冯卢鹏1 郭家奎2
（1天津中医药大学 天津 300073）
（2天津中医药大学第二附属医院 天津 300150）
【摘要】 目的：调神通络针法对缺血再灌注大鼠海马区mGluR5蛋白表达情况的影响。方法：以大脑中动脉缺血再灌注大鼠为研究对象，以调神通络针法为干预，运用免疫组化法观察mGluR5蛋白表达情况。结果：在脑缺血再灌注过程中激活的mGluR5在海马神经元中表达。模型组mGluR5的表达与正常组、假手术组相比较差异明显，提示脑缺血损伤过程中脑组织mGluR5的表达上升。针刺可对激活的mGluR5的表达产生下调影响，说明调神通络针法对缺血性脑损伤起到调节保护作用。结论：调神通络针法对各时间点mGluR5 蛋白表达都有显著降低作用，可对激活的mGluR5的表达产生下调影响，在脑保护方向发展发挥关键作用。
【关键词】 mGluR5；调神通络针法；脑缺血再灌注；脑保护
【中图分类号】R245 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2016）16-0363-03
代谢型谷氨酸受体5（Metabotropic glutamate receptor 5，mGluR5) 是1992年国外研究者由mGluR1做探针从鼠脑的cDNA文库中首次分离。谷氨酸可以激活代谢型受体发挥效应。mGluR5参与了中枢神经系统的许多病理生理过程，所介导的兴奋性毒性作用是缺血损伤的机制之一。mGluR5参与到磷酸肌醇的水解，由此可能增加了包括 Ca2+内流和蛋白激酶 C激活等破坏事件的发生[1]。mGluR5在海马CA1区有丰富表达，提示mGluR5可能是CA1区传递谷氨酸兴奋活动的受体[2]。Coutinho等报道mGluR5在纹状体、海马及大脑皮质分布丰富[3]。
研究旨在通过检测脑缺血再灌注大鼠海马区mGluR5蛋白表达情况，了解mGluR5蛋白表达在脑缺血再灌注不同时间点的动态变化规律，来探讨调神通络针法在缺血性脑损伤时的调节保护作用。
1.材料与方法
1.1 实验动物及分组
根据SPSS15.0生成的随机表，将健康雄性Wistar大鼠(Ⅱ级)随机分为正常组，假手术组，模型组，非穴位针刺组及调神通络组。模型组及两个针刺组各分4个亚组：缺血再灌注30min（I/R-30min）、缺血再灌注60min（I/R-60min）、缺血再灌注180min（I/R-180min）、缺血再灌注360min（I/R-360min）。每组10只大鼠。
1.2 缺血再灌注模型制备
参照Longa[4]线栓法并加以改进制备大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型，1h后拔出栓线。假手术组除栓线不插入颈内动脉外，其余处理同缺血组；正常组不予任何处理。
1.3 动物评分筛选
按Zausinger 6分法对其神经功能进行评分[5]，去除评分为0分及4分和5分的动物。评定法：0分不能自发行走。1分自由走动状态下向病变对侧旋转。2分抓住鼠尾，大鼠向病变对侧旋转。3分对于施向病变对侧的侧压力抵抗力下降者。4分不能伸直病变对侧前爪。5分无神经功能缺损。
1.4 穴位选择及针刺方法
大鼠穴位参照华兴邦《大鼠穴位图谱的研制》[6]选取。采用调神通络针法，选取穴位：顶中线（MS5，百会向至前顶）、顶旁线（MS9，承灵与正营连线）。造模后，将大鼠固定于实验台，用直径0.25 mm，长25 mm的毫针沿皮刺入大鼠的“顶中线”、“顶旁线”。连接电针治疗仪（KWD-8082 长城牌），频率为2/15 Hz的疏密波，电流强度1mA，以肢体轻微抖动的强度为宜，持续10min。非穴位针刺组选取患侧肋下髂嵴上10mm的固定点针刺。正常组和模型组不作处理。
1.5 标本处理
大鼠达到各时间点后断头取脑，选取损伤侧海马部位。采取免疫组化法观察mGluR5蛋白表达。
2.结果
①正常组
正常组、假手术组：显示所有的神经元均着色，染色较深呈灰褐色。
模型组：30min，60min，180min，360min各时间段的海马神经元均有表达。随着时间的延长，mGluR5的表达染色逐渐加深，180min，360min两组间差别不明显。
调神通络组：30min，60min，180min，360min各时间段的海马神经元均有表达。随着时间的延长，mGluR5的表达染色强度逐渐减弱，着色细胞数也逐渐减少。
非穴位针刺组：30min，60min，180min，360min各时间段的海马神经元均有表达。随着时间的延长，mGluR5的表达染色强度逐渐增强。
模型组与正常组、假手术组相比较mGluR5的表达上升明显；调神通络组中可对激活的mGluR5的表达产生下调影响。
3.讨论
中风的病因病机和临床各期症状集中地体现在“神”与“络”这两大方面，神通络针法在于根据临床辨证的基础上治疗中风病注重“调神机、通经络”。所选穴位顶中线具有调理神明、疏通下肢经脉的作用；顶旁线具有调理神明、疏通上肢经脉的作用[7]。
结果显示，正常组、假手术组mGluR5呈基础水平表达；模型组表达最强，并随着30、60、180、360min时间的推移，表达量呈增高趋势；其次为非穴位针刺组，与模型组同一时间点比较无显著变化；调神通络组对脑缺血再灌注大鼠各时间点mGluR5表达都有显著降低作用，提示调神通络针法对mGluR5的表达有显著的抑制作用。
综上，本研究表明，大鼠脑中动脉缺血再灌注损伤后，缺血再灌注损伤所导致的mGluR5蛋白表达增强，并随着时间的推移，各时间点表达量呈增高趋势。调神通络针法对缺血再灌注损伤大鼠的各时间点mGluR5 蛋白表达都有显著降低作用，可对激活的mGluR5的表达产生下调影响，对脑的缺血性损伤的调节保护方向发展发挥关键作用。
【参考文献】
[1] Bordi F and Ugolini A. Group metabotropic glutamate receptors:implications for brain disease.Progress in Neurobiology 1999,59,55-79
2] Cortese BM, Phan KL.The role of glutamate in anxiety and related disorders[J].CNS Spectr, 2005, 10(10): 820-830.
[3] Coutinho V, Knopfel T. Metabotropic glutamate receptors: electrical and chemical signaling properties. Neuroscientist, 2002, 8 (6): 551-561.
[4] Zea-Longa，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle Cerebral Artery Occlusion without craniectomy in rats.Effects of neutroPhil dePletion.Stroke，1989，20: 84-91.
[5] Zausinger S,Hungerhuber E,Baethmenn A,et al.Neurological impairment in rats after transient middle cerebral artery occlusion:acomparative study under various treatment paradigms [J].Brain Res,2000,863:94-105.
[6] 华兴邦.大鼠穴位图谱的研制.实验动物与动物实验，1991，1(1):13-15.
[7] 郭家奎,王立存“ 调神通络法” 针刺治疗中风病[J].天津中医药大学学报,2000,19(2): 21-22.
天津市科委科研课题基金 基金号：14jczdjc36800
论文作者:冯卢鹏1,郭家奎2
论文发表刊物:《医药前沿》2016年6月第16期
论文发表时间:2016/6/23
标签：神通论文; 针法论文; 大鼠论文; 穴位论文; 针刺论文; 蛋白论文; 作用论文; 《医药前沿》2016年6月第16期论文;