杨汉煜[1]2001年在《血浆中微量多组分药物的液相色谱—串联质谱法定量分析》文中研究说明药物动力学分析的基础是对药物及其代谢物生物样品的分析。这些分析方法需要灵敏的现代化分析仪器，例如高效液相色谱(HPLC)。由于质谱既具有专属性又具有通用性，因此是一个理想的色谱检测器。近年来由于液相色谱和质谱之间接口技术的成功发展，LC／MS已经成为一个有效的分析工具。本文利用液相色谱-串联质谱(LC／MS／MS)技术，以选择反应监测(SRM)方式进行检测定量，建立了3种专属、灵敏、快速的定量分析方法，用于血浆中微量多组分药物的测定。所建方法已被成功地应用于药物动力学研究。 一、大鼠血浆中BAP909和BAP910定量分析 首次建立了专属的LC／MS／MS方法，同时测定大鼠血浆中新药候选物BAP909和BAP910的浓度。血浆样品经液-液萃取后，以氯雷他定为内标，以乙腈-水-甲酸(40:60:1，v／v／v)为流动相，采用Capcell Pak C_(18)柱进行分离，通过APCI源离子化，用于定量分析的离子分别为m／z 370→236(BAP909)，m／z 374→236(BAP910)和m／z 383→337(内标)。BAP909和BAP910的线性范围分别为25-5000ng／mL和5-1000ng／mL，最低定量浓度分别为25ng／mL和5ng／mL。应用本法对大鼠联合灌胃给予BAP909和BAP910后的药物动力学进行研究，发现该药在大鼠体内吸收迅速，但药物动力学性质表现出性别差异，雌性大鼠的血浆药物浓度明显高于雄性大鼠。 二、人血浆中二氢麦角胺及其活性代谢物定量分析 建立了同时测定人血浆中二氢麦角胺(DHE)及8’-羟基二氢麦角 摘 要胺旧’－OH－DHE）的液相色谱一质谱一质谱联用法。血浆样品经液一液革取后进行色谱分离，以乙睛一水－甲酸＊0：7015，V灯／v）为流动相，卡洛维林为内标，采用 Z。rbgy SB C18柱分离，通过 ESI源离子化，用于监测定量的离子为 M 584＋270（DHE），t 600＋270 （8’－OH－D HEHE）和m店366＋293（内标）。DHE及8’－OH－DHE的线性范围均为 10刀八 刀 pg／ffiL，最低定量浓度均为 10．0 pg／thL。日内日间精密度（＊＊D）＜10％，相对偏差司1％，方法的提取回收率分别为 57．90（DHE），52．3O（8’－OH－DHE）和 77．6O（I．S．）。本法每一样品的分离时间为 2．smin，大大提高了测试速度，每天可处理 120多个血浆样品。叁、人血浆中氯雷他定及其活性代谢物定量分析 建立了同时测定血浆中氯雷他定及去碳乙氧基氯雷他定（DCL）的LC／MS／MS方法。血浆样品经液－液荤取后，以苯海拉明为内标，以乙睛一水一甲酸（75：25：1．5，v／v／V）为流动相，采用 ZOrbat SB CS柱进行分离，通过 APCI源离子化，用于定量分析的离子分别为 t 383＋337 氯雷他定）、们店311＋259（DCL）和m店256＋166 内标）。氯雷他定及 DCL的线性范围均为 0二－50刀 g／mL，最低定量浓度均为0．2 ughaL。药动学研究结果表明氯雷他定口服后吸收迅速，并很快转化成其活性代谢物 DCL，DCL的山 和 AUC－。分别约为氯雷他定的2．8倍和78倍。
顾琦[2]2004年在《液相色谱—串联质谱法定量分析血浆中微量多组分药物》文中研究指明药物动力学研究的基础是对药物及其代谢物生物样品的分析。需要建立准确、专属、灵敏的定性和定量方法在复杂样品基质中进行痕量药物分析。近几年，液相色谱-质谱联用法(LC／MS)因其对多数药物的通用性、检测的专属性和灵敏度方面的优势，已迅速成为药物动力学研究的主要分析方法。采用LC／MS法所达到的定量限与其它检测器相比，通常更佳，所需时间更短，从而鼓励了多组分定量分析的广泛使用。本文利用液相色谱-串联质谱(LC／MS／MS)技术，建立了2种专属、灵敏、快速的定量方法，用于血浆中微量多组分药物的测定。所建方法已被成功应用于药物动力学研究。 一、大鼠血浆中HWH-8-11和HWH-8-26定量分析 建立了专属、灵敏的LC／MS／MS方法，同时测定大鼠血浆中新药候选物HWH-8-11和HWH-8-26的浓度，研究HWH-8-11及HWH-8-26在大鼠体内的药物动力学性质。血浆样品经液-液萃取后，以BAP909为内标，以甲醇-甲酸(100：0.5，v／v)为流动相，采用Zorbax Extend-C18柱进行分离，通过APCI源离子化，用于定量分析的离子反应分别为m／z 383→m／z 348(HWH-8-11)，m／z 400→m／z 365(HWH-8-26)和m／z 370→m／z 157(内标，艾瑞昔布)。HWH-8-11和HWH-8-26的线性范围均为5-2000 ng／mL，定量浓度下限均为5.0ng／mL。应用本法对大鼠灌胃给予HWH-8-11和HWH-8-26混合物后的药物动力学进行研究，发现灌胃给药后，受试化合物HWH-8-11吸收较慢，平均达峰时间为7.43h，HWH-8-26吸收较迅速，达峰时间为
王彩虹[3]2017年在《中药多成分药代动力学的新方法和策略研究》文中进行了进一步梳理中药多成分药代动力学(简称多成分药代)是中医药理论和作用机制阐明的重要研究内容。但是由于中药成分的复杂和多样性,以及中药成分与生物体系相互作用的复杂性和不确定性,中药多成分药代动力学的研究一直面临着巨大挑战:(1)中药化学成分复杂、体内代谢多样化,使得体内成分的结构鉴定困难;(2)药代动力学研究的目标化合物不明确、在中药及生物样本浓度低、内源性基质和组分之间干扰大、对照品缺乏,导致中药多成分检测和定量方法的建立困难;(3)药效指标不统一、有效成分不明确,导致中药药代动力学研究结果的综合评价和应用不充分。因此需要运用先进的分析技术,能够快速、准确、全面的定性分析中药体内多成分,灵敏、快速、准确、宽动态范围的定量分析中药体内多成分,建立符合中医治病整体观的更深层次和更广视角的新策略,为符合中医理论的中药多成分药代动力学研究提供技术支持和科学数据。本论文针对中药药代动力学研究存在的一些瓶颈问题,分别选择了巫山淫羊藿、小续命汤有效成分组和二仙汤为研究对象,探索性地开展了中药多成分药代动力学研究所需分析新技术和新策略的研究工作。论文第一部分针对中药多成分药代研究缺乏体内成分及其代谢物对照品的瓶颈问题,探索性地基于体内主要成分代谢途径的全面诠释,建立多成分药代指标成分的研究策略。该策略首先采用高效液相色谱-高分辨质谱/质谱联用方法(HPLC-HRMSn)和质谱树状图相似度过滤(MTSF)技术对淫羊藿5个主要异戊烯基黄酮成分在大鼠体内的代谢产物进行了分析和鉴定,基于体内代谢物的鉴定结果推断5种主要异戊烯基黄酮的代谢途径,将血浆中主要暴露的14个原型成分和葡萄糖醛酸代谢物选为潜在的药代指标成分,作为测定对象,采用高效液相色谱串联质谱分析技术(HPLC-MS/MS),初步研究了 5种主要异戊烯基黄酮灌胃给予大鼠后,这14个体内成分在血浆中的主要药动学参数特征;由于葡萄糖醛酸结合型代谢物没有对照品,因此采用酶水解的方法将血浆样本中的这14个体内成分转化为有对照品、且存在代谢转化关系的10个潜在药代指标成分作为药代动力学的研究对象,建立了 HPLC-MS/MS分析方法:在色谱分离方面,通过优化两种流动相的比例和混合时间,在二元液相泵上实现了四元流动相的分离效果,消除了朝藿定A-C/淫羊藿苷的cross-talk和淫羊藿素的基质效应;在质谱检测方面,采用分段多反应监测模式,缩短了质谱的duty cycle,从而增加了方法的灵敏度。所建立的方法经过了方法验证,能够满足生物样品分析,并被应用于研究5种主要异戊烯基黄酮和巫山淫羊藿灌胃给予大鼠后,10个潜在的药代指标成分在血浆中的主要药动学参数特征;采用Kendall's tau-b等级相关分析法对酶水解前后血浆中测得的指标成分的浓度随给药时间的变化进行相关性分析。实验结果表明淫羊藿素的葡萄糖醛酸结合型代谢物是巫山淫羊藿灌胃给药后,异戊烯基黄酮在大鼠体内的主要存在形式。另外,酶水解血浆中的总淫羊藿素水平能够同时反映异戊烯基黄酮在体内的暴露量和动态变化。因此,具有高暴露量和较好相关性(r>0.5)的淫羊藿素可以作为巫山淫羊藿异戊烯基黄酮的药代指标成分。除此之外,我们还利用淫羊藿素的药代特征建立数学模型,用于预测大鼠体内巫山淫羊藿的暴露量。结果显示预测值与实验值有较好的一致性,进一步证实酶水解血浆中的淫羊藿素可以作为巫山淫羊藿中异戊烯基黄酮的药代指标成分。论文第二部分研究了中药复方小续命汤抗脑缺血的有效成分组(AF-XXMD)的多成分药代。采用HPLC-HRMSn方法和MTSF技术分析和鉴定AF-XXMD中68种化学成分,对大鼠血浆和脑内高暴露水平的化学成分,采用反向分子对接的方法,预测了药理活性,选择大鼠血浆和脑组织21个高暴露且预测有活性的化合物作为药代指标成分,建立高分离度快速液相色谱串联质谱法(RRLC-MS/MS)。前处理方法通过添加抗坏血酸保护血浆中的黄芩苷和黄芩素不被氧化,通过脂质预处理柱除去磷脂,以消除血浆和脑组织中甘草酸的基质效应;色谱分离采用RRLC法,可实现3对同分异构体的基线分离;质谱检测采用分时间段的正负离子切换模式,并通过添加微量的甲酸铵(0.08mmol l-1)提高各化合物的质谱响应。对所建方法进行了方法验证,表明该方法符合生物样品分析方法的技术要求,满足大鼠脑组织和血浆中的药代动力学研究需要;采用正常大鼠与双侧颈总动脉结扎导致的慢性脑缺血模型大鼠,灌胃给予AF-XXMD,比较研究了 21个指标成分的血浆和靶器官脑的药动学特征和差异。研究结果显示在慢性脑缺血病理模型下AF-XXMD的药代特征发生明显的改变,包括血脑透过率、脑部动态变化、脑部暴露量和脑组织不同部位分布。慢性脑缺血大鼠灌胃给予AF-XXMD后最主要的化合物是黄酮和色原酮类化合物,而脑部最主要的化合物为色原酮和生物碱类化合物。AF-XXMD对慢性脑缺血的治疗效果与色原酮、黄酮和生物碱类化合物作用于多个靶点和多条代谢通路有关。论文第叁部分以中药复方二仙汤为研究对象,整合中药复方中化合物的识别与鉴定、代谢组学、生物信息学的技术与方法,从中医药治病整体观角度,探索中药体内药效物质基础,包括来源于中药的外源性成分、被中药扰动的机体内源性成分,以及这些成分与药效的关系和其作用机制的研究思路和策略。首先,我们建立了快速识别与鉴定中药复方中未知化合物的新策略。这个新策略能够快速识别候选化合物的结构信息,并为结构鉴定提供有效的线索。这个策略主要包括以下四步:1、建立了 HPLC-HRMSn的中药成分的分析方法,获得高分辨质量数和多级质谱数据,利用MTSF技术,识别潜在化合物并获得其母核信息;2、基于保留时间和高分辨质量数,利用判别分析方法,对潜在化合物按类别进行分类;3、将MTSF技术和判别分析方法获得的潜在化合物的结构母核信息进行匹配,母核信息一致的潜在化合物作为候选化合物进行结构鉴定;4、基于同位素分布数据对鉴定的候选化合物结构进行确证。这个新策略能够在MTSF技术的基础上进一步排除约41%的不相关离子信息,同时还能够提供553个候选化合物的准确结构类型信息,最终鉴定出71个化合物。以鉴定的71个化合物为模板,基于MTSF技术,我们从二仙汤灌胃给药后的大鼠血浆、尿、粪、胆汁中鉴定出13个原型成分和150个代谢物。其次,我们建立了高通量不同官能团类型甾体激素的UHPLC-MS/MS定量分析方法,实现了一份生物样本一次分析中,同时进行羰基和酚羟基甾体激素的衍生化分析。所建立的方法仅需要500 μL血清样本,可在单次运行时间28 min内定量分析20个甾体激素类化合物。该方法首先采用液液萃取技术从生物样本中提取甾体激素,紧接着进行离线的吉拉德P衍生化,然后采用自动化的进样程序自动吸取两次样本:第一次将吉拉德P衍生化的羰基类甾体激素加载到色谱柱上;第二次使甾体激素在进样针中进行丹磺酰氯的在线衍生化反应,反应结束后再将丹磺酰氯衍生化的酚羟基类甾体激素加载到色谱柱上。与此同时,质谱切换阀与进样程序密切配合,以导入衍生化的甾体激素和去除多余的衍生化试剂,而后质谱对导入的两种类型的甾体激素衍生化产物按顺序分别进行分析。方法验证结果表明:线性范围为2～400 pg/mL,相关系数r值均高于0.988,最低定量限范围为2～4 pg/mL,各化合物精密度的相对标准偏差(RSD)值不大于20%,准确度在80～120%之间,完全能够满足生物样本中甾体激素的分析要求。再次,基于脂质组学开展了二仙汤对不同绝经阶段双侧去卵巢大鼠的调节作用研究,设置了假手术组、双侧去卵巢模型组、模型给予二仙汤组和模型给予尼尔雌醇组。将体重、血脂指标(胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和甘油叁酯)和肝脏油红O染色切片检查作为药效学指标,评价二仙汤给药后不同时间点的药效学。在药效学研究的同时,基于建立的激素、脂质和鞘脂组学分析平台,结合统计学方法,开展脂质代谢组学研究;研究去卵巢大鼠血浆和肝组织紊乱的脂质代谢特征,以及二仙汤干预后不同绝经阶段去卵巢大鼠血浆和肝组织紊乱的脂质代谢特征,基于脂质合成与代谢通路,系统诠释了二仙汤调节脂代谢紊乱的作用机制,并研究不同绝经阶段病理变化和二仙汤治疗的特点。结果表明,二仙汤能有效调节双侧去卵巢引起的甾体激素和脂质的合成与代谢紊乱,其中以给药后4周发现的能够同时指征双侧去卵巢模型脂代谢紊乱和二仙汤调节作用的潜在生物标志物的数量最多,包括血浆中15种甘油酯、10种磷脂酰甘油酯和4种甾体激素,肝脏中8种甘油酯和10种磷脂酰甘油酯。除此之外,基于不同绝经阶段发现的潜在生物标志物的数量、种类、重复出现的生物标志物等研究,发现二仙汤的调节作用与时间密切相关。最后,基于反向分子对接的方法,对二仙汤进入体内的主要成分进行反向分子对接,筛选出导致代谢通路变化的潜在药效物质,构建与药效相关的内源性代谢物和外源性中药成分之间的关系(物质基础),并采用Western-blot和ELISA方法,验证了二仙汤参与调节血浆和肝脏中甘油叁酯的合成通路,进一步揭示了二仙汤调节双侧去卵巢大鼠脂代谢紊乱的物质基础和作用机制,从而进一步揭示二仙汤的作用机制。
郭巧珍[4]2011年在《液相色谱质谱联用技术在小型家用电器安全和药物代谢方面的应用》文中进行了进一步梳理液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术因其具有高分离能力、高灵敏度、较广的应用范围和较强的专属性等特点,已成为当代一种重要的分离分析技术,它在各个领域的应用不断扩展。本文应用LC-MS技术在挪威PoHS指令新增的小型家用电器中有毒有害物质的检测和药物代谢方面做了以下研究：1.PoHS指令新增的小型家用电器中有毒有害物质的检测方法研究(1)建立了加热回流萃取-超高效液相色谱-串联四极杆质谱检测小型家用电器中六溴环十二烷(HBCD)的方法。实验优化了萃取溶剂、对比了前处理方法、优化了加热回流萃取时间,最终选择较优方法—加热回流萃取法,其提取回收率大于68%。实验以甲苯：甲醇=10：1作为萃取剂,加热回流4小时。萃取出的溶液经N2吹干,初始流动相复溶,涡旋、离心、过膜,经ACQUITYTM UPLC BEH C18色谱柱分离,质谱的多反应监测模式(MRM)进行检测,HBCD的叁种同分异构体在3min内完全分开,该物质的检出限为0.1μg·mL-1,定量限为0.5μg·mL-1,标准曲线的范围为1.6-32.4μg·mL-1,线性相关系数均大于0.996,萃取回收率为68%-75.2%。通过外标法定量,并应用于实际样品的检测。(2)建立了加速溶剂萃取-超高效液相色谱-串联四极杆质谱(ASE-UPLC-MS/MS)检测小型家用电器中双酚A(BPA)、四溴双酚A(TBBPA).全氟辛酸(PFOA)的方法。实验利用正交实验设计法确定了ASE的较优化条件：萃取剂为甲苯：甲醇=10：1,温度100℃,压力1500psi,加热时间5min,静态萃取时间20min,循环3次,N2吹扫时间100s,冲洗体积20%。萃取出的溶液经N2吹干,初始流动相复溶,涡旋、离心、过膜,经ACQUITYTM UPLC BEH C18色谱柱分离,叁种物质在3min内完全分开,BPA、TBBA、PFOA的检出限分别为0.1、10、1ng·mL-1,定量限分别为0.5、50、5ng·mL-1,标准曲线的范围分别为1-100ng·mL-1、0.1-10μgmL-1、10-1000ng·mL-1,线性相关系数均大于0.996,通过外标法定量,BPA、TBBPA和PFOA的回收率分别为84%-92%、76%-82%和72%-74%,相对标准偏差均小于5%。实验方法和结果均用岛津的离子阱-飞行时间高分辨质谱(LC-IT-TOF)仪器进行了验证,通过验证实验进一步证实了该方法具有可行性。并用该法对实际11种样品进行了检测。2.人体血清中丁丙诺啡、诺丁丙诺啡、纳洛酮叁种药物的检测方法建立及药片中丁丙诺啡和纳洛酮药物的含量测定实验建立了同时检测丁丙诺啡(BP)、诺丁丙诺啡(NBP)、纳洛酮(NLX)的UPLC-MS/MS方法,并对其方法学进行了全面考察。利用固相萃取的方法对血清中BP、NBP、NLX叁种物质进行分离富集,用内标法定量。实验采用Oasis MCX(?)固相萃取柱分离富集,0.1%的盐酸水溶液淋洗除去杂质,再用1mL5%的氨化甲醇洗脱目标化合物,将洗脱下来的溶液经N2吹干,用1mL初始流动相复溶,涡旋、离心、过膜,经ACQUITYTM UPLC BEH C18色谱柱分离,用电喷雾质谱的MRM模式进行检测,叁种物质在4.5min之内达到完全分离。BP, NBP, NLX的标准曲线范围分别为0.1-25、0.25-25、0.05-25ng·mL-1,而且线性相关系数R均大于0.9948,回收率在97.6%-109.2%之间,BP,NBP,NLX的检出限分别为：0.02,0.10.01ng·mL-1,定量限分别为0.05,0.2,0.025ng·mL-1且RSD≤25%,实验按照国家食品药品监督管理局(SFDA)的规定对该方法学进行了严格的确证,包括方法的特异性、基质效应、标准曲线、检出限和定量限、准确度和精密度、日间和日内的RSD、储备液的稳定性、血清的稳定性等方面确证。同时实验还建立了BP、NLX的UPLC-UV的检测方法,并检测了实际药片中这两种物质的含量,判断盐酸丁丙诺啡舌下含片是否合格。
金薇[5]2009年在《液相分离及联用技术在药物分析和化妆品中限用禁用物质分析中的应用研究》文中指出液相分离方法中最为成熟和有效的方法当属高效液相色谱和毛细管电泳。高效液相色谱法(High Performance Liqui Chromatography,HPLC)作为一种发展较为成熟的分析技术,以其分离效率,稳定性,重复性等特点在药物分析包括化妆品中限用禁用药物的分析方面发挥着重要的作用。而毛细管电泳(CapillaryElectrophoresis,CE)是近二十年来发展较快的分析分离技术之一,具有分离效率高、分析速度快、所需样品少等特点,应用范围广。在绪论中概述了两种分析技术发展的历史、现状以及发展趋势,对两种分析技术的基本原理和特点进行了简单介绍,并介绍了近年来两种分析检测技术在药物分析、药品质量控制、化妆品中限用禁用药物安全性控制等方面的应用。本论文采用高效液相色谱法(HPLC)-电化学检测(ECD)联用技术对药物的杂质进行了分离测定,比较了HPLC-ECD和HPLC-UV的区别。分别采用快速液相色谱法(RRLC)-光电二极管阵列检测器(DAD)联用技术,高效毛细管电泳(HPCE)-电化学检测(ECD)联用技术,高效液相色谱法(HPLC)-串联质谱检测(MS/MS)联用技术测定了化妆品中的限用禁用药物,主要内容如下:1.甲氨蝶呤注射液含量及有关物质的HPLC-ECD法分离测定研究以乙腈-0.2mol·L~(-1)磷酸盐缓冲液(pH6.0)(10∶90)为流动相,采用TSK-GELODS-100SP色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流速为1.0mL·min~(-1),柱温35℃时,在+0.8V电位处,以玻碳圆盘电极为工作电极,银-氯化银电极为参比电极,建立了以高效液相色谱电化学检测对甲氨蝶呤及其有关物质进行分离分析的方法。甲氨蝶呤的线性范围为9.1-91μg·mL~(-1),r=0.9999;平均回收率为100.4%,RSD为1.0%(n=9)。氨蝶呤、甲蝶呤和甲氨蝶呤的最低检出量分别为3.3、11和8.6ng。电化学安培检测与紫外检测相比,具有较高的灵敏度,能有效地应用于甲氨蝶呤注射液中甲氨蝶呤含量以及极微量有关物质的检测。2.替尼泊苷注射液含量及有关物质的HPLC-ECD法分离检测研究建立以高效液相色谱电化学检测对替尼泊苷及其有关物质进行分离分析的方法。以PhenomenexR LUNA Phenyl-Hexyl柱,以乙腈-水(38∶62)为流动相,流速为1.0mL.min~(-1),玻碳圆盘电极为工作电极,银-氯化银电极为参比电极,在+0.7V电位处,实现了替尼泊苷及其有关物质与注射液中各种赋形剂的分离分析。木酚素、替尼泊苷、α-亚乙基木酚素P和苦亚乙基木酚素P分别在0.1-9.6μg.mL~(-1),0.1-9.0μg.mL~(-1),0.1-5.8μg.mL~(-1)和0.1-7.2μg.mL~(-1)浓度范围内呈良好线性,检测限(LOD,S/N=3)分别为0.2ng,1.1ng,1.0ng和0.7ng。电化学安培检测与紫外检测相比,具有较高的灵敏度和选择性,能有效地应用于替尼泊苷注射液中有关物质的检测和含量的测定。3.恩他卡朋含量及有关物质的HPLC-ECD法分离测定研究建立以高效液相色谱-电化学检测对恩他卡朋及其有关物质(z-异构体和3,4-二羟基-5-硝基苯甲醛)进行分离分析的方法。采用苯基柱,以甲醇-磷酸盐缓冲溶液(pH 2.1)(46∶54)为流动相,玻碳圆盘电极为工作电极,银-氯化银电极为参比电极,在+0.65V工作电位处,实现了恩他卡朋及其有关物质的分离分析。恩他卡朋在0.06～38.6μg mL~(-1)、z-异构体在0.06～42.5μg mL~(-1)、3,4-二羟基-5-硝基苯甲醛在0.06～27.5μg mL~(-1)浓度范围内线性关系良好,检测限分别为0.05、0.06和0.03ng。恩他卡朋的平均回收率为99.9%,RSD为1.5%。电化学安培检测具有较高的灵敏度和选择性,能有效地应用于恩他卡朋原料和片剂中有关物质的检测和片剂含量的测定。4.胶束毛细管电泳安培检测法分离测定化妆品中限用禁用酚类化合物采用毛细管电泳-电化学检测技术(CE-ECD)同时测定了化妆品中限用禁用酚类化合物。考察了工作电极的氧化电位、运行缓冲液的酸度和浓度、分离电压、进样时间等因素对分离和检测的影响。在优化条件下,以直径300μm的碳圆盘电极为工作电极,工作电位为+0.80 V(vs.SCE),在40 mmol L~(-1)pH9.0的H_3BO_3-Na_2B_4O_7缓冲液(含10 mmol L~(-1) SDS)中,上述组分实现了较好分离。被测物浓度与峰电流在叁个数量级范围内呈良好线性关系,检测限在4.09×10~(-8)g.mL~(-1)到4.50×10~(-7)g.mL~(-1)之间,该方法简单可靠,已成功应用于不同化妆品中限用禁用酚类化合物的测定,是一种有效的化妆品安全分析检测方法。5.RPLC-DAD法分离测定化妆品中抗生素建立了祛痘除螨类化妆品中8种抗生素及甲硝唑同时测定的快速高效液相色谱分析方法。以Agielent1200快速高效液相色谱,采用SB和XDB-C18(1.8μm,4.6mm i.d.×50 mm)色谱柱,0.1 mol L~(-1)磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH为2.5)-乙腈为流动相进行梯度洗脱,在7分钟内首次实现了8种抗生素及甲硝唑的同时分离测定,常规液相色谱分离至少需要30分钟才能完成一次分析。在4～100μg.mL~(-1)线性范围内,9种物质的线性相关系数均＞0.9999,最低检出限为0.25～1.4ng。在低中高叁个添加水平,9种物质的平均回收率为92.2%～103.2%,相对标准偏差为0.04%～4.5%。并考察了不同状态的化妆品样品的提取方式。该法操作简便、准确、快速,能够检测祛痘除螨类化妆品中8种抗生素以及甲硝唑的含量。6.HPLC-MS/MS测定化妆品中丙烯酰胺残留单体采用高效液相色谱-串联质谱,Atlantis C18色谱柱(2.1×150 mm,3μm),以0.1%甲酸溶液-0.1%甲酸甲醇溶液(98∶2)为流动相A,0.1%甲酸甲醇溶液为流动相B进行梯度洗脱。添加同位素内标~(13)C3-丙烯酰胺于样品中,经0.1%甲酸溶液提取,石油醚液液萃取净化,串联质谱多反应监测模式,以保留时间及质谱图定性,以峰高或峰面积进行定量,测定化妆品中丙烯酰胺单体残留量。采用本方法的检出限为0.01 ng,最低检出浓度为0.01mg/Kg。方法适用于化妆品中丙烯酰胺单体残留量的测定,方法灵敏度高、重现性好。
陈跃[6]2009年在《农产品和药用植物及其提取物中农药残留分析方法的建立》文中提出气相色谱-质谱联用和超高效液相色谱-串联质谱联用技术是目前农药残留检测领域内常见的检测方法,色质联用技术既能对农药进行准确的定性又能准确定量,对基质干扰造成的假阳性样品能进行有效的鉴别,尤其在采用了串联质谱的条件下更能有效的降低样品基质的干扰,提高分析灵敏度。基于色质联用技术以上优点,本文进行了以下的研究:1.应用气相色谱质谱联用仪(GC/MS)建立了水果、蔬菜、粮谷等农产品中8种种衣剂农药残留的分析测定方法。样品用乙腈提取,通过石墨化碳黑或C_(18)固相萃取小柱净化,经DB-5ms气相色谱柱分离,正电子电离(EI~+)、选择离子监测模式(SIM)对定量离子和定性离子进行MS测定。标准工作曲线范围在0.02～0.5mg/L之间。样品中添加水平为0.005、0.010和0.020mg/kg时,回收率在63.93%～112.46%之间;相对标准偏差小于15%。定量限为0.005mg/kg。2.应用超高效液相色谱串联质谱联用(UPLC/MS-MS)技术,建立了高灵敏、快速的同时检测农产品中8种种衣剂农药残留量的方法。样品经甲醇:水(1+1,V/V)提取后,无需经过任何净化过程;以梯度流动相洗脱、经ACQUITY UPLC C_(18)超高效液相色谱柱分离;电喷雾正离子(ESI~+)、多反应监测模式(MRM)对定量离子和定性离子进行MS-MS测定。8种种衣剂农药在0.001～0.20mg/L范围内线性关系良好(r≥0.997)。添加浓度为0.006～1.2mg/kg时,回收率在60%～110%之间;相对标准偏差小于10%,方法检测限为0.0005～0.002mg/kg。该方法仅需约两分钟的检测时间,而且灵敏、准确,适合于水果、蔬菜、粮谷等农产品中种衣剂农药残留量的快速、高灵敏检测分析。3.研究了气相色谱火焰光度检测器(GC/FPD)定量和气相色谱离子阱质谱(GC/ITMS)定性法测定药用植物中25种有机磷类农药残留的分析方法。方法以丙酮为提取溶剂,采用超声波辅助提取药用植物中残留的有机磷农药,经凝胶渗透色谱法(GPC)净化,气相色谱火焰光度检测器定量,气相色谱.离子阱质谱定性,同时检测药用植物中25种有机磷类农药的残留量,取得了较好的效果。添加浓度介于0.01～0.04mg/kg时的回收率范围介于66.58%～111.20%之间,相对标准偏差介于0.75%～8.07%之间。4.应用气相色谱离子阱质谱(GC/ITMS)建立了川芎等8种药用植物及其提取物中101种农药残留的检测方法。样品经乙腈提取,凝胶渗透色谱(GPC)净化,采用气相色谱离子阱检测器检测,101种农药分2次检测,提高了农药检测的灵敏度。101种农药标准工作曲线范围在0.02～0.5mg/L之间,样品添加水平介于0.01～0.4mg/kg之间时绝大多数农药回收率范围在70%～110%之间。适用于药用植物及其提取物中101种农药残留的检测。
刘洪美[7]2016年在《巴戟天中多农药残留检测及防霉变储藏规范研究》文中指出巴戟天(Morinda officinalis)为茜草科(Rubiaceae)巴戟天(Morinda officinalis How.)的干燥根,是我国着名的四大南药之一,同时具有“药用”和“保健”功能,已被开发制成多种保健食品。近年来,随着“大健康时代”的到来,一直作为传统中药的巴戟天呈现了较好的应用和开发前景,其有效性和安全性也成为人们普遍关注的议题。巴戟天在热带和亚热带地区种植和生长需要使用农药来控制病虫害以提高药材产量,而巴戟天的生长年限较长(一般5-7年),易导致农药在植物体内蓄积和残留,影响药材的品质、危害使用者的身体健康。此外,由于在温暖、潮湿的环境中直接与土壤接触五至七年,巴戟天在生长、加工和后期储藏、运输过程中极易污染多种真菌,发生霉变变质和多种真菌毒素残留,严重影响药材的质量、有效性和安全性。本论文首先建立了简便、可靠、灵敏的分析方法用于巴戟天中农药和真菌毒素多残留及多种化学成分的高通量快速检测,以全面、系统地综合评价药材的质量和安全性；然后,综合运用真菌学、化学和分析化学等多学科技术手段并借助响应面分析-中心组合设计法研究产毒菌株在巴戟天药材上的生长情况和真菌毒素的累积规律及药材主要化学成分的含量变化,进而初步总结巴戟天药材的储藏规范,以期为巴戟天的科学合理养护、保障药材的质量和有效性、安全性提供理论依据及数据支持,主要研究内容如下：1、改良的QuEChERS技术结合GC-FPD法同时检测巴戟天中有机磷农药残留通过对样品前处理各条件的优化,建立了用乙腈-水(9：1,v/v)提取,采用PSA和GCB净化样品的前处理方法,运用气相色谱-火焰光度法(GC-FPD)快速测定40批巴戟天样品中30种有机磷农药残留。结果发现,两批(5%)来源于同一产地的巴戟天样品检出有机磷农药(杀螟松)残留,残留量分别为0.0283 mg/kg和0.0348 mg/kg,均超出了欧盟规定的最大残留量(0.02 mg/kg)。本研究建立的方法快速、准确、检出限低、灵敏度高、重现性好,为其他根茎类药材中农药残留检测提供了参考。2、建立ASE/MSPD-GC-ECD法同时检测巴戟天中有机氯和拟除虫菊醋类农药残留通过正交设计对萃取温度、萃取溶剂和净化剂弗罗里硅土的量进行考察,以优化加速溶剂萃取辅助的基质固相分散萃取(ASE/MSPD)提取有机氯和拟除虫菊酯类农药的条件,萃取和净化一步完成,结合气相色谱-电子捕获检测器(GC-ECD)同时定性定量测定33种有机氯农药和9种拟除虫菊酯类农药的污染水平。结果发现,3批样品中检测到4种农药残留(β-硫丹、四氯硝基苯、六氯苯和α-六六六),但污染水平均低于欧盟规定的最大残留限量。本方法操作简单、快速、自动化程度高、重复性好,可扩展用于其他复杂基质中的有机氯和拟除虫菊酯类农药的检测。3、建立超高效液相色谱-质谱联用法(UFLC-MS/MS)同时检测巴戟天中多种真菌毒素的污染水平以甲醇-水(均含0.1%甲酸)(80：20,v/v)溶液为溶剂,采用一步提取法制备样品,通过色谱和质谱参数的优化,建立基于编程的多反应监测模式(MRM)的UFLC-MS/MS法同时定性、定量检测巴戟天中11种真菌毒素。结果发现,2批巴戟天样品中检测出5种真菌毒素,污染水平均低于欧盟规定的最大残留量。该方法灵敏度高、选择性和重复性好、回收率较高、检测速度快,适用于复杂基质巴戟天药材中多种真菌毒素的快速分析与筛查。4、采用HPLC-DAD法测定巴戟天中环烯醚萜苷类成分的含量和化学指纹图谱,结合化学计量学技术建立药材的质量控制新模式采用超声提取法制备样品,结合高效液相色谱-二极管陈列检测器(HPLC-DAD)对巴戟天中两种主要环烯醚萜苷进行含量测定,并建立40批巴戟天样品的指纹图谱,不仅能够实现对指标成分的定量测定,亦能获得不同批次样品间丰富的化学信息。然后,利用化学计量学方法(相似度分析(SA)、聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA))对实验数据进行解析,旨在全面地反映巴戟天的质量,为该药材的质量控制提供研究基础。5、采用响应面中心组合设计法(RSM-CCD法),结合“反式”培养模式考察巴戟天药材最佳的储藏条件,为初步制定其储藏规范提供依据选取黄曲霉毒素的主要产毒菌株Asp. flavus 3.4410为模式菌,将已灭菌的巴戟天药材浸染该菌株后,于不同温湿度环境下储藏进行“反式”培养。采用HPLC-DAD法和UFLC-MS/MS法分别测定样品中环烯醚萜苷类成分和4种黄曲霉毒素(AFB1, AFB2, AFG1和AFG2)的含量变化。经响应面中心组合设计法(RSM-CCD法)优化后考察该菌株在药材上的生长情况、药材主要化学成分的含量变化及黄曲霉毒素的累积规律及其与储藏环境的温度和湿度条件的关系,探讨巴戟天不易霉变产毒的最佳环境条件,以期为巴戟天的科学合理养护、保障药材的质量和安全性、有效性提供理论依据和数据支撑。
黄兰芳[8]2004年在《联用色谱在中药和生物样本中活性成分的分析方法及其应用研究》文中认为现代分析仪器提供了大量而又丰富的量测信息,特别是气相色谱与质谱,高效液相色谱与二极管阵列,高效液相色谱与质谱等联用仪的发展,它们将色谱的分离能力与光谱的表征能力相结合,借助新的分析理论和技术,为生物学、生命科学、药物学、环境科学等学科分析问题的解决提供了强有力的工具和手段。高维数据解析方法的发展使人们对复杂化学体系分析能力有了很大的提高,使得传统分析化学难以处理的“黑色”体系的分析成为可能。本论文从当前化学学科发展现状出发,从色谱和质谱联用仪器入手,目的是通过有效利用色谱和质谱提供的联合信息,建立中药和生物体液中活性成分的分析方法,从而实现对中药和生物体液等复杂体系的定性和定量分析。论文主要涉及叁个方面:联用色谱在中药实际体系的分析,高效液相色谱与二极管阵列和质谱联用法用于中药活性成分的分析方法及其应用研究和高效液相色谱与二极管阵列和质谱联用法用于生物体液中活性成分的分析及其应用研究。 一.联用色谱在中药实际体系的分析(第二章—第叁章):用化学计量学多元分辨方法和相关化学计量学方法,对中草药活性成分进行定性和定量分析;利用联用色谱提供的色谱和光谱(质谱)信息,以建立色谱指纹图谱。第二章用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)分离和检测当归根挥发油,用子窗口因子分析法(SFA)
陈孝武[9]2011年在《液相色谱—质谱联用技术在食品安全分析中的应用》文中认为食品是供人类食用或饮用的基本物质,是人类赖以生存的物质前提。随着社会的发展,食品多样化的出现,食品安全问题也越发严重和复杂,因此食品安全问题也成为我国内以及国际上社会关注的热点问题。目前由于仪器的分离度及灵敏度的限制,食品中性质相近的类似物、含量超低的痕量成分以及多成分的分离检测是目前食品检测的难点。液相色谱-质谱联用技术利用色谱的高分离度和质谱的高灵敏度,使其同时具有高分离度及灵敏度,成为当今最重要的食品分析方法之一。本文针对目前食品安全检测的难点,利用液-质联用技术开展了以下叁个方面的食品安全分析检测研究：1、研究建立了高效液相色谱-质谱联用技术测定核桃油中的19种游离氨基酸的方法,核桃油中共检出了11种氨基酸,其中Ser和Arg含量最高,分别为1.6μg/mL和1.1μg/mL。该方法未经衍生化,简单、快速,可实现氨基酸的快速高通量分析。2、研究建立了高效液相色谱-质谱联用技术检测河豚鱼提取物中的河豚毒素及其类似物的方法,采用不加校正因子的主成分自身对照法定量,只需要主成分TTX的标准品而不需要其他类似物的标准品即可对所有的物质定量分析。结果显示,样品中共检出四种TTX类似物总含量为7.46%。该方法简单、快速、准确、可靠,为河豚毒素及其类似物的快速分析检测提供一种新的方法参考。3、研究建立了超高效液相色谱-质谱联用技术结合代谢组学方法对河豚毒素中毒机理研究,对高浓度TTX处理的SK-N-SH细胞及对照组细胞进行代谢组学分析,利用主成分分析方法找出与中毒相关的潜在的生物标记物,通过二级质谱与代谢组学数据库的比对及标准品的确证,鉴定出生物标记物的结构,从小分子水平解释河豚毒素的中毒机理。该方法为TTX的安全性评价提供方法参考。
辛丹敏[10]2009年在《高效液相色谱法在食品分析和药物分析中的应用研究》文中研究说明化学发光(Chemiluminescence,简称CL)是化学反应的反应物或生成物吸收了反应释放的化学能,电子由基态跃迁至激发态,再由激发态返回基态时所产生的光辐射。根据化学发光反应在某一时刻的发光强度或发光总量来确定反应中相应组分含量的分析方法叫化学发光分析法。化学发光分析法具有灵敏度高、仪器设备简单、线性范围宽、分析速度快以及不需要外加光源和单色器、没有散射光等干扰、以及容易实现自动化等优点,但选择性差。液相色谱,尤其是高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC),以其高效、高速和高分辨力等特征给人们留下了深刻的印象。高灵敏度的化学发光检测手段与高分辨力的高效液相色谱法结合于一体,成为一种理想的分离分析方法,两种方法能取长补短,充分发挥各自优势。毫无疑问,高效液相色谱分离技术与化学发光检测器的联用将被广泛应用于生物工程、食品工业、环境检测等领域。本文包括两个部分。第一部分是综述,这部分结合化学发光分析法,评述了近年来高效液相色谱及其与化学发光联用技术在食品分析和药物分析中的应用。第二部分是研究报告。第一节是高效液相色谱及其与化学发光柱后检测联用技术在食品分析中的应用。首先,研究了反式白藜芦醇和高锰酸钾—硫代硫酸钠—多聚磷酸的高效液相色谱—化学发光体系的发光行为,摸索出反式白藜芦醇的分离分析方法,并成功应用于葡萄不同部位中反式白藜芦醇的快速灵敏的分析测定。其次,研究了咪唑类药物,四环素类及氯霉素药物的HPLC方法,并应用于奶粉中咪唑类药物残留和猪肝中四环素类及抗生素药物残留的测定,结果令人满意。第二节是高效液相色谱技术在药物分析中的应用。在C_(18)反相色谱柱,UV—VIS检测器下,同时首次测定了田七痛经胶囊中的延胡索乙素和阿魏酸。1.反式白藜芦醇的高效液相色谱化学发光检测法研究本文研究发现,反式白藜芦醇在酸性条件下能大大增强KMnO_4-Na_2S_2O_3化学发光强度,基于此,并结合HPLC分离技术,建立起反式白藜芦醇的HPLC-CL分析新方法。在C_(18)反相键合相色谱柱,乙醇:0.05%醋酸(25:75,v/v)为流动相的条件下,实现了对葡萄不同部位中反式白藜芦醇的分离与测定,方法的线性范围为0.01～20μg/mL,相关系数为r=0.9996,检出限为0.03μg/mL,RSD为2.1%(n=6)。实验表明该法快速、简单、准确度高,适用于反式白藜芦醇的测定。2.基质固相分散.高效液相色谱分析奶粉中残留的左旋咪唑和甲苯咪唑采用基质固相分散的提取方法,建立了快速、灵敏的反相高效液相色谱法测定了奶粉中左旋咪唑和甲苯咪唑残留的含量。采用岛津SPD-20A检测器,HypersilC_(18)(4.6mm×150mm,5.0μm)色谱柱,流动相为CH_3OH-KH_2PO_4溶液,等度洗脱,柱温为室温时于230 nm波长处以外标法测定。结果表明左旋咪唑和甲苯咪唑分别在0.18～0.90μg/mL和0.12～0.60μg/mL浓度范围内线性关系良好,其检测限分别为0.09μg/mL和0.06μg/mL。方法具有处理简单、检测快速、准确的特点。3.反相高效液相色谱法快速测定猪肝中四环素类抗生素及氯霉素建立了猪肝中土霉素、四环素、金霉素、美他环素、多西环素5种四环素类抗生素及氯霉素多残留的高效液相色谱法。样品经处理后进反相Hypersil C_(18)柱,流动相为CH_3OH-CH_3CN-0.01 mol/L H_2C_2O_4溶液,流速为1.0 mL/min,检测波长为268 nm。结果表明:这6种抗生素在0.04～1.0μg/mL范围内呈线性关系,其检出限为0.02～0.06μg/mL,分析的平均添加回收率为80.00%～116.0%,变异系数为1.30～5.24%。方法具有处理简单、检测快速准确、易用于实际样品的测定。4.反相高效液相色谱法同时测定田七痛经胶囊中延胡索乙素和阿魏酸建立了快速灵敏的高效液相色谱法测定田七痛经胶囊中延胡索乙素和阿魏酸的含量。采用色谱柱为Hypersil C_(18)柱,流动相为甲醇-0.002 mol/L KH_2PO_4溶液,室温下于288 nm波长处检测。延胡索乙素和阿魏酸在0.13～1.29μg和0.08～0.80μg时线性良好,平均回收率分别为97.96%和98.47%,RSD分别为1.3%和1.1%(n=5)。该法简便、快速、有效、重现性好,可以为田七痛经胶囊的质量控制提供科学依据。
参考文献：
[1]. 血浆中微量多组分药物的液相色谱—串联质谱法定量分析[D]. 杨汉煜. 沈阳药科大学. 2001
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[3]. 中药多成分药代动力学的新方法和策略研究[D]. 王彩虹. 北京协和医学院. 2017
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[5]. 液相分离及联用技术在药物分析和化妆品中限用禁用物质分析中的应用研究[D]. 金薇. 华东师范大学. 2009
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[7]. 巴戟天中多农药残留检测及防霉变储藏规范研究[D]. 刘洪美. 北京协和医学院. 2016
[8]. 联用色谱在中药和生物样本中活性成分的分析方法及其应用研究[D]. 黄兰芳. 中南大学. 2004
[9]. 液相色谱—质谱联用技术在食品安全分析中的应用[D]. 陈孝武. 郑州大学. 2011
[10]. 高效液相色谱法在食品分析和药物分析中的应用研究[D]. 辛丹敏. 西南大学. 2009
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