朱善军 朱同华 沈昊 陆静芬 马春芳 沈国荣（通讯作者）
（江苏省苏州市吴江区第一人民医院检验科 江苏 苏州 215200）
【摘要】 目的：研究比较疱疹病毒应用实时定量方法与酶联免疫吸附试验方法的检验效果。方法：择取对象为2013年4月至2015年9月期间本院收治的疱疹病毒感染者，共有45例，分别用实时定量法与酶联免疫吸附试验法检测患者血液、分泌物，比较分析两种方法检测情况。结果：在分泌物检测中，实时定量法检测所获阳性率（88.9%）明显高于酶联免疫吸附试验法（44.4%）；在血液标本上，实时定量法检测所获阳性率（37.7%）明显低于酶联免疫吸附试验法（57.7%），两种方法检测阳性率差异显著，有统计学意义（P＜0.05）。结论：在疱疹病毒分泌物检验中应用实时定量法所获阳性率明显高于酶联免疫试验法，检测准确率高，值得在临床中优先使用，但要注意在血液检测中一般不建议使用实时定量法。
【关键词】 疱疹病毒；实时定量法；酶联免疫吸附试验法；比较
【中图分类号】R751 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）15-0098-02
疱疹病毒属于双股DNA病毒，生长周期较长，其感染的宿主范围较广，能够感染人类与其他脊椎动物[1]。疱疹病毒一般侵犯外胚层来源的组织，比如神经组织、皮肤组与粘膜组织，感染位置与引起的疾病比较复杂，且还存在潜伏感染的风险，对人们的健康易造成严重影响，故及时检测出疱疹病毒也变得尤为重要[2-3]。本次研究笔者就疱疹病毒应用实时定量法与酶联免疫吸附试验法的检验效果进行对比分析。
1.材料和方法
1.1 研究对象
选取2013年4月至2015年9月期间本院收治的疱疹病毒感染者45例，均为女性，年龄在20～58岁之间，平均年龄为39.61±3.24岁，临床症状表现为女性宫颈炎、疱疹性口腔炎、生殖器疱疹、唇疱疹以及皮肤疱疹等，患者和其家属均于知情同意书下愿意配合本次研究。
1.2 材料
7600全自动实时荧光定量PCR仪购自美国Appliued BioSystem公司，荧光定量PCR引物和探针均购自美国Appliued BioSystem公司，PCR试剂盒购自宝生物（大连）有限公司，酶联免疫吸附试验试剂盒购自科华（上海）生物有限公司
1.3方法
1.3.1标本处理 棉拭子取病人患处分泌物，将其放在磷酸盐缓冲液中即刻送检，同时采集病人外周血3mL备用。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆取100uL标本液和1000uL磷酸盐，混匀后进行离心5000rpm，离心5min，将上层清液去除，取沉淀物制备模板。
1.3.2模板制备 将沉淀物与1000uL磷酸盐充分混匀，然后煮沸并持续20min，离心后进行检测。
1.3.3疱疹病毒定量检测 按照PCR试剂盒说明要求进行试验，模板取值10uL，引物浓度设定为50pmoL/L，于7600全自动实时荧光定量PCR仪下检测，反应条件为：91℃ 30S, 56℃ 30S, 71℃ 1min，40个循环。酶联免疫吸附试验法按照试剂盒说明要求常规进行。
1.4 观察指标
观察和分析两种方法检验阳性情况，并进行比较分析。
1.5 统计学处理
利用SPSS18.0软件对研究据施予统计学处理和分析，其中计量资料用均数±标准（x-±s）差表示,计数资料用%表示，以卡方比较检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
应用实时定量法和酶联免疫吸附试验法分别对分泌物和血液中的疱疹病毒进行检测，结果对比如表1所示，从表1数据来看，在分泌物检测上，实时定量法阳性率可达88.9%，和酶联免疫吸附试验法相比明显要高；在血液检测上，酶联免疫吸附试验法阳性率可达57.7%，与实时定量法阳性率相比明显要高，两种检验方法在阳性率上差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）。可见，在不同检测对象上，两种方式各具优势。
表1 血液、分泌物应用实时定量法和酶联免疫吸附试验法检验结果[n(%)]
类别 实时定量法阳性率酶联免疫吸附试验法阳性率
分泌物88.9（40/44） 44.4（20/44）*
血液 37.8（17/44） 57.7（26/44）*
注：和实时定量法相比较，*表示P＜0.05。（这个就是三线表）
3.讨论
目前在临床中比较常见的疱疹病毒有单纯疱疹病毒1型、2型、水痘带状疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒、人类疱疹病毒6型、7型以及8型[4]。疱疹病毒经常会对人体皮肤、口舌、粘膜和嘴唇造成破坏，如果病毒侵入至中枢神经，则可能会引起脑炎，严重影响和威胁着患者身体健康[5]。目前疱疹病毒的临床治疗尚无特效药，只有经准确且尽早的病毒检测，及早预防和治疗，方可获得满意的疗效。本次研究就疱疹病毒应用实时定量法与酶联免疫吸附试验法的检验效果进行了比较分析，结果显示，在分泌物检测中，实时定量法所获阳性率明显比酶联免疫吸附试验法高；在血液检测中，实时定量法所获阳性率和酶联免疫吸附试验法相比要低，两种检验法比较差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）。
综上所述，病毒感染人体后，一方面抗体的产生需要一定的时间，另一方面由于患者个体差异和病毒感染数量的不同等问题，导致不同个体间抗体效价差异很大。这些因素都显著降低了酶联免疫吸附试验法检测的敏感性，导致在分泌物检测中阳性率偏低，所以在疱疹病毒早期检验中一般不建议使用该方法。应用实时定量法可以直接检测病毒核酸，敏感性大大提高，在分泌物中阳性率可达到88.9%（40/44），可为疱疹病毒的早期诊断提供依据，值得在临床应用中推广。至于应用实时定量法检测血液中的疱疹病毒，由于受到采血量的限制，阳性率偏低，尚不具备应用价值。
【参考文献】
[1] 吴玉才,汪丽俐,张淑娟等.佛山市南海区性病门诊350例疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒抗原与抗体检测与分析[J].广州医药,2015,46(3):42-44.
[2] 李颖,顾国龙,谢智光等.酶联免疫吸附法检测血清疱疹病毒NA1-IgA 及VCA-IgA在鼻咽癌诊断中的价值[J].检验医学与临床,2010,07(20):2250-2251.
[3] 刘岩,胡春卉,尹瑞兴等.广西罗城县少数民族和汉族人群血清EB病毒感染情况分析[J].重庆医学,2012,41(14):1404-1406.
[4] 王卓,唐倩,吕茂民等.两种ELISA试剂盒对我国单采血浆中水痘-带状疱疹病毒中和抗体滴度的测定和比较[J].中国医药生物技术,2011,06(6):405-409.
[5] 刘涛,斯国静,俞骅等.重组免疫优势肽段为抗原的ELISA法在检测2型单纯疱疹病毒感染中的应用[J].国际流行病学传染病学杂志,2012,39(6):369-372.
论文作者:朱善军,朱同华,沈昊,陆静芬,马春芳,沈国荣（通讯
论文发表刊物:《医药前沿》2016年5月第15期
论文发表时间:2016/6/22
标签：疱疹论文; 定量论文; 病毒论文; 实时论文; 免疫论文; 分泌物论文; 阳性率论文; 《医药前沿》2016年5月第15期论文;