PXA固相萃取小柱，淋洗液弃去。于PXA固相萃取小柱中加入6ml2%的甲酸-甲醇溶液进行洗脱，收集流出液于10ml玻璃试管中。将装有流出液的10ml玻璃试管置于水浴氮吹仪上50℃氮气吹干，加入0.2%磷酸溶液1.0ml溶解残渣，用0.45μm针式滤膜过滤后，注入1.5样品瓶中，进样20ul检测。
1.2.2 仪器条件
色谱柱：C18反相液相色谱柱（250mm×3.0mm i.d. 5μm）
流动相：A 甲醇；B 0.2%磷酸
梯度洗脱：20%A-80%B
流速：0.4ml/min
进样量：20μl
检测波长：280nm
柱温：30℃
1.2.3 标准溶液配制
1.2.3.1 标准储备液配制
取6只10ml容量瓶，分别称取氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、单诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星标准品0.0100mg于其中，加入1滴盐酸，纯水定容至刻度。标准储备液浓度均为1.00mg/ml。
1.2.3.2 标准混合使用液配制
分别吸取1.0ml氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、单诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星标准储备液于100ml容量瓶中，纯水定容至刻度。标准混合使用液浓度均为10.0μg/ml
1.2.3.3 标准曲线配制
取9只10ml容量瓶，分别加入0.01，0.02，0.05，0.10，0.20，0.50，1.00，2.00，5.00ml标准混合使用液，纯水定容至刻度，配制成各组分均为0.01，0.02，0.05，0.10，0.20，0.50，1.00，2.00，5.00μg/ml的标准系列，进样20ul检测。
2.结果
2.1 标准曲线
按标准曲线配制方法（1.2.3）配制工作曲线溶液，经测定，峰面积和浓度绘制标准曲线图谱，并计算回归方程，相关系数，结果见表1。
3.小结
本文通过实验选择了适宜的样品前处理方法及仪器条件，建立了动物性食品中氧氟沙星，诺氟沙星，环丙沙星，恩诺沙星，单诺沙星，沙拉沙星六种喹诺酮类抗生素残留的高效液相色谱-紫外检测器检测方法。该方法简单无需特殊仪器，能够满足基层实验室的检测要。
【参考文献】
[1]周桂莲, 林映才, and 蒋宗勇, 饲用抗生素残留现状、原因及对策, in 2005年厦门饲料学术交流研讨会论文集. 2005: 厦门. p. 94-103.
[2]万遂如, “超级细菌”出现后的反思, in 中国畜牧兽医学会2011学术年会论文集. 2011: 成都. p. 150-156.
[3]今天你吃＂素＂了吗？--养殖滥用抗生素状况堪忧. 农业科技与装备, 2011(11): p. 78-78.
[4]邢玉秀 and 周本翔, 动物性食品兽药残留的来源、危害与控制措施. 河南农业科学, 2004(7): p. 79-80.
论文作者:周睿,曹云,丁宇
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第16期供稿
论文发表时间:2015/8/12
标签：抗生素论文; 小柱论文; 沙星论文; 环丙沙星论文; 诺氟沙星论文; 标准论文; 动物论文; 《医药前沿》2015年第16期供稿论文;