恩施职业技术学院 湖北恩施 445000
摘要：目的：建立鼻渊软胶囊中绿原酸的HPLC含量测定方法。方法：采用HPLC法，以C18柱（4.6×250mm，5μm）为色谱柱，以乙腈-冰醋酸-水（8：89：3）为流动相，流速1.0 ml·min-1，检测波长327nm。结果：绿原酸在0.024～0.24μg范围内线性关系良好，平均回收率为99.44%（RSD=1.86%）。结论：该方法简便，准确，重现性好，可作为鼻渊软胶囊中绿原酸的含量测定方法。
关键词：鼻渊软胶囊；绿原酸；含量测定；高效液相色谱技术
鼻渊软胶囊是以卫生部药品标准中药成方制剂第六册品种鼻渊片处方为基础开发出来的新剂型，处方由苍耳子、野菊花、金银花、茜草、辛夷五味中药组成，具有清热解毒，通鼻窍的功效，主要用于治疗慢性鼻炎及鼻窦炎。在现有报道的鼻渊软胶囊质量控制手段里面，仅对处方中的君药苍耳子、茜草的主要有效成分采用高效液相色谱技术进行了含量测定【1】，对金银花、野菊花的共有成分绿原酸并没有进行含量测定的研究，绿原酸具有抗菌、抗病毒、抗脂质过氧化等多种药理活性，【2】，本文对其含量测定方法进行研究，使之能够更全面的控制鼻渊软胶囊的质量。
1 仪器与试药
DIONEX（U3000）高效液相色谱仪，Chromeleon色谱工作站，Acclaim 120 C18（5μm，4.6×250mm）色谱柱，VWD3100检测器；AL204 分析天平（感量0.1mg，METTLER TOLEDO）；UV2600紫外可见分光光度计（上海天美）。
绿原酸对照品（北京世纪奥科生物技术有限公司研制，批号：MUST 1203140，purity≥98%），鼻渊软胶囊（云南云龙制药股份有限公司，批号：20130405）；水为超纯水；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法和结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Acclaim 120 C18柱（4.6×250mm，5μm），流动相为乙腈-水-冰醋酸（8：89：3），流速1.0 ml·min-1，检测波长327 nm，进样量为10μl，绿原酸峰与其相邻成分峰的分离效果好，满足其测定要求。结果见下图。
2.2 对照品溶液
称取绿原酸对照品约30mg，精密称定，置250ml棕色量瓶中，加50%乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀微滤，取续滤液即得。
2.3 供试品溶液
取符合装量差异的鼻渊软胶囊内容物约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙腈50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，加50%乙腈补足减失的重量，摇匀，用滤纸滤过，取续滤液微滤，取续滤液即得。
2.4 测定波长的选择
取对照品溶液适量，加50%乙腈稀释成浓度约为0.1mg·ml-1的溶液，在200-400nm的波长范围内进行波长扫描。发现绿原酸在217nm和327nm处均有最大吸收，但是217nm处于近紫外区，有较强的末端吸收，且受测定溶剂的影响比较大，故选定327nm作为绿原酸的测定波长。
2.5 线性关系试验
分别取对照品溶液2、5、10、15、20μl注入高效液相色谱仪，测定分析。以对照品的进样量（C，μg）为横坐标轴，峰面积（A）为纵坐标轴，绘制标准曲线，计算线性回归方程为：A=57.236C-0.0216，r=0.9999（n=5）。结果表明，在0.024～0.24μg范围内绿原酸进样量与峰面积线性关系良好。
2.6 精密度试验
取同一对照品溶液，重复进样6次，每次10μl，测定分析。结果：6次测得绿原酸峰面积的RSD为0.27%，表明该高效液相色谱仪的精密度良好。
2.7供试品溶液的稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、12小时进样，测定分析。结果，测得绿原酸峰面积的RSD为0.98%，表明绿原酸样品至少在12小时内稳定。
2.8重现性试验
取同一批符合装量差异规定的样品6份（批号：20130405），每份约0.5g，精密称定，照供试品溶液的制备方法处理，进样，测定分析。结果测得本批样品中绿原酸的平均含量为2.50mg·g-1，RSD=1.38%（n=6）。
2.9加样回收率试验
取已知含量并符合装量差异规定的鼻渊软胶囊内容物样品6份，每份约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，各精密加入绿原酸对照品约1mg，按照供试品溶液的制备方法处理并测定分析。结果，绿原酸的平均加样回收率为99.44%，RSD=1.86%（n=6）。表明该试验方法准确。
2.10含量测定
取符合装量差异规定的鼻渊软胶囊样品3批，照上述方法测定，按外标法以峰面积进行计算。结果见表1。
3 讨论
3.1对绿原酸进行含量测定研究。有利于更全面地控制鼻渊软胶囊的质量。
3.2 采用高效液相色谱技术对鼻渊软胶囊中绿原酸进行含量测定研究，得到其色谱条件为：色谱柱：Acclaim 120 C18柱（4.6×250mm，5μm），流动相：乙腈-冰醋酸-水（8：3：89），流速：1.0 ml·min-1，检测波长：327 nm，进样量：10μl。绿原酸峰与其相邻成分峰的分离效果好，测定方法简便、准确、重现性好，可作为鼻渊软胶囊中绿原酸的含量测定方法。
3.3 从现代中药成方制剂质量控制标准研究来讲，还应该对方中金银花、野菊花的指纹图谱进行研究。中药指纹图谱能更全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类和数量，进而对药品的质量进行整体描述和评价。
参考文献：
[1]李瑾.鼻渊软胶囊制备工艺研究[D].天津大学，2006.
[2]吴卫华，康桢，欧阳冬生，等.绿原酸的药理学研究进展[J].天然产物研究与开发，2006，18：691～694.
论文作者:金显平,黄思勇
论文发表刊物:《健康世界》2016年第3期
论文发表时间:2016/6/2
标签：色谱论文; 软胶囊论文; 溶液论文; 含量论文; 波长论文; 精密论文; 高效论文; 《健康世界》2016年第3期论文;