刘晓雯[1]2002年在《小肠蔗糖酶的分离纯化及部分性质》文中提出对猪小肠蔗糖酶(Sucrase，E.C.3.2.1.26)在分离纯化的基础上，对其性质进行了初步研究。将猪小肠匀浆后的粗提取物进行分段盐析、DEAE-Sepharose柱层析及Sephacryl S-200、Sephadex G-200凝胶过滤等纯化步骤，得到聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一蛋白区带，比活力为1.79units／mg蛋白的酶制品，经12％SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为一条区带，该酶的亚基相对分子质量为51000。等电聚焦显示其等电点(pI)为6.7。氨基酸组成分析表明：猪小肠蔗糖酶由约477个氨基酸残基组成，富含甘氨酸、谷氨酸、亮氨酸、门冬氨酸、苏氨酸、缬氨酸、脯氨酸。圆二色谱(CD)对其二级结构的分析显示，蔗糖酶分子中α-螺旋占28.8％，β-折迭占27.9％，无规则卷曲占43.2％。通过动力学方法测得该酶的最适pH值为6.9，最适温度为50℃，以蔗糖为底物的米氏常数K_m为18.9mmol／L。该酶在40℃以下时比较稳定。用化学修饰法测得该酶的功能基团是半胱氨酸的巯基，对氯汞苯甲酸(PCMB)对蔗糖酶的抑制作用为反竞争性抑制，其抑制常数K_i为0.75mmol／L。二巯基苏糖醇(DTT)修饰，NR／R单向SDS-PAGE、NR／R双向对角线SDS-PAGE的结果均表明蔗糖酶分子内没有二硫键存在。 各种金属离子对该酶的影响表现为：K~+、Fe~(2+)、CO~(2+)、Al~(3+)及Sb~(3+)对蔗糖酶活力影响不大；Zn~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)对蔗糖酶活力有不同程度激活作用，其中Zn~(2+)的激活作用最强：Li~+、Ni~(2+)、Ca~(2+)、pb~(2+)、Cd~(2+)、Hg~(2+)、Ag~+、Cr~(3+)及EDTA对蔗糖酶活力则有不同程度的抑制作用，其中Ag~(+)的抑制作用最强。在这些金属离子中，过渡金属离子Ni~(2+)、Mn~(2+)、Co~(2+)、Cu~(2+)、和Zn~(2+)在低浓度时对蔗糖酶有不同程度激活作用，随离子浓度增大，Zn~(2+)激活作用明显加强，在含5mmol／L Zn~(2+)的反应体系中酶活力为140％；Mn~(2+)、Co~(2+)激活作用增加不明显；Ni~(2+)表现出轻微抑制作用；而 CU卜在随其浓度上升过程中对酶活力的作用却表现为先激活后抑制，在 含 lmmol／L CuZ”的反应体系中酶活力增加了 13石％，在含 3mmol／L Cuy 的反应体系中酶活力基本没有改变，在含 smmol几 Cuy的反应体系中酶 活力被抑制了 41．7％。重金属离子 Ag＼ Hgh、Cd卜对蔗糖酶活力的抑 制作用随离子浓度增大而增加，smmol几 Ag“可完全抑制蔗糖酶的活性。 EDTA对蔗糖酶活性的抑制作用随其浓度增加呈线性增加。 中药材中苍术、桔梗、桑白皮、知母、五味子、麦冬、桑叶、淫羊 霍、丹皮、白术、乌梅、黄精、地黄、苍耳于、玉米须、冤丝子、玄参、 泽泻和玉竹的75％乙醇提取液对蔗糖酶有不同程度的抑制作用，其中苍 术、桔梗、桑白皮提取液的抑制作用较强，0．lmllo％苍术、桔梗、桑白 皮75％乙醇的提取液分别使酶活力下降了刀刀％、52．7％和52．6％；仙鹤 草、女贞子、天冬、石膏、人参和获菩的75％乙醇提取液对蔗糖酶活力 影响不大；花粉、地骨皮、红参、黄蔑、叁七、山药、黄莲和丹参的75％ 乙醇提取液对蔗糖酶有不同程度的激活作用，其中丹参的激活作用最 强，0刁ml 10％丹参的75％乙醇提取液使酶活力增加了41％。调味料中 大蒜对蔗糖酶有轻微激活作用，姜和花椒对蔗糖酶的活力影响不大，而 辣椒和胡椒则有不同程度的抑制作用。其中胡椒碱对蔗糖酶的抑制作用 随浓度增加而明显加强。当其浓度达到smmol几时，蔗糖酶活力仅剩余 12．7％。背角无齿蚌多糖对蔗糖酶有很强的激活作用。且随其浓度增加， 激活作用加强。当其浓度达到sing加l时，蔗糖酶活力高达225％。
黄洁[2]2011年在《黑曲霉TH-2蔗糖酶的分离纯化及部分性质与功能基团研究》文中进行了进一步梳理蔗糖酶(EC 3.2.1.26,Sucrase),又称转化酶或β-呋喃果糖苷酶,能够不可逆地催化蔗糖水解,生成葡萄糖和果糖。它广泛存在于自然界的动物、植物和微生物中,是生物体中一类重要的水解酶类。研究表明,微生物来源的蔗糖酶比动物、植物来源地蔗糖酶性质更加稳定,在工业生产中常以酵母、曲霉和细菌作为主要来源。本文从实验室保存的黑曲霉菌株中筛选出蔗糖酶高产菌,并以它作为出发菌株进行发酵培养,分离纯化出蔗糖酶,并对其部分酶学性质进行了研究,结果如下：从实验室保存的14株黑曲霉菌株中筛选出一株蔗糖酶高产菌株黑曲霉TH-2。黑曲霉TH-2发酵培养,发酵菌丝体经研磨、抽提、透析、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析得蔗糖酶纯品,并以SDS-PAGE检测其纯度。纯化后的蔗糖酶比活为135.2U/mg,回收率为37.7%,提纯倍数为20.3倍。测得该酶分子量为129kD,亚基分子量约为63.75kD,为双亚基酶。该酶最适温度为65℃,最适pH为4.4,在pH3-5范围内较稳定,米氏常数Km值为23.1mmol/L。在实验的几种化学试剂中,抗坏血酸的抑制作用最强,EDTA、双氧水和尿素对酶的活性影响不显着。在实验的金属离子中,Hg+、Ag+对蔗糖酶有很强的抑制作用；Ca2+、Mg2+、K+、Ba2+、Co2+对其活性仅有较弱的抑制作用；Zn2+、Cu2+、Mn2+对蔗糖酶有激活作用。采用修饰剂在一定条件下对该酶进行修饰,结果表明：甲硫氨酸、色氨酸、巯基、丝氨酸可能是蔗糖酶活性中心的必需基团,而组氨酸、酪氨酸、精氨酸、二硫键不是蔗糖酶活性中心的必需基团。
武忠亮[3]2007年在《烟草叶片蔗糖酶的分离纯化及部分性质研究》文中研究指明蔗糖酶(EC,3．1．2．26)是一种水解酶，广泛存在于动物、植物、微生物等各种生物体内。蔗糖酶在高等植物物质的贮存和光合作用产物的运输中起重要的作用。它不可逆的催化蔗糖水解为果糖和葡萄糖，为植物的生长和发育提供碳源和能源。蔗糖酶在蔗糖由源组织向库组织的运输中也具有重要的作用，蔗糖酶被认为是植物体内碳水化合物代谢中的关键酶。而且蔗糖酶还可以参与植物体的细胞分化和膨大、信号传导、以及对机械损伤、病菌侵害和对各种胁迫的响应等方面。烟草属双子叶植物纲(Dicotyledoneae)、管花目(Tubiflorae)、茄科(Solanaceae)、烟草属(Nicotiana)，是收获叶片的作物，烤烟是西南地区乃至全国重要的经济作物之一，我国卷烟工业生产中的重要材料来源。伴随着吸烟与健康的问题，烟草产品的质量控制在过去的几年中，成了全球日益关注的话题。糖作为一个必要的成分存在于所有的烟草品种之中，糖类的特征和品质不仅强烈的影响着作为卷烟生产中原材料烟叶的质量品质，而且还会影响最终的卷烟工业产品质量。糖不仅作为烟草中的一个天然组成成分，并且也经常被用来添加到卷烟生产中，被认为是一种安全的卷烟产品生产香味剂和保湿添加剂。蔗糖、果糖、葡萄糖等糖类是有机酸、类胡萝卜素和其它营养成分及芳香物质合成的基础原料。而且研究表明存在于烟草中的这些化合物的含量在烟叶的质量分级中具有很重要的作用。本实验主要通过对烟草叶片蔗糖酶的分离纯化、理化性质、酶促动力学特性以及功能基团的化学修饰等方面进行了研究，以期能够为在烟草栽培、烟叶生产及卷烟加工过程中提供相应的理论基础，结果如下：1．蔗糖酶的分离纯化以烟草叶片为材料通过组织捣碎、缓冲液抽提、超滤，硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析，以SDS-PAGE检测其纯度，获得了电泳纯的烟草叶片蔗糖酶，纯化倍数为138倍，比活性为65U/mg，回收率为17.4％。2．蔗糖酶的性质研究结果表明，蔗糖酶全分子量为129Kd，亚基分子量为63.5Kd，表明蔗糖酶是由两个相同的亚基组成。酶促动力学性质研究表明，蔗糖酶的最适pH值为4.0，在pH 3.0～5.5的范围内比较稳定，最适温度为45℃，温度高于55℃以上不稳定，酶的特征米氏常数Km值为13mmol/L，最大反应速度Vmax为7.67μg/min。3．金属离子及EDTA的影响在实验中，Hg~(2+)、Pb~(2+)、Ag~+及EDTA对蔗糖酶的抑制能力最强，而Cr~(3+)、As~(5+)对蔗糖酶的活性也有一定的抑制作用，Mn~(2+)、Cu~(2+)则能促进酶的活性，Mg~(2+)、K~+对蔗糖酶的活性无影响。4．蔗糖酶的化学修饰采用PMSF、NBS、IAc、BrAc、SUAN、TNBS、PCMB、DTT等修饰剂在一定的条件下修饰蔗糖酶，表明：PMSF、NBS、PCMB等显着地抑制酶的活力，而BrAc、IAc、TNBS、SUAN、DTT等对酶的活力影响不大。
申屠旭萍[4]2004年在《环醇类物质对糖苷酶抑制性的研究》文中进行了进一步梳理环醇类物质在许多微生物代谢产物的结构中能够发现。由于环醇类物质对水解酶特别是糖苷酶有强烈的抑制作用，已引起人们的普遍关注。本实验室以井冈霉素为原料，采用微生物催化技术，得到了环醇类物质井冈胺、井冈霉胺和井冈霉亚基胺A。 本论文以井冈胺和井冈霉胺为抑制剂，详细地研究了它们对猪小肠蔗糖酶、猪小肠麦芽糖酶、酵母蔗糖酶等糖苷酶的抑制作用，发现井冈胺和井冈霉胺对糖苷酶都有不同程度的抑制作用。井冈胺、井冈霉胺与底物竞争性地和酶结合，且结合迅速，基本上在前5分钟就达到了平衡，抑制达到了极限。在井冈胺和井冈霉胺的热稳定性试验中说明了这两种抑制剂在30～100℃范围内热稳定。 井冈霉亚基胺A是井冈霉素的组成结构，为二元环多醇类化合物，与海藻糖的结构非常相似。据文献报道，井冈霉亚基胺A对海藻糖酶有一定的抑制性能，因此可以有效控制有害昆虫和真菌的生长。本文也研究了井冈霉亚基胺A对猪肾海藻糖酶和家蚕海藻糖酶的抑制作用。实验表明井冈霉亚基胺A对海藻糖酶有很强的抑制作用。 另外，分析井冈霉素A的结构，发现井冈霉素A由井冈霉亚基胺A和葡萄糖用糖苷键连结构成，所以就试着探讨了用糖苷酶酶解井冈霉素制备井冈霉亚基胺A，发现酶解率并不是很高。要找到一种酶解率高的糖苷酶还需要很多的工作。 通过本文的研究为以后开发糖苷酶抑制剂药及生物农药提供了一定的理论基础。
刘晓雯, 刘克武, 江琰, 闵丽娥, 喻东[5]2003年在《部分中药材及调味料对小肠蔗糖酶活性的影响》文中研究表明目的研究部分中药材及调味料对分离纯化的猪小肠蔗糖酶活性的影响。方法将 19种中药和 5种调味料的 75%乙醇提取液加入蔗糖酶酶促反应体系中并测定酶活性。结果苍术、桔梗、桑白皮提取液分别使酶活性下降 ;仙鹤草、女贞子、天冬、石膏、人参和茯苓提取液对蔗糖酶活性影响不大 ;花粉、地骨皮、红参、黄芪、叁七、山药、黄莲和丹参提取液使蔗糖酶活性增加。大蒜使蔗糖酶活性增加 ,姜和花椒对蔗糖酶的活性影响不大 ,辣椒和胡椒使酶活性降低。结论苍术、桔梗、桑白皮、辣椒和胡椒提取液对蔗糖酶有抑制作用 ,从而降低此酶对蔗糖的水解 ,临床上有可能用于减少糖尿病患者对葡萄糖的吸收
许婷[6]2014年在《Leuconostoc citreum SK 24.002产交替糖蔗糖酶的研究》文中指出交替糖(alternan)是一种功能性胞外多糖，它具有特殊的化学结构，即含有交替的-1,3糖苷键和-1,6糖苷键，因而具有一些独特的功能特性，如热值低、粘度低、抗微生物降解、抗酶解、耐酸、耐热等。交替糖蔗糖酶（alternansucrase）是一种新型的葡聚糖蔗糖酶，可以以蔗糖为底物合成交替糖，若反应体系中存在一些小分子糖类，如麦芽糖、异麦芽糖、龙胆二糖等，该酶还可以催化受体反应，即以小分子糖类为受体，蔗糖为供体，通过葡糖基转移作用生成低聚糖。这些低聚糖具有较好的益生作用，能够有效的改善人体的肠道健康；同时，利用交替糖蔗糖酶还可以对淀粉进行改性作用，有效的改善淀粉的理化特性。目前国外关于交替糖蔗糖酶的研究较多，但国内对其研究还较少。本课题利用嗜柠檬酸明串珠菌Leuconostoc citreum SK24.002产交替糖蔗糖酶，并对该酶的纯化、酶学性质及在受体反应和对淀粉的改性方面的应用进行了研究。首先，本课题研究了嗜柠檬酸明串珠菌Leuconostoc citreum SK24.002产交替糖蔗糖酶的分布情况。对该酶进行提取后，利用聚乙二醇2000沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法对其进行分离纯化，并对该酶的酶学性质进行了研究，包括：最适温度及温度稳定性、最适pH及pH稳定性、金属离子对酶活的影响和酶的动力学等。结果表明，嗜柠檬酸明串珠菌Leuconostoc citreum SK24.002所产交替糖蔗糖酶主要分布于菌体的细胞膜上，利用8mol/L的尿素可以对其进行有效的提取。纯化后的交替糖蔗糖酶经SDS-PAGE检测，结果为单一条带；其最适温度为40°C，在40°C~45°C间温度稳定性较好；最适pH为5.4，pH稳定性在pH5.0~5.4间较好；Co2+对交替糖蔗糖酶的酶活促进作用比较明显，而Cu2+的抑制作用较为强烈；交替糖蔗糖酶对蔗糖的米氏常数Km为14.52mmol/L，最大反应速度Vmax为0.576μmol/（min mL）。然后，本课题对以蔗糖和麦芽糖为底物的交替糖蔗糖酶的受体反应进行了研究，对该受体反应的产物进行了纯化，并对其产物进行了鉴定，确定了该受体反应的产物为低聚叁糖、低聚四糖、低聚五糖。为了提高交替糖蔗糖酶的受体反应产低聚糖的产量，本课题以低聚四糖为指标，从加酶量、反应温度、体系pH、底物浓度、反应时间等方面对该反应进行了条件优化，确定了其最优反应条件为：100g/L蔗糖、100g/L麦芽糖和0.3U/ml酶液，反应时间为5h，反应温度为40°C，反应体系为50mM pH5.4的醋酸缓冲液，在该条件下，低聚四糖的最大产量为52.8g/L。最后，本课题利用交替糖蔗糖酶在蔗糖存在的情况下，对淀粉进行改性，并对改性后的淀粉的消化性、分子量、分子旋转半径和链长分布进行了研究。结果发现，该酶可以使淀粉中慢消化淀粉（SDS）的含量由原淀粉的9.40%增加到11.53%，抗性淀粉（RS）的含量由原淀粉中的10.52%增加到12.23%；同时还能有效的增加淀粉的分子量与分子旋转半径，并能扩展淀粉分子的链长分布范围，短链（DP<13）和长链（DP>30）部分含量有明显提高。
扶雄, 张伟, 朱思明, 李超, 游丽君[7]2014年在《香椿叶多酚的提取分离及其体外对糖尿病关键酶活性的抑制作用》文中提出本研究从香椿叶中提取分离多酚,研究多酚对糖尿病关键酶(猪胰腺α-淀粉酶、鼠小肠蔗糖酶和麦芽糖酶)活性的影响。采用活性追踪法,运用多种分离纯化技术和色谱学分析,逐级筛选活性强的部位以及单体化合物。研究发现香椿叶多酚粗提物具有显着的酶抑制作用,猪胰腺α-淀粉酶、鼠小肠蔗糖酶和麦芽糖酶的半数抑制率(IC50)值分别为0.45 mg/mL、1.29 mg/mL和1.41 mg/mL。乙酸乙酯萃取后的70%乙醇洗脱部位为主要活性部位,其对猪胰腺α-淀粉酶、鼠小肠蔗糖酶和麦芽糖酶抑制作用的IC50值分别为0.091mg/mL、0.97 mg/mL和1.00 mg/mL。从活性部位分离出2个单体化合物,分别鉴定为:1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖(PGG)和没食子酸乙酯(EG),其中PGG具有显着的α-淀粉酶抑制活性,IC50值为0.069 mg/mL;EG对蔗糖酶和麦芽糖酶具有一定的抑制活性,IC50值分别0.82 mg/mL和0.81 mg/mL。研究表明多酚化合物是香椿叶的有效降血糖功能成分之一,PGG和EG是主要的活性成分。
刘晓雯, 刘克武, 江琰, 闵丽娥, 喻东[8]2003年在《小肠蔗糖酶的化学修饰及对酶活力的影响》文中提出考察了苯甲基磺酰氟、N 溴化琥珀酰亚胺、琥珀酸酐、叁硝基苯磺酸对猪小肠蔗糖酶活性的影响。将猪小肠匀浆后的粗提取物进行分段盐析、DEAE Sepharose柱层析及SephacrylS 200、SephadexG 200凝胶过滤等纯化步骤,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一蛋白质区带,比活力为1 79units/mg,经12%SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳为一条区带,其亚基相对分子质量为51000。该酶的功能基团是半胱氨酸的巯基,蔗糖酶分子内没有二硫键存在。
刘泉[9]2008年在《α-葡萄糖苷酶抑制剂TD-01的抗糖尿病作用及其机制研究》文中提出α-葡萄糖苷酶抑制剂(包括阿卡波糖,米格列醇和伏格列波糖)目前已被作为单纯饮食控制不佳2型糖尿病患者的首选降糖药物及1型糖尿病患者在使用胰岛素治疗时的首选辅助药物。它通过抑制碳水化合物在小肠内的吸收,降低餐后血糖及胰岛素水平。近年大量临床调查研究表明,α-葡萄糖苷酶抑制剂能够延缓糖耐量异常患者向2型糖尿病转化的进程,并且在调节糖脂代谢、提高胰岛素敏感性、保护胰岛细胞功能及改善糖尿病血管并发症等方面具有更广阔的应用前景。目前,国内糖尿病药物市场中应用的α-葡萄糖苷酶抑制剂主要是进口药物,价格较贵,对于多数长期服药的糖尿病患者,经济压力较大。因此,充分开发中药资源或合成具有一定活性的小分子化合物,研发既经济又有良好治疗效果的国产α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物势在必行。TD-01是一种全化学合成的小分子化合物,由深圳太太药业有限公司合成,是定向筛选α-葡萄糖苷酶抑制活性的样品。本文的研究目的主要是评价TD-01对多种糖尿病动物模型的餐后血糖、胰岛素敏感性、胰岛细胞功能和糖尿病肾脏病变等的改善作用,并对其作用机制进行初步研究。主要设计了五部分的实验并得到如下结果:第一部分:TD-01对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用及其机制的初步探讨体外酶活性抑制试验提示,TD-01对α-蔗糖酶、α-麦芽糖酶有明显的抑制作用,且对α-蔗糖酶抑制作用强于Acarbose;对α-淀粉酶无抑制作用,提示TD-01可能具有降低餐后血糖的作用,并且发生肠胀气的副作用可能会小于Acarbose。TD-01对α-葡萄糖苷酶的抑制作用属竞争性抑制,对α-蔗糖酶和α-麦芽糖酶的抑制常数Ki分别为1.32×10~(-7)和3.89×10~(-7) mol/L。此化合物的稳定性较好,在一定范围温度和pH值环境处理后,仍具有良好的酶抑制活性。第二部分:TD-01对正常ICR小鼠和四氧嘧啶高血糖小鼠多种糖负荷后血糖升高的影响TD-01能够降低正常ICR小鼠和四氧嘧啶高糖小鼠蔗糖、淀粉负荷后血糖的升高,但并不直接影响葡萄糖自肠道的吸收。这与体外酶抑制活性试验结果一致,提示TD-01是通过抑制肠道双糖酶的活性来降低餐后血糖上升幅度的。第叁部分:TD-01对链脲菌素糖尿病大鼠的糖、脂代谢及糖尿病肾脏病变的影响STZ诱导的1型糖尿病大鼠主要表现为餐后血糖、空腹血糖、糖化血清蛋白以及尿糖的水平显着升高,并存在一定程度的糖尿病肾脏病变。研究表明,长期给予TD-01能够显着降低该模型大鼠的空腹血糖、餐后血糖、血清果糖胺、血清甘油叁酯、总胆固醇及尿糖水平,改善多食多饮症状,这些结果表明,TD-01通过有效控制餐后高血糖改善了高糖大鼠的糖、脂代谢紊乱症状。TD-01降低血清NAG酶活性及尿素氮水平,使该模型的肾脏指数有一定程度降低,这些结果表明,TD-01在改善糖脂代谢的同时,也有益于STZ诱导的1型糖尿病大鼠肾脏病变的改善。第四部分:TD-01对小剂量STZ诱导的大鼠糖耐量异常的改善作用小剂量STZ诱导的糖耐量异常大鼠模型以高蔗糖饲料饲养后,主要表现为胰岛功能部分受损、糖耐量异常、空腹血糖略高。长期给予TD-01,可明显降低糖耐量异常大鼠的餐后血糖、空腹血糖,有增加胰岛素敏感指数趋势。并能缓解STZ诱导的胰腺中胰岛数量的减少,这些结果说明TD-01能够一定程度改善糖耐量异常大鼠的胰岛素敏感性并保护胰岛细胞功能。第五部分:TD-01对肥胖性胰岛素抵抗MSG小鼠的代谢综合征相关特征指标的影响谷氨酸单钠盐(MSG)诱导的肥胖性胰岛素抵抗小鼠模型具有一定代谢综合征的特征。主要表现为胰岛素抵抗、糖脂代谢紊乱、高胰岛素血症和中心性肥胖。用TD-01治疗后,MSG小鼠胰岛素耐量异常改善、空腹血胰岛素水平降低,并且血清甘油叁酯和Lee's指数有降低趋势。以上结果说明TD-01能够一定程度提高肥胖性胰岛素抵抗MSG小鼠的胰岛素敏感性,有一定改善脂质代谢紊乱作用。综上,TD-01是国内学者全新合成的一个小分子α-葡萄糖苷酶抑制剂,具有较好的双糖酶抑制活性;能有效控制糖尿病动物模型的餐后血糖上升、降低餐后高糖毒性,一定程度提高胰岛素敏感性、保护胰岛细胞功能、改善糖耐量异常及糖尿病肾脏病变。因此,TD-01可能成为一种新的降糖药物,用于糖尿病的治疗及其并发症的缓解和改善。
李湘师[10]2015年在《海蒿子多糖的提取分离及其生物活性》文中提出海蒿子是我国传统海洋褐藻的代表,但关于其生物活性和结构的报道却很少,本文对其多糖进行提取、分离纯化、结构分析和生物活性的初步研究,有助于充分利用该海洋资源,为深入研究和开发提供理论依据。通过比较五种不同的提取方法对海蒿子多糖性质的影响,择优选取保持良好功能活性的传统水提法提取工艺。以料液比1:20(g/m L)、温度100℃、提取时间2 h重复提取两次,多糖得率为2.88±0.33%,平均分子量为739.66 k D,氧自由基吸收能力(ORAC)值可达5404.90μmol Trolox/g,硫酸基含量为12.28%,可保持良好的抗氧化活性。对提取的海蒿子粗多糖,考察其理化性质、抗肿瘤活性、免疫调节、降血糖活性等。结果表明,海蒿子粗多糖UV光谱中蛋白质吸收峰非常弱。海蒿子粗多糖具有较好的降血糖活性,当多糖浓度为2 mg/m L时,对α-淀粉酶、α-D-葡萄糖苷酶、蔗糖酶、麦芽糖酶的抑制率依次为85.02%、53.25%、42.96%和49.67%。海蒿子粗多糖对人肝癌细胞Hep G2和人宫颈鳞癌细胞Si Ha细胞表现出显着的抑制增殖作用,500μg/m L浓度时,对Hep G2细胞增殖率为28.92%,对Si Ha细胞的抑制率为27.29%。海蒿子粗多糖具有较好的免疫调节作用,对巨噬细胞NO的生成具有显着的促进作用,呈量效关系,浓度为250μg/m L时,生成NO量为17.618±0.649 mol/L;海蒿子粗多糖、海蒿子粗多糖协同Con A诱导、LPS诱导均对小鼠脾脏淋巴细胞的增殖均具有增强作用,且协同组显着高于Con A组、LPS组。采用复合工艺制备多糖钙复合物,浓度质量比为1:5.5时,海蒿子多糖与钙的螯合率最高,达到93.83±1.11%,多糖与钙复合后,依然保持了良好的抗氧化活性。结构中基本糖骨架没有发生改变,但在3395cm-1、2919 cm-1、1038cm-1等处的吸收峰相应减弱,钙与O-H等有所缔合。采用DEAE-Sepharose FF柱层析分离获得四个组分SP-P1、SP-P2、SP-P3和SP-P4,系统的比较了不同组分在理化性质、抗氧化活性、抗肿瘤活性、降血糖活性、结构方面的差异。结果显示:海蒿子组分多糖SP-P2与其它组分相比较,生物活性表现突出,与其硫酸基含量高有关。SP-P2的氧自由基的吸收能力(ORAC)可达2961±209.27μmol Trolox/g,在浓度为500μg/m L时,对鹅红细胞AAPH所致溶血的抑制率达66.02%;浓度为2 mg/m L时,对α-淀粉酶、α-D-葡萄糖苷酶、麦芽糖酶和蔗糖酶的抑制率依次为73.21%、60.05%、32.42%和53.51%;在浓度为500μg/m L时,对Hep G2细胞的抑制率达57.71%;此外,四个组分对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞的增殖,显示出抑制作用先弱后强的剂量效应,多糖浓度为750μg/m L时,对MDA-MB-231细胞的抑制率依次为34.76%、43.12%、39.30%和31.68%,SP-P2的抑制活性相对较好。利用高碘酸氧化分析、IC、IR、NMR等技术分析各组分多糖的结构组成。结果显示,各组分多糖结构中1-6连接键、1-3连接键、1-2和1-4连接键含量百分比各异。中性多糖SP-P1单糖组成及摩尔比为:岩藻糖:鼠李糖:半乳糖:葡萄糖:木糖:甘露糖=2.09:0.02:2.76:1:1.01:0.31,不含糖醛酸。酸性多糖均包含葡萄糖醛酸,不含半乳糖醛酸,单糖组成各异。各组分多糖均在范围4000~400 cm-1呈现典型多糖吸收峰,其中中性多糖SP-P1于1258 cm-1处的吸收峰,是-O-SO3-基团中S=O对称伸缩振动。SP-P2的1H NMR和13C NMR谱表明SP-P2糖链的主链结构应为α(1→6)吡喃型葡聚糖。
参考文献：
[1]. 小肠蔗糖酶的分离纯化及部分性质[D]. 刘晓雯. 四川大学. 2002
[2]. 黑曲霉TH-2蔗糖酶的分离纯化及部分性质与功能基团研究[D]. 黄洁. 西南大学. 2011
[3]. 烟草叶片蔗糖酶的分离纯化及部分性质研究[D]. 武忠亮. 西南大学. 2007
[4]. 环醇类物质对糖苷酶抑制性的研究[D]. 申屠旭萍. 浙江工业大学. 2004
[5]. 部分中药材及调味料对小肠蔗糖酶活性的影响[J]. 刘晓雯, 刘克武, 江琰, 闵丽娥, 喻东. 中国生化药物杂志. 2003
[6]. Leuconostoc citreum SK 24.002产交替糖蔗糖酶的研究[D]. 许婷. 江南大学. 2014
[7]. 香椿叶多酚的提取分离及其体外对糖尿病关键酶活性的抑制作用[J]. 扶雄, 张伟, 朱思明, 李超, 游丽君. 现代食品科技. 2014
[8]. 小肠蔗糖酶的化学修饰及对酶活力的影响[J]. 刘晓雯, 刘克武, 江琰, 闵丽娥, 喻东. 化学研究与应用. 2003
[9]. α-葡萄糖苷酶抑制剂TD-01的抗糖尿病作用及其机制研究[D]. 刘泉. 中国协和医科大学. 2008
[10]. 海蒿子多糖的提取分离及其生物活性[D]. 李湘师. 华南理工大学. 2015