【摘 要】目的：在测定连翘叶中连翘苷与连翘酯苷A含量时采取高效液相色谱法进行同时测定。方法：流动相是甲醇-0.11%磷酸溶液（32：68），色谱柱是Agilent Zorbax SB－C18柱，227 nm为流动波长，1.0mL/min为流速，30℃为柱温度，10μL为进样量。结果：连翘酯苷A进样量为293.170 ～3664.624ng（r=0.999980），平均回收率98.97%（RSD=1.89%）；连翘苷进样量为333.760~4172.000ng（r=0.999991），平均回收率99.74%（RSD =2.16%）。结论：依据高效液相色谱法对连翘叶中连翘苷与连翘酯苷A含量同时测定具有结果准确、操作简便、专属性强等优势，值得广泛应用。
【关键词】高效液相色谱法；连翘叶；连翘苷；连翘酯苷；含量
连翘是木犀科连翘，属落叶灌木植物，其果常被用作一种中药材，具备消肿散结、清热解毒、疏散风热的作用，尤其是应用在抗病毒、抗菌以及解热中效果更为显著，此外也是临床上用来治疗瘰疬、痈疽、乳痈、风热感冒、丹毒、等的关键药物[1]。在国内山西、河南、山东等地民间不少制成茶叶饮用，被人们当做一种保健的药物。《中华本草》以及《中药大辞典》记载连翘主治心肺积热，具有叶清热解毒之功效。
1 资料与方法
1.1 实验仪器与设备
高效液相色谱仪型号为Agilent 1100，主要有高压四元梯度泵、在线真空脱气机、柱温箱、自动进样器、美国Agilent公司研发的二极管阵列检测器、XW-80A微型旋涡混合仪、JA5003A分析天平仪、KQ-250E型超声波清洗仪。
连翘苷对照品选自中国食品药品检定研究院（对照品批号110821-200610）；连翘酯苷A对照品选自中国食品药品检定研究院（测定用含量为93.2%，对照品批号111810-201102）；色谱纯为甲醇，超纯水为实验用水，其他试剂均为分析纯。选用同一批连翘叶原料加工自制形成连翘叶样品进行晒干、烘干、蒸后烘干、蒸后晒干、炒后烘干、炒后晒干等处理。
1.2 方法
1.2.1 适用性以及色谱条件
流动相是甲醇-0.11%磷酸溶液（32：68），色谱柱是Agilent Zorbax SB－C18柱，227nm为流动波长，1.0mL/min为流速，30℃为柱温度，10μL为进样量。理论研究中发现应该具备不低于5000的连翘酯苷A峰计算量。
1.2.2 制备溶液
精密称取连适量的连翘苷对照品以及连翘酯苷A对照品，分别将其加入到每1mL含80μg、70%甲醇溶液，形成对照溶液。精密称定取0.2g经过四号筛的样品粉末放置在塞锥形瓶中，精密加入50mL、70%甲醇，称定质量，密塞，然后进行15min的超声处理（频率：40kHz，功率：250W），称定放冷后的质量，利用70%甲醇溶液弥补不足质量，摇匀后利用0.22μm滤膜进行滤过，形成供试品溶液。空白对照溶液为70%甲醇溶液。
1.2.3 方法学
精密称取连翘酯苷 A以及连翘酯适量，用70%甲醇进行逐级稀释，测定样品色谱峰面积。以色谱峰浓度为横坐标，峰面积纵坐标，绘制相应的标准曲线，对其实行线性回归分析，计算样品回归方程以便于可以获得准确结果。分别吸取适量连翘苷对照品溶液、连翘酯苷A对照品溶液、空白对照品溶液以及供试品溶液，依据拟订色谱条件对其实施检测，然后分别对实验样品进行精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验。回归方程分别为Y连翘酯=2034.5969X-106008.2670（r=0.999991），Y连翘酯苷A=1281.3706X+42568182（r=0.99999=80）。
2 结果
2.1 加样回收率结果
连翘酯苷A进样量为293.170 ～3664.624ng（r=0。999980），连翘苷进样量为333。760~4172.000ng（r=0.999991），并且都能和对应峰面积表现出良好线性关系，选取相同批次样品10份进行检测，将每份样品精确测定到1.0g，并将样品分别加入到低、中、高三个不同质量浓度的连翘酯苷A以及连翘苷参照样品50mL的70%甲醇溶液，制备供试品溶液需要依法平行进行，通过拟订色谱条件对其进行试样测定，计算回收率。检测结果如下表所示
表1 加样回收率结果
3 讨论
高效液相色谱法（HPLC），也被叫做“高速液相色谱”、、“高压液相色谱”、“近代柱色谱”、“高分离度液相色谱”等[2]。高效液相色谱是重要的色谱法分支，流动相为液体，在装有固定相色谱柱中利用高压输液系统将存在不同比例的缓冲液、混合溶剂[3]，不同极性单一溶剂等流动相进行泵入，在分离柱内各成分后，送入检测器中实施相应检测，以便于能够对试样进行科学的分析。这种检测方式已经得到广泛应用，逐渐发展成为化学、工业、医学、商检、农学、法检等领域中[4]。本次在充分研究2010版本《中国药典》测定连翘含量前提下来进行制备供试品溶液操作。相比较连翘，连翘叶中脂溶性叶绿素含量比较大，所以制备供试品溶液过程中首先考虑是否需要进行脱脂。结果发现不脱脂制备提取供试品溶液之后出现比较深的颜色，影响检测结果，因此在制定供试品溶液中应该先脱脂，后测定[5]。
综上，高效液相色谱法是一种操作方便、方法简单、结果可靠、重复性好、专属性强的可以对连翘叶中连翘苷以及连翘酯苷A成分进行同时测定的有效方式[6]。
参考文献：
[1] 张飞，田粟，吕明霞等.HPLC同时测定连翘花及叶中绿原酸等活性成分的含量[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（9）：103-106.
[2] 姬雪礼，李文烈，郑晓杰等.高效液相色谱法同时测定连翘叶中连翘酯苷A和连翘苷含量[J].中国药业，2014，23（7）：33-34.
[3] 马梅芳，杨晓日，高慧等.不同加工方式连翘叶中连翘酯苷A和连翘苷的含量测定[J].食品与药品，2015，6）：417-421，422.
[4] 杨芮平，禹玉洪，郝东方等.连翘叶中连翘酯苷A和连翘苷的含量测定[C].2013年“好医生杯”中药制剂创新与发展论坛论文集.2013：649-655.
[5] 徐小雯，黄家卫.遗传算法优化连翘中连翘苷及连翘酯苷A的提取工艺[J].浙江中医药大学学报，2016，40（5）：394-399，404.
[6] 魏谭军，陈晓东.高效液相色谱法测定复方西羚解毒丸中4种成分的含量[J].医药导报，2014（12）：1636-1638.
论文作者:罗瑛
论文发表刊物:《航空军医》2017年第1期
论文发表时间:2017/2/27
标签：连翘论文; 溶液论文; 色谱论文; 高效论文; 甲醇论文; 液相论文; 含量论文; 《航空军医》2017年第1期论文;