邵阳市食品药品检验所 湖南邵阳 430500
摘要：目的：研究测定酮洛芬凝胶中的药物含量的有效方法。方法：选择2014年采购的两批酮洛芬凝胶药物，采用反相高效液相层析法（RP-HPLC），使用高效液相色谱仪对酮洛芬凝胶中的药物含量进行分析，研究两批酮洛芬凝胶药物中酮洛芬的含量。结果：酮洛芬的浓度范围在0.547-6.635g/mL（r=0.996，n=6）呈现良好的线性关系，平均回收率为99.28%，主峰面积的相对标准偏差（RSD）为1.37%，结果有统计学意义（P<0.05）。结论：测定酮洛芬凝胶中的药物含量采用RP-HPLC法的检测效果准确、操作简单快捷并且灵敏度极高，是测定酮洛芬含量的有效方法。
关键词：RP-HPLC法；酮洛芬凝胶；药物含量
酮洛芬又名酮基布洛芬，是一种2-芳基丙酸非甾体抗炎药，具有抗炎、镇痛和解热的作用，局部治疗由风湿或外伤引起的关节、肌腱、韧带和肌肉的疼痛、炎症和创伤[1]。本研究针对2014年采购的两批酮洛芬凝胶药物，通过进行精密度、重复性、稳定性及回收率等试验，测定酮洛芬凝胶中的药物含量。
1 数据和方法
1.1 一般数据 本研究选择2014年采购的酮洛芬凝胶药物，采用液相色谱仪LC-500系列；酮洛芬凝胶（H20040043，美纳里尼制药联合股份有限公司生产和我院自制的药品）；色谱纯采用乙腈（广州化学试剂一厂生产），分析纯采用KH2PO4（天津市博迪华工有限公司生产），其它药物都作为分析纯。
1.2 方法
1.2.1配制酮洛芬溶液（1）配制样品溶液：取美纳里尼制药厂的美洛芬凝胶0.32g，加入色谱纯乙腈在100mL量瓶中稀释，再进行离心处理，使用离心速度12000r/min，离心15min，静置10min取上层溶液，滤过后备用。（2）配制测定溶液：取我院自制酮洛芬凝胶5mg，加入色谱纯乙腈在100mL量瓶中稀释，配制成1g/L的稀释溶液，避光保存。
1.2.2 色谱试验条件 用ODS反向硅胶柱作为填充剂，选用Agilent C18（200mm×4.6mm，5g）作为色谱柱，乙腈（50：50）-浓度0.01mol/L的KH2PO4（pH值为3.2）作为流动相，流速控制在1.0ml/min，检测波长为255nm，进样量10l，柱温35C为室温。
1.2.3线性关系试验 首先，取酮洛芬50mg，用乙腈- KH2PO4流动相在250mL的量杯中稀释，稀释成浓度为2mg/L的酮洛芬溶液。然后，量取酮洛芬1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL，在10mL的量杯中用流动相进行稀释，稀释至一定刻度。之后，取6份10l稀释溶液，采用液相色谱仪LC-500系列进行色谱分析，记录色谱图样。第四，绘制标准曲线图，以色谱峰面积和进样量为纵坐标和横坐标，进行线性回归分析，见表1。
1.2.5精密度试验 本研究的实验人员分为三组，分别在3d时间里配制酮洛芬溶液一份，并且每组取样2次；每组人员分别取10l稀释溶液，采用液相色谱仪LC-500系列进行色谱分析，记录色谱图样，计算酮洛芬溶液各峰面积相对标准误差，见表3。
1.2.6重复性试验 重复取10l稀释溶液6次，都采用液相色谱仪LC-500系列进行色谱分析，记录色谱图样，计算酮洛芬溶液各峰面积相对标准误差。结果显示RSD为1.35%，证明试验重复性符合标准，见表4。
表4 酮洛芬凝胶重复性试验数据
1.2.7回收率试验 取含量相同的酮洛芬6份，分别加入1.0g的空白基质，再注入25mL的量杯中加入流动相稀释成浓度为0.1mg/mL的溶液，取10l稀释溶液，采用液相色谱仪LC-500系列进行色谱分析，记录色谱图样，计算回收率。
1.2.8药品含量测定步骤 取酮洛芬30mg放入50mL的烧杯中，再加入2.5mL的氯化钠溶液，持续搅拌至分散、稀疏；再加入一定量的流动相，待酮洛芬成团后，再用流动相洗涤残留物，分5次洗涤；最后合并洗液，用流动相稀释至刻度，使用离心速度12000r/min，进行离心15min，静置10min取上层溶液，待检测；分别取两种溶液10l稀释溶液，注入液相色谱仪LC-500系列进行色谱分析，记录色谱图样，计算酮洛芬的含量。
1.3 统计学分析 本研究的所有数据采用SPSS 17.0统计学软件进行检验，采用t检验所得计量数据，采用χ²检验回收率等数据，以P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1线性关系结果 通过线性关系试验得到方程Y=3619.8X-71.539（r=0.996，n=6），说明酮洛芬浓度范围在0.547-6.635g/mL（r=0.996，n=5）呈现良好的线性关系，结果有统计学意义（P<0.05）。
2.2稳定性和精密度结果 通过稳定性试验、精密度试验得出RSD值为1.52%、1.24%，证明酮洛芬溶液在8h内稳定，试验精密度符合标准，结果有统计学意义（P<0.05），如图1。
图1 酮洛芬凝胶的色谱图
2.3回收率试验结果 通过回收率试验，得出平均回收率为99.28%，RSD为1.37%，证明本次研究的回收率符合标准，结果有统计学意义（P<0.05），见表5。
2.4测定酮洛芬的药物含量 样品组酮洛芬的含量为99.84%，我院自制酮洛芬组的含量为101.08%，结果有统计学意义（P<0.05）。
3 讨论
酮洛芬是临床使用最多的抗炎镇痛类药物之一，使用方法包括口服酮洛芬和酮洛芬凝胶[2-4]。临床口服酮洛芬可以通过血液循环作用于患处，效果很好，但是头伏酮洛芬容易引发胃肠道不良反应，用药过量可能威胁患者的生命。而酮洛芬凝胶是外用药，取适量本品直接涂抹于皮肤上，轻轻按摩直至吸收，或者使用物力治疗的离子电渗疗法，1-2次/d。酮洛芬凝胶直接作用于患处，不参与血液循环，可以有效避免胃肠道不良反应的发生率，临床治疗效果显著。本研究选择2014年采购的两批酮洛芬凝胶药物，采用RP-HPLC法分析酮洛芬凝胶的药物含量，结果显示酮洛芬的浓度范围在0.547-6.635g/mL（r=0.996，n=6）呈现良好的线性关系，平均回收率为99.28%，RSD为1.37%，药物稳定性持续8h，精密度良好。因此，RP-HPLC法操作简单、灵敏度高、检测结果准确，可作为测定酮洛芬凝胶中药物含量的方法。
综上认为，测定酮洛芬凝胶中的药物含量采用RP-HPLC法的检测效果准确、操作简单快捷并且灵敏度极高，是测定酮洛芬含量的有效方法。
参考文献：
[1]石莉，张晶，李乐，沙延淳，邓波，杨祝仁，杨红玉.RP-HPLC法测定酮洛芬凝胶中药物含量[J].实用药物与临床.2014，17（10）：1302-1305.
[2]林鹏，曲有乐.HPLC法测定酮洛芬凝胶剂的含量[J].黑龙江医药科学.2006，29（6）：19-20.
[3]刘静，田大丰，田晓琳，莫凤奎，王中彦.HPLC法测定酮洛芬在大鼠血浆中的浓度[J].现代生物医学进展.2009，9（12）：2339-2341.
[4]李娟.高效液相色谱法测定酮洛芬肠溶胶囊和搽剂的含量[J].中国医院药学杂志.2010，30（9）：798-800.
论文作者:唐湘伟
论文发表刊物:《健康世界》2015年1期
论文发表时间:2015/9/17
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