株洲市中心医院 湖南省株洲市 412007
摘要：目的 探讨分析microRNA-99a在非小细胞肺癌中的表达及临床意义。方法 将株洲市中心医院2013年1月～2013年12月间收治的50例非小细胞肺癌患者作为观察组，将同期来院体检的健康志愿者作为对照组，收集观察组患者和对照组志愿者血清，以RT-PCR法检测总RNA中microRNA-99a的表达量并进行比较，分析microRNA-99a的表达量和观察组患者临床病理、预后的关系。结果 观察组microRNA-99a的表达量明显低于对照组，（P<0.05），有统计学意义；microRNA-99a的表达量和观察组患者TNM分期、分化程度、淋巴结转移存在显著相关性，（P<0.05），有统计学意义；观察组microRNA-99a的表达量低者生存时间低于表达量高者，（P<0.05），有统计学意义。结论 microRNA-99a在非小细胞肺癌中的表达下降和病情进展存在相关性，可作为肺癌治疗的观察指标。
关键词：microRNA-99a；非小细胞肺癌；表达；临床意义
本文旨在探讨分析microRNA-99a在非小细胞肺癌中的表达及临床意义，以期为临床诊断、治疗提供参考，具体报告如下：
1资料与方法
1.1资料
将株洲市中心医院2013年1月～2013年12月间收治的50例非小细胞肺癌患者作为观察组，将同期来院体检的健康志愿者作为对照组，观察组中男性患者28例，女性患者22例。年龄36岁～75岁，平均年龄50.2±5.7岁。组织病理类型：29例腺癌、21例鳞癌，其中45例淋巴结转移，5例未转移。本组患者均未进行过放疗、化疗治疗。TNM分期：5例Ⅰ期，7例Ⅱ期，20例Ⅲ期，18例Ⅳ期。对照组中男性志愿者26例，女性志愿者24例。年龄34岁～73岁，平均年龄51.0±5.9岁。两组患者的数量、性别、年龄等常规资料方面比较，（P>0.05），具有可比性。
1.2方法
使用miRcute miRNA 提取分离试剂盒，dNTPs SYBR Mastermix，RNA酶抑制剂，5×buffer、逆转录酶等，RNA提取试剂盒、引物，RT-PCR引物序列参照文献[1]，无菌及无RNA酶的条件下，按照RNA提取试剂盒的说明书来提取血清总RNA，以生物分光光度仪来检测总RNA浓度。OD260/280比值为1.8-2.0。取血清RNA（1μg）以Oligo dT18浓度逆转录cDNA，反应条件为45℃下60分钟，75℃下5分钟，-80℃下保存。取cDNA实施Q-PCR，PCR定量条件：97℃下10分钟预变性，97℃下1分钟变性，70℃下1分钟退火，70℃下1分钟延伸，共循环40次，于末次循环后由55℃-95℃，及50℃-90℃，隔0.5℃保温30秒。microRNA-99a的相对表达情况以公式Iog10250-Ct进行表示。
1.3观察项目
比较两组总RNA中microRNA-99a的表达量，分析microRNA-99a的表达量和观察组患者临床病理、预后的关系。
1.4统计学方法
数据结果采用SPSS17.0统计学软件进行分析处理，计数资料用（`c±s）表示，采用t检验，以（P<0.05）为有统计学意义。
2结果
2.1 两组microRNA-99a的表达量比较：观察组microRNA-99a的表达量为8.58±2.98×10-6，对照组microRNA-99a的表达量为4.21±1.87×10-5，观察组microRNA-99a的表达量明显低于对照组，（P<0.05），有统计学意义。
2.2 microRNA-99a的表达量和观察组患者临床病理的关系，详见表一：
表一 microRNA-99a的表达量和观察组患者临床病理的关系
由表一可见，microRNA-99a的表达量和观察组患者TNM分期、分化程度、淋巴结转移存在显著相关性，（P<0.05），有统计学意义。腺癌microRNA-99a的表达量低于鳞癌，（P<0.05），有统计学意义。
2.3 microRNA-99a的表达量和观察组患者预后的关系：观察组microRNA-99a的表达量低者平均生存期为20.41个月，表达量高者平均生存期为25.67个月，观察组microRNA-99a的表达量低者生存时间低于表达量高者，（P<0.05），有统计学意义。
3讨论
肺癌属于临床常见恶性肿瘤，发病率、死亡率较高，非小细胞肺癌分为鳞癌、腺癌及大细胞癌三种，和小细胞癌相比，非小细胞肺癌癌细胞的生长分裂慢，扩散转移晚，肺癌患者中有约有80﹪的患者为非小细胞肺癌，约有75﹪的患者在发现时已为中晚期，患者5年生存率较低[2]。microRNA是肺癌诊断、治疗参考的重要指标，microRNA作为一种长为22个核苷酸的单链RNA分子，能够和信使RNA非翻译区结合，通过对沉默复合物诱导，使信使RNA翻译受到抑制、降解，继而对靶基因转录后水平进行负性调节。近年研究证实，肝癌、肾癌、食管癌、舌鳞状细胞癌患者的microRNA-99a表达较低，患者的分期、预后和microRNA-99a的表达情况存在明显相关性。证实microRNA-99a在肿瘤中具有抑癌基因功能，对肿瘤生长、凋亡的生物学行为进行调控。但对于microRNA-99a在非小细胞肺癌中的表达及临床意义的研究报道相对较少。本研究显示，观察组microRNA-99a的表达量明显低于对照组，microRNA-99a的表达量和观察组患者TNM分期、分化程度、淋巴结转移存在显著相关性，观察组microRNA-99a的表达量低者生存时间低于表达量高者。提示，microRNA-99a的表达在非小细胞肺癌的出现、进展中起到重要作用[3]。
综上所述，microRNA-99a在非小细胞肺癌中的表达下降和病情进展存在相关性，可作为肺癌治疗的观察指标。
参考文献：
[1]张敬磊，金华君，刘辉，等．腺病毒介导microRNA-99a过表达抑制肝癌细胞生长[J]．中国肿瘤生物治疗杂志，2012，19（3）：28－30．
[2]徐小峰，夏春伟，陈文萍．microRNA-99a在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[J]．现代肿瘤医学，2014，22（10）：2312－2314．
[3]张洪岩，鲁继斌，杨伟，陈宽冰．miR－224、miR－135a 在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理的关系[J]．现代肿瘤医学，2012，20（10）：2057－2059．
论文作者:黄彭
论文发表刊物:《健康世界》2015年5期
论文发表时间:2015/10/22
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