李文政 李婷婷 康晓静新疆维吾尔自治区人民医院皮肤科 新疆 乌鲁木齐 ８３０００１
【摘要】 目的 探讨新疆维吾尔族系统性红斑狼疮(SLE)自身抗体与HLA－DQA１等位基因的相关性.方法 采用聚合酶链反应－序列特异性引物(PCR－SSP)技术对４４例新疆维吾尔族SLE患者HLA－DQA１基因进行分型,同时采用免疫印迹技术测定患者自身抗体谱.结果 HLA－DQA１?０３０２与ds－DNA 呈正相关(χ２＝４．５１３,p＝０．０３４).结论 新疆维吾尔族系统性红斑狼疮抗ds－DNA 的产生可能与DQA１?０３０２等位基因相关.
【关键词】 系统性红斑狼疮; 人类白细胞抗原; 自身抗体; 维吾尔族【中图分类号】R５９３．２【文献标识码】B 【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１０－０００３－０２
系统性红斑狼疮(SLE)的病因及发病机制目前尚不清楚,如遗传、感染、环境及免疫异常都可影响系统性红斑狼疮的发生,大量的研究表明,遗传因素在SLE的发病中起重要作用[１].人类白细胞抗原(HLA)系统是迄今发现的人类最为复杂的免疫遗传多态系统,具有地区、种族和人群差异,是很好的遗传学标志,与许多免疫疾病的发生直接或间接相关.近年来研究显示,系统性红斑狼疮与HLA－II类等位基因相关,某些系统性红斑狼疮自身抗体也与HLA－II类等位基因相关[２].为了探讨新疆维吾尔族系统性红斑狼疮患者自身抗体与HLA－DQA１等位基因的相关性,我们采用PCR－SSP方法对新疆维吾尔族系统性红斑狼疮患者HLA－DQA１等位基因进行分型,同时采用免疫印迹技术测定患者自身抗体谱,对其自身抗体与HLA－DQA１基因的相关性进行研究,现将结果报告如下.
１ 资料与方法１．１ 研究对象共４４例维吾尔族SLE患者,其中男５例,女３９例,年龄９－５０岁.来自新疆各地,就诊于本院皮肤科,均符合１９９７年美国风湿病协会修订的SLE 诊断标准. １．２ 外周血基因组DNA 提取采取研究对象外周静脉血３ml,保存于EDTA 抗凝管中,置于－８０℃冰柜备用.应用上海生工生物工程公司生产的基因组DNA 快速提取试剂盒,提取研究对象的基因组DNA. １．３ 序列特异性引物(上海生工生物工程公司)HLA－DQA１等位基因分型引物根据１９９５年公布的HLA－II类等位基因核苷酸序列[３],参照龙桂芳等[４]设计的引物,由上海生工生物工程公司合成.共设计９个５′端引物和７个３′端引物.组成１２对不同的引物对,能鉴定１０种有表达产物的HLA－DQA１等位基因. １．４ PCR扩增反应体系PCR扩增反应总体系体积为２０μ１,其中DNA 模板２μ１,双蒸水４μ１,内参照引物上、下游各１μ１,目标引物上、下游各１μ１,Mastermix１０μ１. １．５ PCR扩增条件及扩增产物的检测９４℃预变性１０min进入PCR循环:９５℃３０s,５９℃１min,７２℃１min,３０个循环后继续延伸７min,降温至４℃.PCR扩增产物在２％琼脂糖凝胶(含０．５μg/mL溴化乙锭)中电泳,经紫外透射在泳道中见明显DNA 条带为阳性.每个样本同时进行１２个独立的PCR反应.每一PCR反应体系中均包括对内参照引物:C３:５′－ GCATCTTGCTCTGTGCAGAT－３′,C５:５′－ TGCCAAGTGＧGAGCACCCAA－３′.结果判断必须在有内对照引物扩增带出现的前提下进行,根据特异性引物是否得到相应的PCR扩增带而确定个体的DQA１型别. １．６ 免疫印迹法检测研究对象的ds－DNA、ENA 自身抗体. １．７ 统计学处理运用SPSS１０．０统计软件,行χ２检验或四格表确切概率法计算,以P＜０．０５ 为差异具统计学意义.
２ 结果２．１ 对４４例新疆维吾尔族SLE患者的DNA 进行了HLA－DQA１的基因分型,基因型的期望值与观察值很好吻合(P＞０．０５),说明基因已达到遗传平衡, 本组病人可作为可靠的供研究的群体资料. ２．２ HLA－DQA１等位基因与自身抗体(抗ds－DNA、抗Sm、抗SSA/SSB) 的相关性:抗ds－DNA 与HLA－DQA１? ０３０２呈正相关(χ２ ＝４．５１３,p＝０．０３４),抗Sm、抗SSA/SSB与HLA－DQA１等位基因未发现有相关性(P＞０．０５)(见表１)
表１ 新疆维吾尔族系统性红斑狼疮自身抗体与HLA－DQA１等位基因的相关性
注n１:等位基因和自身抗体均阳性例数;n２:自身抗体阳性例数;n３:等位基因阳性且自身抗体阴性例数;n４:自身抗体阴性例数３ 讨论系统性红斑狼疮是一种常见的自身免疫性疾病,可累及全身多器官、多系统,以体内具有多种自身抗体为特征,一个或多个自身抗体的存在似乎与SLE 的某些临床特征有关,表明这些抗体在SLE的发病中可能起了一定的作用[５]. 自身抗体的产生是一个复杂的过程,现在多数学者认为,HLA 的某些等位基因通过影响患者的自身抗体的产生在疾病的分型及预后中起重要作用[６],其中HLA－DQ 的多态性与SLE 自身抗体的产生关系最密切[７].有学者认为HLA－II类等位基因实际上表现出与某些自身抗体比与SLE 本身有更强的相关性,等位基因对SLE的易感作用可能是通过自身抗体的作用引起的. 国外研究发现欧洲白人SLE 自身抗体中抗ds－DNA 与DQA１?０１０２、DQA１?０６０１呈正相关[８],Olsen等报道[９]黑人SLE患者抗Sm 与DQA１?０１０２呈正相关,抗RNP与DQA１?０１０１呈正相关,并进一步推测HLA－DQβ５７位及HLA－DQα３４位氨基酸残基可能在其中起着至关重要的作用. 国内相关研究显示江苏籍汉族和湖南地区汉族SLE抗Sm、抗ds－DNA、抗SSA/SSB及抗RNP均与DQA１?０１０２呈正相关[１０－１１].安徽籍汉族SLE 抗Sm、抗ds－DNA 与DQA１?０１０２及DQA１?０１０１呈正相关[１２].国内少数民族的相关研究显示云南白族SLE患者抗ds－DNA 与DQ６正相关,抗SSA/SSB与DQ２呈正相关[１３].广西壮族SLE 患者抗ds－DNA 与DQA１?０１０１ 呈正相关[１４].我们通过对４４例新疆维吾尔族SLE 患者自身抗体与HLADQA１相关性进行研究,发现抗ds－DNA 与HLA－DQA１? ０３０２呈正相关. 我们的研究结果与国内外报道不尽一致,提示自身抗体与基因关联存在多态性.由于本次研究例数较少,结果有待进一步加大样本探讨.
参考文献[１] 龙桂芳,阿卜迪,李卫,等．应用序列特异引物PCR法对广西壮族HLADQA１进行基因分型[J]．中华血液学杂志,１９９５,１６(１０):５３２－５３４．[２] 章星琪．系统性红斑狼疮的遗传因素－HLA 相关性研究[J]．国外医学皮肤性病学分册,１９９５,２１(５):２５７－２６０． [３] 彭学标,徐文严,费虹明,等．系统性红斑狼疮患者自身抗体与HLA[DR、DQ基因的相关性研究[J]．中华皮肤科杂志,１９９８,３１(１):９－１１． ４] 施为,刘稚然,谢红付．系统性红斑狼疮患者HLA－DQ 基因与自身抗体及肾脏受累的研究[J]．中华皮肤科杂志,２００１,３４(３):２２２． [５] 叶冬青,曹秀菁,李向培．HLA－DQA１等位基因与系统性红斑狼疮及自身抗体相关性[J]．中华流行病学杂志,２００１,２２(５):３９２－３９３． [６] 李峰,冒长峙,邵剑春,等．云南白族系统性红斑狼疮患者HLA－DR、DQ 多态性研究[J]．中华皮肤科杂志,２０００,３３(１):３３． [７] 刘栋华,梁伶,苏家光,等．广西壮族系统性红斑狼疮自身抗体与HLADQA１等位基因的相关性[J]．广西医科大学学报,２００７,２４(２):１８６－１８８．
论文作者:李文政 李婷婷 康晓静
论文发表刊物:《中国综合临床》2015年9月供稿
论文发表时间:2016/2/23
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