邵阳市中心医院 湖南邵阳 422000
【摘 要】目的 探讨自体骨髓间充质干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的疗效和安全性。方法 收集2012年至2017年本院住院的失代偿期肝硬化患者127例，其中62例患者在内科保守治疗的基础上给予自体骨髓间充质干细胞移植作为移植组；另外65例进行内科保守治疗的患者作为对照组，观察治疗3月、12月、36月患者的临床症状体征、肝功能及凝血功能等指标，分析两组患者的疗效。结果：治疗后所有患者症状体征均有不同程度改善；至治疗后6月肝功指标均较治疗前有明显改善，移植组肝功能与对照组相比，差异有显著性意义（P < 0.05）；至治疗后12月及36月，两组患者肝功指标较治疗前仍均有显著改善（P < 0.05），且在同一时间段两组相比，各项指标差异均有显著性意义（P< 0.05）。结论 自体骨髓间充质干细胞移植治疗失代偿期肝硬化疗效明显、安全性好，值得临床推广。
【关键词】骨髓间充质干细胞；移植；失代偿期肝硬化
Medium and long term clinical efficacy of autologous bone marrow stem cells in treatment of decompensated cirrhosis LiNa
[Abstract] Objective To investigate the therapeutic efficacy and safety of autologous transplantation of bone marrow derived mesenchymal stem cells in treatment of decompensated cirrhosis. Methods Total of 127 inpatients with decompensated cirrhosis in our hospital were selected between 2012 and 2017. Patients in transplantation group（62cases）were treated with autologous transplantation of bone marrow derived mesenchymal stem cells on the basis of conservative treatment of internal medicine，and patients in control group（65cases）were only given conservative treatment of internal medicine. The postoperative symptoms，signs and blood biochemistry after 6 months、12 months and 36 months of treatment were observed，and the clinical efficacy of two groups were compared. Results After treatment，all patients’symptoms were improved to varying degrees. 6 months of treatment，the liver functional indexes were all significantly improved compared with before treatment，the liver functional indexes in transplantation group were significantly ameliorated compared with control group（P<0.05）. At 12 and 36 months of treatment，the liver functional indexes in control group and transplantation group showed statistically significant differences compared with before treatment（P<0.05）. At the same time point，all the indicators in the transplantation group were significantly ameliorated compared with control group（P<0.05）. Conclusion The effects and safety of autologous transplantation of bone marrow derived mesenchymal stem cells in treatment of decompensated cirrhosis is obvious and is worthy of clinical application.
[Keyword] bone marrow stem cells；transplantation；decompensated cirrhosis
肝硬化是临床上常见的一种由各种病因引起的、以肝脏弥漫纤维化、再生结节和假小叶形成为特征的慢性疾病。目前在临床上失代偿期肝硬化缺乏特异的治疗方法，主要以保肝对症及预防并发症为主，总体治疗效果不理想，尤其是终末期肝硬化的疗效更差。肝移植是终末期肝硬化治疗的有效方法，但是由于肝源短缺、费用昂贵、免疫排斥等问题，临床应用受到限制。近年来，随着干细胞技术的发展和成熟，干细胞移植为中晚期肝硬化的治疗提供了新思路。目前人们研究最多的是骨髓MSC，它属于多能干细胞，在肝脏中经过诱导分化成肝干细胞、肝细胞等，对肝细胞的再生和功能的修复有重要的作用［1-2］。本研究采用患者自体骨髓干细胞作为供体，在体外分离纯化后通过介入的方法移植入患者肝内，使干细胞在肝脏中分化生长为具有功能的肝细胞，并对该治疗方法的临床疗效进行中长期观察，具体如下。
1.资料与方法
1.1 研究对象及纳入排除标准
选择2012年1月至2017年12月在本院消化内科住院的失代偿期慢性乙型肝炎后肝硬化患者127例，诊断符合《病毒性肝炎防治方案》（2010，北京）中失代偿期乙肝肝硬化的诊断标准者[3]。其中男性88例，女性39例，平均年龄（28-75）岁。上述患者治疗前均存在不同程度乏力、纳差、腹胀、胸腹水和下肢浮肿等临床症状和体征，经过影像学（腹部B超或CT、MRI）所有患者可明确诊断为肝硬化，且既往有过食管胃底静脉曲张破裂出血、肝性脑病、腹水等并发症。所有患者对治疗方案均知情同意，且得到医院伦理委员会批准者。排除其它情况如<18岁及孕妇和哺乳期妇女、有肝脏及其他脏器肿瘤、合并细菌性腹膜炎或其他系统感染者、心、肺、肾等重要脏器功能不全、治疗前化验凝血酶原活动度<20%或有严重出血倾向者。
1.2 方法
1.2.1 分组治疗 按照是否同意进行干细胞移植治疗分为2组。对照组65例行口服核苷类似物抗病毒、保肝、利尿等内科综合治疗，治疗组62例在对照组基础上，给予自体骨髓间充质干细胞经肝动脉移植。
1.2.2 干细胞移植方法 ①术前准备：移植前2天连续给予患者集落刺激因子150μg皮下注射。②骨髓干细胞采集及分离：骨髓抽取在层流手术室进行，选患者双侧髂后上棘为采髓点，常规消毒铺巾局麻后，以18号骨髓穿刺针穿刺，抽取骨髓180-200 mL，以12500U肝素抗凝，然后在本院层流手术室局部百级试验台进行干细胞的体外分离及纯化，采用负筛选法，试剂盒由宁夏中联达生物有限公司提供，严格按照操作步骤进行。采集到细胞计数为3.2×108 /ml～1.6×1010/ml，采用流式细胞仪检测CD34干细胞数为106/ml～109/ml，并将采集到的干细胞用带冰块的保温箱送至介入室，1h内行介入灌注手术。③移植过程：在数字减影血管造影技术（DSA）下采用seldinger技术经股动脉穿刺插管，置管于肝固有动脉进行造影，观察肝内血管情况及有无占位性病变，将待用的细胞悬液约10mL经肝固有动脉缓慢注入；术毕拔管，穿刺点加压包扎后返回病房，穿刺侧下肢固定24h。
1.2.3 主要观察指标 ①临床症状、体征及不良反应；②于治疗前及治疗后3月，12月，36月，60月检测实验室指标：谷丙转氨酶（ALT）、白蛋白（ALB）、总胆红素（TBIL）、凝血酶时间（PT）、凝血酶原活动度（PTA%）。
1.3 统计分析数据以表示，采用配对t 检验和两独立样本的t 检验，所有数据采用SPSS 17.0软件进行分析处理，以P 为差异有统计学意义。
2.结果
2.1两组患者术前一般资料比较 两组患者在性别、年龄差异无显著性意义（P > 0.05），具有可比性。见表1。
2.4不良反应
62例患者骨髓干细胞采集、分离及肝内移植技术成功率为100%，术后低热2例，24h内自行缓解，未发生与移植相关的严重并发症。
3.讨论
骨髓源性干细胞经诱导后产生的肝细胞是可以很好地替代受损肝细胞，进而恢复肝脏的功能。经集落细胞刺激因子预处理的骨髓造血干细胞注入受损的肝脏后，可在肝脏动脉中发现很高比例的骨髓源性的肝细胞，提示某些刺激因子的介入加速了骨髓对肝细胞的诱导过程。由此，在人干细胞提取纯化过程中选择合适的诱导剂，比如集落细胞刺激因子，可促进骨髓干细胞移植后向肝细胞的诱导分化。
国内外的相关研究表明，自体骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化患者效果显著。张善红等[4]通过对48例肝硬化患者行骨髓干细胞治疗，检测术后第2～24周肝功指标及临床症状变化发现，按照肝硬化Child-Pugh分级不同，疗效也有所不同。Levine等 [5]用BM-MSC治疗酒精性肝硬化也取得显著疗效。吴锋等 [6]对17例失代偿期肝炎肝硬化患者在采用内科治疗的基础上加用骨髓干细胞移植，术后患者肝功能及肝纤维化指标均显著改善，疗效较好。此外还有许多研究都证实了自体BM-MSC对失代偿期肝硬化治疗的有效性和安全性 [7-10]。
本研究通过对62例移植组和65例对照组患者随访观察至少3年后得出的结论与上述国内外研究结果有一致性，移植后大多数患者临床症状及体征较治疗前显著好转，肝功指标较治疗前均有显著改善，且维持时间较长，另外移植过程顺利，未见明显不良反应，安全性高；对照组治疗前后各相关指标有差异，但长期观察病情易反复发作，需多次住院治疗，花费大。研究说明骨髓干细胞移植治疗后，患者肝脏的蛋白合成及修复功能改善显著，这些变化特别是血清ALB的升高是一般护肝治疗不可能达到的。另外还发现8例因食管静脉曲张破裂出血的肝功能B级肝硬化患者进行自体骨髓干细胞移植治疗，随访近5年显示患者自觉症状良好，肝功能正常，食管静脉曲张复发速度延缓，说明对肝功能分级尚可的患者进行自体骨髓干细胞移植延缓了肝硬化失代偿过程并降低了门脉高压，但是标本量太少，且为单中心研究，需要多中心及大样本进一步观察及证实。对于部分终末期肝硬化患者进行自体移植，无明显效果，且于术后6、8个月因肝肾综合征及肝性脑病死亡。因此肝硬化患者进行自体干细胞移植，有条件的话应早手术，不能等到终末期才进行。
综上所述，在当今肝移植供体紧缺的情况下，骨髓干细胞移植作为一种新的治疗失代偿期肝硬化手段，虽不能给患者带来治愈性的效果，但可以在很大程度上控制肝硬化的进展，提高肝硬化患者的生存质量，并可以减少患者的经济费用，是在药物及原位肝移植治疗之外可供选择的治疗方案，值得临床进一步研究、推广。
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论文作者:李娜
论文发表刊物:《中国结合医学杂志》2019年7期
论文发表时间:2019/9/4
标签：干细胞论文; 肝硬化论文; 骨髓论文; 患者论文; 自体论文; 肝脏论文; 疗效论文; 《中国结合医学杂志》2019年7期论文;