（青海大学医学院病原生物学教研室 青海 西宁 810001）
【摘 要】目的：观察香菇多糖和阿苯达唑单用及联用治疗小鼠继发性囊型包虫病的疗效，探讨香菇多糖对棘球蚴的作用机理。方法：感染囊型包虫病的实验小鼠被随机分成4组（香菇多糖组、阿苯达唑组、香菇多糖+阿苯达唑组和对照组），用药物治疗三个月后，处死小鼠并解剖，检测各感染小鼠的棘球蚴囊的湿重及抑囊率，电镜观察棘球蚴囊超微结构。结果：香菇多糖和阿苯达唑单用及联用三个月后，棘球蚴生长受到抑制，抑囊率分别为26.83%、21.95%和45.12% ，联合用药组与单独用药组相比有显著性差异（p＜0.01）。电镜观察香菇多糖对小鼠棘球蚴组织损伤严重。结论：香菇多糖对囊型包虫病有治疗效果，香菇多糖与阿苯达唑联用比二者单独使用治疗效果好。
【关键词】囊型包虫病；香菇多糖；阿苯达唑
【中图分类号】R532.32 【文献标识码】A 【文章编号】1004-6194（2015）02-0246-02
囊型包虫病（Cystic echinococcosis，CE）是一种严重人兽共患寄生虫病，[1]。现如今对于人畜包虫病的治疗主要是手术和化学药物治疗，手术容易引起棘球蚴囊破裂而引起过敏反应和种植反应，药物治疗是近几年来兴起的研究课题，目前还处于试验阶段。
当今抗包虫病的首选药物是阿苯达唑（Albendazole，ABZ），但通过国内外信息资料分析，该药的不良反应累及全身多个系统-器官，尤其是脑炎/脱髓鞘脑病、肝脏损害和肝酶升高等，鉴于此，国内外学者一直在试图寻找高效低毒的抗包虫药物[2-6]。本实验选用具有多种药理作用的中药香菇多糖治疗小鼠继发性囊型包虫病，观察香菇多糖对棘球蚴囊的杀伤作用，观察其治疗效果。
1 材料和方法
1.1 原头蚴：取自本市屠宰场病羊的感染组织（主要是肺棘球蚴和肝棘球蚴），在无菌条件下抽出棘球蚴囊液，分离原头蚴，在光学显微镜下观察原头蚴的外观结构并计数，之后使用含有青霉素（1500U/m1）和链霉素（1000 U/m1）的生理盐水冲洗3次，并用此生理盐水稀释原头蚴至4000～5000个/m1的浓度，用美兰染色镜检活原头蚴占95%以上，即可动物体内接种。
1.2 实验动物模型的建立
昆明种健康雌性小鼠48只，体重18～22 g，购自本省地方病防治研究所动物中心。每只实验小鼠经腹腔无菌注射0.5ml上述稀释的原头蚴，并随机分成4组，每组12只，分别为阿苯达唑治疗组、香菇多糖治疗组、联合用药治疗组和不用药对照组，于感染后20天开始药物治疗。
1.3 药品及给药方法
香菇多糖片、阿苯达唑片）分别用蒸馏水配成混悬液。阿苯达唑治疗组（悬液浓度为20mg/kg·d），香菇多糖治疗组（悬液浓度为180mg/kg·d），联合用药治疗组（悬液浓度为香菇多糖(180mg/kg·d)+阿苯达唑(20mg/kg·d)）。各组小鼠每日经口灌胃相应药物1次，连续给药三个月，对照组相同方法每日给予同容积蒸馏水。
1.4 疗效观察
1.4.1 棘球蚴湿重及抑囊率
各组小鼠治疗三个月后处死解剖，从腹腔中分离出棘球蚴组织并称重，计算棘球蚴囊重抑制率。
1.4.2 棘球蚴超微结构观察
将治疗组和对照组棘球蚴组织做如下处理：①固定：分别用4％戊二醛液和四氯化锇液做先后固定，②丙酮梯度脱水，③Epon-812包埋，④LKB—Nova型超薄切片机切片，⑤将切片置于铜网上，用醋酸铀和柠檬酸铝双重染色，⑥电镜（JHM-100cx）观察并拍照。
1.4.3 统计分析
应用专业统计软件，采用方差分析对数据进行统计分析。
2 结果
2.1 棘球蚴形态学观察及抑囊率
用香菇多糖与阿苯达唑治疗感染小鼠3个月后，剖检小鼠，发现3个治疗组的棘球蚴组织生长均被不同程度的抑制。从各治疗组外观形态改变分析，联合用药组损伤最重。结果见表1。
3 讨论
香菇多糖（lentinan，LNT）是香菇菌子实体中分离提取并纯化的一组高分子葡聚糖，甘露糖甘肽是其主要成分。研究发现，LNT具有广泛的药理作用，如抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等作用[7]，同时对于某些寄生虫感染也具有一定的治疗作用[8]。
本实验形态学显示，LAT对小鼠继发性囊型包虫病有治疗作用，单用香菇多糖组其抑囊率达26.83%，联用阿苯达唑组其抑囊率可达45.12%；超微结构观察表明LNT对棘球蚴组织也有明显的毒性作用，香菇多糖治疗后棘球蚴角皮层和生发层之间的微毛变少、变短、模糊不清，并且生发层细胞多发生空泡变性及核破裂现象。研究表明LNT、ABZ对棘球蚴囊生长具有明显的抑制作用，LNT与ABZ联用抑制效果更好。
分析LNT对棘球蚴组织的损伤作用，可能与以下因素有关：（1）香菇多糖通过增强细胞膜上离子通道的基因表达，使胞内Ca2+浓度升高，Ca2+作为第二信使，对细胞功能的实现有重要作用，其浓度升高可激活细胞内的基因表达，最终影响生发层细胞的生理功能并抑制其生长发育。（2）香菇多糖能促进NF-κB（核转录因子）向核内转位并激活PI3K/Akt和MAPK信号转导途径，Akt（丝氨酸/苏氨酸酪氨酸激酶）通过激活下游信号分子而促进细胞增生、生存和凋亡。（3）研究表明，LNT可在体外诱导胶质瘤细胞、人膀胱癌BIU-87细胞的凋亡，凋亡在给药72h发生，提示LNT可通过诱导细胞凋亡而达到杀伤棘球蚴囊生发层细胞的作用。（4）免疫药理证实LNT可以促进T、B 淋巴细胞增殖，提高巨噬细胞、NK细胞、LAK、IL-2等各种免疫相关因子的活性，具有免疫调节作用。囊型包虫病刺激宿主产生体液免疫和细胞免疫反应，LNT对棘球蚴的损伤可能是通过免疫调节作用间接发挥作用。以上分析，还有待进一步研究证实。LNT与ABZ联合治疗小鼠棘球蚴，治疗效果更显著,这可能由于：（1）LNT与ABZ均具有抗棘球蚴生长的作用，二者联用时抗棘球蚴作用增强；（2）2种药物可能互相促进肠道对药物的吸收，从而增加了血药浓度和肝药浓度，提高了药物的生物利用度。
本实验结果表明，香菇多糖能破坏棘球蚴的超微结构，对小鼠继发性囊型包虫病有一定的治疗作用，并能增强阿苯达唑的疗效，这给中西医联合治疗包虫病提供了新的途径和方法。但就其抗棘球蚴的机理尚未作深入探讨，还有待进一步研究。
参考文献：
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作者简介：
白海燕（1970~），女，青海籍，青海大学医学院病原生物学副教授，硕士研究生。研究方向：病原生物学
青海大学医学院中青年科研项目资助基金（2013-KY-8）
论文作者:白海燕,曹得萍, 赵海龙, 武海燕
论文发表刊物:《中国慢性病预防与控制》2015年8月第2期供稿
论文发表时间:2016/3/22
标签：多糖论文; 香菇论文; 小鼠论文; 虫病论文; 作用论文; 浓度论文; 细胞论文; 《中国慢性病预防与控制》2015年8月第2期供稿论文;