甘肃省中医院 中国兰州 730050
【摘 要】目的：通过观察中风膏对大鼠脑出血后脑水肿脑组织MMP-2和MMP-9的表达的影响，以探讨中风膏对脑出血后脑水肿的保护机制。方法：SPF级SD雄性大鼠110只（体重250±50g），随机分为正常对照组、模型组、假手术组、中风膏治疗组、步长脑心通治疗组。除正常对照组、假手术组其余各组再随机分为术后1d,3d,5d三个时间点，每组各10只大鼠。采用大鼠尾壳核注射胶原酶建立脑出血动物模型,治疗组分别予中风膏及步长脑心通灌胃干预，免疫组织化学法检测脑出血不同时段MMP-2、MMP-9的表达。结果：脑组织MMP-2、MMP-9的表达：模型组脑组织MMP-2、MMP-9的表达明显高于正常组及假手术组；中风膏组及步长脑心通组明显低于于模型组，具有显著差异（P<0.01）；且中风膏组与步长脑心通组无明显差异（P>0.05）；结论：中风膏对脑出血脑水肿具有保护作用，此种保护作用可能是通过降低MMP-2、MMP-9的表达而实现的。
【关键词】中风膏；脑出血；脑水肿；MMP-2、MMP-9
脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)是指原发性非外伤性脑实质内的出血,是神经科常见的急危重症，为脑卒中的一种类型,占全部脑血管病的35%左右，其病死率大于50%，40%的存活者遗留有严重残疾[1]。脑出血除了本身可造成严重脑损伤外，尚可引起多种继发症状，如:脑水肿、颅内压增高、脑疝等，其中脑水肿的产生是脑出血后二次损伤发生的关键性因素。本研究通过观察中风膏对大鼠脑出血后脑水肿脑组织MMP-2和MMP-9的表达的影响，以探讨中风膏对脑出血后脑水肿的保护机制。
1.材料和方法
1.1 实验动物及分组
SPF级SD雄性大鼠110只，体重250±50g。随机分为空白组、假手术组、模型组、中风膏治疗组及步长脑心通组。除空白组、假手术组外，其余各组再随机分为术后1d,3d,5d三个时间点，每组各10只大鼠。
1.2 主要仪器和试剂
水合氯醛（购自甘肃中医学院科研实验中心药理毒理实验），生理盐水（甘肃扶正药业科技股份有限公司， 国药准字H62020318，100毫升），步长脑心通（步长药业），中风膏（甘肃省中医院内制剂，批号：甘卫普制(1997)－098－04）。ZH-兰星C型脑立体定位仪(淮北正华生物公司),IV型胶原酶(北京中杉金桥生物技术公司，规格100 mg，批号C5138)。一抗兔抗鼠MMP-2、MMP-9、二抗羊抗兔IgG、SABC试剂盒、多聚-1-赖氨酶、DAB显色试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。
1.3 给药方法
正常对照组普通饲养，自动饮水，不做任何处理； 假手术组予等剂量生理盐水灌胃；模型组予等剂量生理盐水灌胃；中风膏治疗组予中风膏0.9g/kg.d灌胃；步长脑心通治疗组予步长脑心通0.324g/kg.d灌胃。均在大鼠术后麻醉清醒后开始灌胃给药，每日上、下午各一次。各组大鼠术后1d,3d,5d进行神经症状评分。
2.模型制备
参考 Rosenberg 等[2]提供的造模方法,采用10%的水合氯醛腹腔麻醉(0.3 mL/100 g),[3] 参照包氏图谱定位右侧尾状核，用微量注射器抽取 3 μL Ⅳ型胶原酶溶液,将微量注射器固定于立体定位仪上,将针尖至于穿刺点平颅骨,进针至硬脑膜下5.5 mm 后,向脑内注射。 假手术组除不注射自体血外,余操作同实验组。
3.标本采集及指标检测
大鼠用生理盐水及 4% 多聚甲醛磷酸盐缓冲液经心脏灌注后取脑，置于 10% 中性福尔马林中固定 24 h 后，将标本脱水，石蜡包埋并切片备用，片厚 5 mm。
采用免疫组织化学（SABC法），测定脑组织MMP-2、MMP-9蛋白的表达。
4.统计学处理
采用SPSS17.0软件分析数据，所得数据表示为均数±标准差（±s），多组间比较采用单因素方差分析（One-Way-ANOVN），两组间比较采用t检验法分析。凡P<0.05 认为差异具有统计学意义，P<0.01认为差异有显著统计学意义。
5 结果
实验结果表明：中风膏组及步长脑心通治疗组及脑出血模型组大鼠脑组织 MMP-2蛋白表达水平个时间点明显高于假手术组( 均P＜0.05)。中风膏组及脑心通组大鼠术后3d和5d时脑组织MMP-2蛋白表达水平明显低于脑出血模型组(均P＜0.05) 。见表三。
表三 各组大鼠术后不同时间点血肿周围MMP-2蛋白表达的比较
.png)
6.讨论
脑水肿在脑出血的疾病转归中具有重要意义。凝血酶在促成血肿周围水肿上的中心作用已经在所有的实验性的和人类的脑出血研究中得到证明,并且已有证据表明使用凝血酶抑制剂后减少了水肿形成。而凝血酶对血肿周围组织的有害作用是通过炎症,细胞毒性作用和血脑屏障的破裂介导的[4、5]。因此，各种和脑水肿有关的影响因素,可能成为临床治疗脑出血的控制目标。
中医学理论认为,“离经之血,便是瘀血”,“瘀血不去,则出血不止”，明代王肯堂明确指出,“瘀则成水”。从病机上阐述了本病的发生,瘀是根本病因,水痰是病理产物,水痰为害可进一步阻碍气机,闭塞清窍,使病情进一步加重。
中风膏是甘肃省院内制剂，是在古方“佛手散”(当归、川芎)为基础，配伍川芎、赤芍、黄芪、水蛭等药物。方中重用血中之气药当归，取其味甘而重，专能补血，气轻而辛，又能行血，补中有动，行中有补，主血分之病。配伍黄芪益气生血，合川芎、赤芍、水蛭等活血化瘀之品共奏养血和血，化瘀通络之功，使得脑中瘀血得散，新血乃生。
本研究结果表明中风膏能够明显降低MMP-2、MMP-9的表达而实现脑保护作用。
参考文献：
[1]陶然，代大伟，代亚美。脑出血后凝血酶所致损伤及保护机制的研究进展。临床神经病学杂志2013 年第26 卷第1 期，71-73.
[2]Rosenberg GA, Mun-Bryc S, Wesley M, et al. Collagenase induced intracerebral hemorrhage in rats[J]. Stroke,1990,21(5)：801－807.
[3]包新民,斯舒云.大鼠脑立体定位图谱[M].北京：人民卫生出版社,1991：26.
[4]Juvela S,Kase CS.Advances in IntracerebralHemorrhageManagement[J]. Stroke, 2006, 37(2): 301-304.
[5]张苏明,殷小平.脑出血研究的新进展[ J].中华医学杂志,2004, 84(23): 2023-2025.
论文作者:巩婷, 李妍怡
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2016年5月第9期
论文发表时间:2016/8/29
标签：脑出血论文; 步长论文; 大鼠论文; 组织论文; 模型论文; 水肿论文; 术后论文; 《中国医学人文》(学术版)2016年5月第9期论文;