王蕾, 李艳[1]2017年在《p27~(Kip1)在As_2O_3诱导白血病细胞凋亡中的作用机制》文中提出目的:研究叁氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)及转录生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人HL-60细胞增殖的影响,并探讨相关信号通路。方法:流式细胞术检测细胞周期及凋亡,RTPCR检测p27~(Kip1)、TGF-β1、Cyclin E和Bcl-2表达,免疫组织化学方法和Western blot方法检测p27~(Kip1)、TGF-β1、Cyclin E和Bcl-2蛋白水平。结果:As_2O_3、TGF-β1单药或联合处理均可诱导细胞凋亡,以联合处理组凋亡最明显,并且As_2O_3单药组及联合处理组细胞周期阻滞于G1期。As_2O_3单药及联合处理组可见p27~(Kip1)、内源性TGF-β1表达上调,Cyclin E和Bcl-2表达下调,外源性TGF-β1处理组可见p27~(Kip1)mRNA及蛋白表达上调,内源性TGF-β1 mRNA表达上调,内源性TGF-β1蛋白水平与对照组比较无明显变化,Cyclin E和Bcl-2表达下调,联合处理组p27~(Kip1)及内源性TGF-β1表达上调及Cyclin E和Bcl-2表达下调程度强于单药处理组。结论:As_2O_3诱导细胞凋亡的机制可能是通过上调TGF-β1,从而上调p27~(Kip1),拮抗Cyclin E和Bcl-2的作用,抑制细胞增殖,使细胞周期阻滞于G_1期,从而诱导细胞发生凋亡,外源性TGF-β1通过上调内源性TGF-β1,从而上调p27~(Kip1),增强As_2O_3诱导细胞凋亡的作用。
张晓珣[2]2016年在《牛蒡子苷元抗肝纤维化作用及抑制肝星状细胞增殖的分子机制研究》文中研究说明目的:探讨牛蒡子苷元(arctigenin,ATG)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的肝纤维化大鼠的防治作用及抑制血小板源性衍生因子BB(platelet-derived growth factor,PDGF-BB)刺激的肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)增殖的分子机制。方法:复制大鼠CCl4肝纤维化模型,造模8周。从第5周开始,给予ATG和秋水仙碱(colchicine,COL),连续治疗4周。测定各组大鼠血清中肝功能指标和肝纤维化标志物水平,肝组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)的含量;HE和Masson染色观察肝组织病理学改变,免疫组织化学法分析肝组织中纤维化相关蛋白表达情况,并采用组织免疫荧光双标法检测活化的肝星状细胞增殖状况,免疫印迹法测定细胞周期相关调控蛋白的表达水平。采用BrdU掺入的ELISA法,检测ATG对活化的HSC细胞增殖的抑制效果,并使用流式细胞术分析ATG对细胞周期进程的影响,免疫印迹法检测细胞周期相关蛋白的表达情况;通过免疫共沉淀技术获得Cyclins-CDKs免疫复合物,并分别以组蛋白H1(histone H1)和细菌合成的GST-Rb融合蛋白为底物,分别检测细胞周期素依赖的蛋白激酶CDK2和CDK4/6激酶复合物的活性;通过特异性的p21cip1和p27~(kip1)抗体,将与p21cip1和p27~(kip1)结合的CDKs-CKIs免疫复合物从全细胞裂解液中进行分离后,考察p21cip1和p27~(kip1)与CDK2、CDK4、CDK6的相互结合情况;为证实ATG所介导的G0/G1周期停滞和HSCs增殖抑制作用,与其上调p27~(kip1)蛋白表达水平有关,采用si RNA技术,特异性地沉默p27~(kip1)基因表达后,同时检测其对ATG诱导的细胞周期阻滞和细胞增殖抑制作用的影响;通过检测位于PDGFR下游的FOXOs的磷酸化水平、FOXO3a和14-3-3复合物形成以及FOXO3a入核情况,考察ATG对PDGF调控的下游信号分子的影响,探索ATG上调细胞周期阻抑物蛋白p27~(kip1)表达的信号调控通路;采用si RNA技术,特异性沉默FOXO3a基因表达,检测其对ATG诱导上调的p27~(kip1)表达水平的影响。结果:研究ATG对CCl4诱导的肝纤维化大鼠的治疗作用,结果显示,给予ATG(1、3mg/kg)和COL(0.1 mg/kg)均能显着降低血清中升高的谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(laminin,LN)以及Ⅲ型前胶原(procollagenⅢ,PCⅢ)水平,升高白蛋白(albumin,ALB)浓度,病理组织学检测发现,ATG能明显减轻肝脏纤维化程度,降低肝组织中Hyp含量。同时,ATG还能降低肝脏组织中活化肝星状细胞的数量,同时降低cyclin D1、CDK2/4及细胞增殖标志物PCNA蛋白的表达水平,上调细胞周期阻抑物蛋白p27~(kip1)的表达。通过观察ATG对PDGF-BB诱导激活的HSCs抑制增殖作用及其相关作用机制,结果发现,在无细胞毒作用浓度下,ATG可抑制PDGF激活的HSCs增殖和DNA合成,将HSCs的细胞周期阻止在G0/G1期,在G1期早期,ATG通过下调cyclin D1、CDK4/6表达水平,显着抑制细胞周期素依赖性激酶CDK4/6的活性。同时,在G1/S转换期,ATG还能显着上调细胞周期抑制物蛋白p27~(kip1)的表达和CDK2-p27~(kip1)复合体的形成,从而抑制CDK2的活性,实现对HSCs G0/G1细胞周期的全面阻滞作用。此外,通过p27~(kip1)基因沉默方法,降低ATG诱导下的p27~(kip1)基因表达水平,可以同时消除由ATG诱导的细胞周期阻滞和细胞增殖抑制作用,证实了ATG对HSCs周期阻滞和增殖抑制作用,主要通过上调p27~(kip1)基因表达水平来实现。在PDGF-BB激活的HSCs中,ATG抑制了HSCs中Akt及下游转录因子FOXO3a的磷酸化水平,同时降低FOXO3a与14-3-3蛋白的结合能力,诱导FOXO3a的核转位能力;此外,通过RNA干扰技术,特异性地沉默FOXO3a基因表达水平,可以明显降低ATG介导的p27~(kip1)蛋白表达水平。结论:ATG对CCl4诱导的大鼠肝损伤和肝纤维化具有显着的治疗作用,其作用机制可能通过阻抑PI3K/Akt蛋白激酶的磷酸化激活,阻断其下游调控的转录因子FOXO3a的磷酸化,进而诱导FOXO3a发生核转移,并上调p27~(kip1)蛋白表达水平,从而实现对CDK2激酶活性的抑制,使HSCs无法完成从G1期向S期的转变,发挥抑制活化的HSCs增殖的作用。
张国顺, 高国芬, 林尚泽[3]2007年在《鼻咽癌中细胞周期蛋白E与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p27~(kip1)的相关性分析》文中进行了进一步梳理目的:研究鼻咽癌中细胞周期蛋白E(cyclin E)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(p27kip1)的表达及相关性。方法:以抗cyclin E抗体、抗p27kip1抗体为标记物,采用免疫组织化学方法(Elivision法)对37例鼻咽癌、17例慢性鼻咽炎石蜡标本进行检测,并结合临床资料进行分析。结果:37例鼻咽癌组织中cyclin E和p27kip1阳性表达率分别为51.4%和45.9%,17例慢性鼻咽炎中cyclin E和p27kip1阳性表达率分别为5.9%和88.2%,两者比较差异有显着性(P<0.01)。cyclin E阳性表达与病理分型、临床分期、淋巴结转移、颅神经侵犯无关(P>0.05),但与3年生存率有关(P<0.05);p27kip1阳性表达与病理分型、临床分期、淋巴结转移无关(P>0.05),但与颅神经侵犯及3年生存率有关(P<0.05)。cyclin E与p27kip1二者的表达有负相关性(r=-0.509,χ2=9.745,P=0.002)。结论:cyclin E和p27kip1表达可能是判断鼻咽癌生物学行为的指标。
张英民[4]2003年在《内皮素-1对人血管平滑肌细胞增殖调节的研究》文中研究说明运用细胞生物学及分子生物学方法，研究内皮素－1（Endothelin-1, ET-1）对人血管平滑肌细胞增殖的影响，由五个部分组成。第一部分 内皮素－1对人血管平滑肌细胞增殖的影响 ET－1是一个潜在的缩血管物质。最近研究表明，ET－1可以促进细胞增殖。我们拟研究ET－1对人血管平滑肌细胞增殖的影响。用MTT法观察ET－1及PD98059对平滑肌细胞生长的影响；[3H]-TdR法观察ET－1对血管平滑肌细胞DNA合成的影响；流式细胞仪法观察ET－1对血管平滑肌细胞周期的影响。首先，与对照组和PD98059组比较，ET－1刺激血管平滑肌细胞生长(P<0.05)。第二，与对照组比较，ET－1促进血管平滑肌细胞DNA合成(P<0.05)。第叁，ET－1促进细胞周期由G0/G1向S期的转变。与对照组比较，G0/G1 细胞百分比明显减少(P<0.05)。与对照组比较，S期细胞百分比明显增加(P<0.05)。研究表明，ET－1促进人血管平滑肌细胞增殖。第二部分 内皮素－1对人血管平滑肌细胞表型转变的影响 血管平滑肌细胞表型可从收缩型向合成型转变，而使细胞处于增殖状态。我们探讨了ET－1对血管平滑肌细胞表型和增殖变化影响的相互关系。l-CaD（low-Caldesmon）在合成型平滑肌细胞中出现，h－CaD(high-Caldesmon)在收缩型平滑肌细胞中出现。我们使用逆转录聚合酶链反应方法研究。细胞培养第一天，血管平滑肌细胞呈现h－CaD表型，第二天h－CaD表达减弱，第叁天消失(P<0.05)。ET－1刺激人血管平滑肌细胞l-CaD表型在第二天微弱表达，以后表达逐渐增强，且具有时间依赖性，第六天l-CaD表达达到最大值(P<0.05)。这些结果说明，ET－1抑制人血管平滑肌细胞h－CaD表达，促进l-CaD表达。研究表明，ET－1促进人血管平滑肌细胞由收缩型向合成型的转变，ET－1促进血管平滑肌细胞表型变化。<WP=4> 第叁部分 内皮素－1 对人血管平滑肌细胞细胞周期进程的影响 虽然ET－1在血管重构中作为缩血管、有丝分裂刺激作用有研究，但关于ET－1诱导人血管平滑肌细胞周期进程的机理研究还很少。我们运用蛋白印迹方法，研究ET－1对血管平滑肌细胞细胞周期进程的影响机制，观察细胞周期蛋白及细胞周期激酶抑制蛋白变化。细胞周期调节蛋白D1表达，在ET-1刺激后16小时出现，表达在32小时达到高峰，40小时表达稍有减低(P<0.05)。细胞周期调节蛋白A表达，在ET-1刺激后24小时出现，表达在40小时达到最大值(P<0.05)。细胞周期激酶抑制蛋白p27kip1表达降低在ET-1刺激后8小时出现，40小时表达达最低值(P<0.05)。没有ET-1刺激组，p27kip1的表达没有变化。结果显示,ET－1增加细胞周期蛋白D1、A表达，且具有时间依赖性。ET－1抑制p27 kip1表达，也具有时间依赖性。研究表明,ET－1刺激人血管平滑肌细胞增殖依赖于细胞周期的变化。第四部分 内皮素－1对人血管平滑肌细胞MEK/ERK通路和内皮素受体A表达的影响许多研究表明，内皮素受体 A 和丝裂原激活蛋白激酶/细胞外调节激酶1、2是细胞增殖的重要信号传导通路。我们运用蛋白印迹方法，观察ET－1诱导的人血管平滑肌细胞增殖中MEK/ERK、ETA受体的表达情况。MEK磷酸化出现在ET-1刺激后第五分钟，表达在第十五分钟达到最大值，30分钟表达稍有减低(P<0.05)。ERK磷酸化出现在ET-1刺激后第五分钟，表达在第十五分钟达到最大值,30分钟表达稍有减低(P<0.05)。ETA表达在ET-1刺激后8小时激活，表达在32小时达到最大值，40小时表达稍有减低(P<0.05)。而非磷酸化MEK/ERK水平没有变化(P>0.05)。结果显示，ET－1增加MEK/ERK磷酸化水平，且具有时间依赖性。ET－1促进ETA受体表达，且具有时间依赖性。研究表明，MEK/ERK通路和ETA激活在ET－1诱导的血管平滑肌细胞增殖中起重要作用。第五部分 内皮素－1对人血管平滑肌细胞增殖调节的通路 运用蛋白印迹方法,研究ET－1诱导血管平滑肌细胞增殖过程MEK/ERK、ETA、细胞周期进程叁者之间相互关系及相互作用。运用MEK抑制剂PD98059进行一系列研究。细胞周期调节蛋白D1的表达出现在PD98059作用后24小时，<WP=5>表达最大值在40小时(P<0.05)，与ET-1组比较有明显差异(P<0.01)。细胞周期调节蛋白A的出现微弱的表达在PD98059作用后24小时，表达最大值在40小时(P<0.05)，ET-1组比较有明显差异(P<0.01)。PD98059刺激下，p27kip1表达没有降低，同ET-1组比较有明显差异(P<0.01)。MEK磷酸化水平在PD98059作用后10分钟，最大值在30分钟(P<0.05)，与ET-1组比较有明显差异(P<0.01)。ERK磷酸化水平在PD98059作用后15分钟，最大值在30分钟(P<0.05)，与ET-1组比较有明显差异(P<0.01)。结果显示，PD98059能抑制细胞周期调节蛋白D1、A的表达，PD98059抑制ET-1诱导的p27kip1表达减低，PD98059对ETA受体的表达没有影响(P>0.05)。研究证明，ET－1诱导的细胞周期进程与MEK/ERK通路有关，而且可以说部分是被MEK/ERK调节的。但与ETA受体的表达无关，这可能说明除了MEK/ERK通路外，可能还有其它信号通路参与血管平滑肌细胞增殖调节。我们希望通过以上几个部分研究，能为临床防治再狭窄等疾病提供一些依据。
张冬梅, 陆建新, 沈爱国, 陈莉, 何松[5]2005年在《P27~(kip1)与细胞周期素D3在非霍奇金淋巴瘤中的表达、定位及相互关系》文中研究说明目的探讨P27kip1和细胞周期素(cyclin)D3在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的表达、定位、相互关系及意义。方法采用免疫组织化学方法检测100例NHL患者病理标本及20例反应性增生淋巴结标本中P27kip1、cyclin D3及细胞增殖指标Ki-67的表达。采用Western blot、免疫荧光双标法和激光共聚焦技术检测3种淋巴瘤细胞系细胞内P27kip1和cyclin D3的表达、定位。结果P27kip1在NHL组织中的阳性率低于反应性增生淋巴结,且与肿瘤侵袭性以及增殖活性(Ki-67指数,Ki-67LI)呈负相关;cyclin D3在NHL组织中的阳性率高于反应性增生淋巴结,且与肿瘤侵袭性以及增殖活性呈正相关;P27kip1与cyclin D3呈负相关。但在少数病例出现P27kip1的异常高表达并伴有cyclin D3和Ki-67的高表达。P27kip1与cyclin D3在3种淋巴瘤细胞系的表达水平不一,在Raji细胞中P27kip1与cyclin D3共同高表达并且共定位。结论P27kip1的低表达,cyclin D3的高表达与多数NHL的发生发展有关;部分病例或细胞系中P27kip1的异常高表达及其与cyclin D3相互作用可能是NHL发生的另一机制。
王智华[6]2007年在《不同IL-15基因转染对NCI-H446肿瘤细胞增殖及周期调控分子表达的影响》文中研究指明目的肿瘤是严重威胁人类生命健康的重大疾病;转染抗瘤相关细胞因子基因,是探索肿瘤基因治疗的重要领域。白细胞介素15(IL-15)是1994年发现的与IL-2有类似生物活性的细胞因子,可促进NK细胞和CTL细胞增殖并提高它们杀瘤活性。人体许多组织细胞都有IL-15mRNA表达但少有IL-15蛋白分泌,提示IL-15体内正常作用有可能主要是在细胞内发挥。已有报道将原型IL-15基因转染的肿瘤细胞植入裸鼠体内,并未获得理想的高效抗瘤效果,推测可能与原型IL-15基因自身长信号肽抑制其蛋白分泌有关。但转染能促进蛋白分泌的改型IL-15基因,也未取得预期效果。我们先前发现不同IL-15基因转染人小细胞肺癌细胞株NCI-H446肿瘤细胞,可明显降低其细胞的增殖速率,只是降低的程度彼此不尽一致。肿瘤细胞是由正常细胞突变而来,与其来源的正常组织细胞相比,细胞周期失控增殖速率加快是其主要恶性特征之一。迄今发现,细胞内影响细胞增殖速率的相关分子主要有:细胞周期正调控分子细胞周期蛋白(cyclin)和周期蛋白依赖性激酶(CDK)及细胞周期负调控分子CDK抑制蛋白(CDKI)和某些抑癌基因编码蛋白。本研究用本室已成功构建的3种转染不同形式IL-15基因的NCI-H446细胞模型(转染原型IL-15基因的CIL-15、转染IL-15成熟肽基因的CIL-15mp和转染以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL-15基因的CIL-2sp-IL-15mp)作实验组,用野生型NCI-H446细胞(Cw)作对照组,研究不同形式IL-15基因转染对NCI-H446肿瘤细胞增殖的影响,以及对细胞周期正调控分子(cyclin D1、cyclin E、CDK2和CDK4)和细胞周期负调控分子(p21和Rb)的蛋白及mRNA表达的影响,揭示其分子基础,为进一步探索IL-15基因的抗肿瘤作用提供有益的线索和启示。方法1以野生株NCI-H446细胞(CW)为对照组,用本室已构建的3种分别以不同IL-15基因转染的NCI-H446细胞模型(原型IL-15基因转染的CIL-15、IL-15成熟肽基因转染的C_(IL-15mp)和以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL-15基因转染的CIL-2sp-_(IL-15mp))为实验组,台盼蓝拒染法在连续8天的培养中每天计数活细胞,并绘制细胞生长曲线;MTT法检测培养24h、48h、72h和96h四个时间点的细胞增殖;流式细胞术分析细胞周期的变化。2以野生株NCI-H446细胞(C~W)为对照,检测3种转染不同IL-15基因的NCI-H446细胞模型细胞(CIL-15、C_(IL-15mp)和CIL-2sp-_(IL-15mp))中,细胞周期正调控分子cyclin D1、cyclin E、CDK2和CDK4的蛋白表达(Western-blot法)和mRNA表达(RT-PCR法)。3以野生株NCI-H446细胞(C~W)为对照,检测3种转染不同IL-15基因的NCI-H446细胞模型细胞(CIL-15、C_(IL-15mp)和CIL-2sp-_(IL-15mp))中,细胞周期负调控分子p21和Rb的蛋白表达(Western-blot法)和mRNA表达(RT-PCR法)。结果1不同IL-15基因转染对NCI-H446肿瘤细胞增殖的影响1.1细胞增殖台盼蓝拒染法的活细胞计数在培养后的第五天细胞计数分别为[(71.18±5.16)×104(C~w)]、[(58.93±3.34)×104 (CIL-15)]、[(35.82±2.45)×104 (C_(IL-15mp))]和[(25.4±2.84)×104 (CIL-2sp-_(IL-15mp))]。自培养后的第5天始至第8天,转染3种不同IL-15基因的NCI-H446细胞生长速率均较野生株细胞增殖减慢且减慢的程度不同(P<0.05或P<0.01);四种细胞的增殖速率由快至慢依次为C~w、CIL-15、C_(IL-15mp)、CIL-2sp-_(IL-15mp)。1.2细胞增殖的MTT测定72h培养时间点的OD值分别为1.124±0.091(C~w)、0.968±0.084 (CIL-15)、0.786±0.084 (C_(IL-15mp))和0.627±0.156(CIL-2sp-_(IL-15mp));96h培养时间点的OD值分别为1.564±0.163 (C~w)、1.262±0.135(CIL-15)、0.928±0.070 (C_(IL-15mp))和0.777±0.030 (C IL-2sp-_(IL-15mp))。在两个时间点中,3种转染不同IL-15基因的NCI-H446细胞的OD值均较野生株细胞低,但程度不同(P<0.05或P<0.01);四种细胞的OD值由高到低,依次为C~w、CIL-15、C_(IL-15mp)、CIL-2sp-_(IL-15mp)。2不同IL-15基因转染对NCI-H446肿瘤细胞周期的影响四种细胞G0/G1期的比例分别是([69.44±3.26)%(C~w)], ([73.47±1.49)% (C_(IL-15))], ([76.81±1.41)%(C_(IL-15mp))]和([81.26±2.31)%(C_(IL-2sp-IL-15mp))],彼此间都有显着性差异(P<0.05或P<0.01); 3种转染IL-15基因的NCI-H446细胞G0/G1期的比例都显着高于野生株NCI-H446 G0/G1期的比例(P<0.05或P<0.01)。四种细胞G0/G1期细胞比例由高到低,依次为C_(IL-2sp-IL-15mp)、C_(IL-15mp)、C_(IL-15)、C~w。四种细胞S期的比例分别是[(26.90±1.43)%(C~w)]、[(19.94±1.72)%(C_(IL-15))]、[(16.11±1.80)%(C_(IL-15mp))]和[(12.80±0.59)%(C_(IL-2sp-IL-15mp))],彼此间都有显着性差异(P<0.05或P<0.01); 3种转染IL-15基因的NCI-H446细胞S期的比例都显着低于野生株NCI-H446细胞S期的比例(均P<0.01)。四种细胞S期比例由低到高依次为C_(IL-2sp-IL-15mp)、C_(IL-15mp)、C_(IL-15)、C~w。3不同IL-15基因转染对NCI-H446肿瘤细胞周期正调控分子表达的影响3.1 cyclin D1的表达cyclin D1蛋白的表达分别是0.893±0.182 (C~w)、0.717±0.148 (C_(IL-15))、0.749±0.172 (C_(IL-15mp))和0.786±0.172 (C_(IL-2sp-IL-15mp))。与C~w相比,3种不同IL-15基因转染的NCI-H446细胞cyclin D1蛋白表达均与之无显着性差异(均P>0.05);3种不同IL-15基因转染的NCI-H446细胞间的表达也均无显着性差异(均P>0.05)。表明3种不同IL-15基因转染对NCI-H446细胞cyclin D1的蛋白表达无影响。Cyclin D1mRNA的表达分别是0.52±0.046 (C~w)、0.47±0.125 (C_(IL-15))、0.52±0.049 (C_(IL-15mp))和0.54±0.057 (C_(IL-2sp-IL-15mp))。与C~w相比,3种不同IL-15基因转染的NCI-H446细胞cyclin D1mRNA表达均与之无显着性差异(均P>0.05);3种不同IL-15基因转染的NCI-H446细胞间的表达也均无显着性差异(均P>0.05)。表明3种不同IL-15基因转染对NCI-H446细胞cyclin D1mRNA的表达无影响。3.2 cyclin E的表达cyclin E蛋白的表达分别为1.154±0.153 (C~w)、0.911±0.196(C_(IL-15))、0.720±0.112 (C_(IL-15mp))和0.531±0.104 (C_(IL-2sp-IL-15mp))。与C~w相比, 3种不同IL-15基因转染细胞模型(C_(IL-15)、C_(IL-15mp)、C_(IL-2sp-IL-15mp) )cyclin E蛋白的表达均降低(P<0.05, P<0.05,P<0.01);且C_(IL-15)、C_(IL-15mp)和C_(IL-2sp-IL-15mp)间,均有显着性差异(均P<0.05)。表明转染3种不同IL-15基因,均可以降低NCI-H446肿瘤细胞cyclin E蛋白的表达,但降低的程度不同。四种细胞cyclin E蛋白的表达量,由高到低依次为C~w、C_(IL-15)、C_(IL-15mp)、C_(IL-2sp-IL-15mp)。转染3种不同IL-15基因的NCI-H446细胞cyclin E蛋白表达的降低与G0/G1期细胞比例升高呈负相关(r=-0.983,P<0.01),与S期细胞比例降低呈正相关( r=0.993,P<0.01)。Cyclin E mRNA的表达分别是1.10±0.121 (C~w)、0.93±0.073 (C_(IL-15))、0.76±0.059 (C_(IL-15mp))和0.48±0.056 (C_(IL-2sp-IL-15mp))。与C~w相比,3种不同IL-15基因转染细胞模型(C_(IL-15)、C_(IL-15mp)、C_(IL-2sp-IL-15mp) )cyclin E mRNA的表达均降低(P<0.05, P<0.05,P<0.01);且C_(IL-15)、C_(IL-15mp)和C_(IL-2sp-IL-15mp)间,均有显着性差异(均P<0.05)。表明转染3种不同IL-15基因,均可以降低NCI-H446肿瘤细胞cyclin E mRNA的表达,但降低的程度不同。四种细胞cyclin E mRNA的表达量,由高到低依次为C~w、C_(IL-15)、C_(IL-15mp)、C_(IL-2sp-IL-15mp)。转染3种不同IL-15基因的NCI-H446细胞cyclin E mRNA表达的降低与G0/G1期细胞比例升高呈负相关( r=-0.998,P<0.01),与S期细胞比例降低呈正相关( r=0.957,P<0.05)。3.3 CDK2的表达CDK2蛋白的表达分别是0.689±0.251 (C~w)、0.257±0.106 (C_(IL-15))、0.254±0.120 (C_(IL-15mp))和0.385±0.046 (C_(IL-2sp-IL-15mp))。与C~w相比,3种不同IL-15基因转染细胞模型(C_(IL-15)、C_(IL-15mp)、C_(IL-2sp-IL-15mp) )CDK2蛋白的表达均降低(P<0.01,P<0.01, P<0.05);但C_(IL-15)、C_(IL-15mp)和C_(IL-2sp-IL-15mp)间,无显着性差异(P>0.05)。表明转染3种不同IL-15基因,可同等程度地降低NCI-H446肿瘤细胞CDK2蛋白的表达。CDK2 mRNA的表达分别是0.964±0.139 (C~w)、0.560±0.167 (C_(IL-15))、0.683±0.049 (C_(IL-15mp))和0.622±0.023 (C_(IL-2sp-IL-15mp))。与C~w相比, C_(IL-15)、C_(IL-15mp)、C_(IL-2sp-IL-15mp)的CDK2 mRNA表达均显着降低(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。在C_(IL-15)、C_(IL-15mp)和C_(IL-2sp-IL-15mp)间,CDK2 mRNA的表达彼此无显着性差异(P>0.05)。表明转染3种不同IL-15基因,均可以同程度地降低NCI-H446肿瘤细胞CDK2mRNA的表达。3.4 CDK4的表达CDK4蛋白的表达分别是1.694±0.506(C~w)、1.067±0.338(C_(IL-15))、1.038±0.311(C_(IL-15mp))和0.974±0.255(C_(IL-2sp-IL-15mp))。与C~w相比,C_(IL-2sp-IL-15mp)的CDK4蛋白表达降低(P<0.05),而C_(IL-15)和C_(IL-15mp)较之无显着性差异(均p>0.05)。C_(IL-15)、C_(IL-15mp)和C_(IL-2sp-IL-15mp)间的CDK4蛋白表达无显着性差异(P>0.05)。表明改型IL-15基因的转染可轻度降低NCI-H446肿瘤细胞CDK4蛋白的表达,而原型或成熟肽基因的转染对NCI-H446肿瘤细胞CDK4蛋白的表达均无显着影响。CDK4 mRNA的表达分别是0.630±0.045( C~w)、0.651±0.082( C_(IL-15))、0.561±0.061 (C_(IL-15mp))和0.666±0.027 (C_(IL-2sp-IL-15mp))。四种细胞间CDK4 mRNA表达无显着性差异(P>0.05),表明3种不同IL-15基因转染都不能显着影响NCI-H446肿瘤细胞CDK4 mRNA的表达。4不同IL-15基因转染对NCI-H446肿瘤细胞周期负调控分子表达的影响4.1 p21的表达p21蛋白的表达分别是0.907±0.042 (C~w)、1.052±0.086 (C_(IL-15))、0.848±0.084 (C_(IL-15mp))和0.878±0.050 (C_(IL-2sp-IL-15mp))。与C~w相比,C_(IL-15)的p21蛋白表达量增加(P<0.05),C_(IL-15mp)和C_(IL-2sp-IL-15mp)与之无显着性差异(均P>0.05)。表明原型IL-15基因转染可增加NCI-H446肿瘤细胞的p21蛋白表达;成熟肽基因或改型基因的转染,对NCI-H446肿瘤细胞的p21蛋白表达无显着影响。p21 mRNA的表达分别是0.455±0.051 (C~w)、0.747±0.061 (C_(IL-15))、0.516±0.093 (C_(IL-15mp))和0.512±0.117(C_(IL-2sp-IL-15mp))。与C~w相比,C_(IL-15)的p21 mRNA表达量增加(P<0.01),C_(IL-15mp)和C_(IL-2sp-IL-15mp)与之无显着性差异(均P>0.05)。表明原型IL-15基因转染可增加NCI-H446肿瘤细胞的p21 mRNA表达;成熟肽基因或改型基因的转染,对NCI-H446肿瘤细胞的p21 mRNA表达无显着影响。4.2 Rb的表达Rb蛋白的表达分别是0.860±0.184 (C~w)、1.132±0.150 (C_(IL-15))、0.959±0.221 (C_(IL-15mp))和0.938±0.091(C_(IL-2sp-IL-15mp))。与C~w相比,C_(IL-15)的Rb蛋白表达量增加(P<0.05),C_(IL-15mp)和C_(IL-2sp-IL-15mp)与之无显着性差异(均P>0.05)。表明原型IL-15基因转染可增加NCI-H446肿瘤细胞的Rb蛋白的表达,而成熟肽基因转染或改型基因转染对NCI-H446肿瘤细胞的Rb蛋白表达无显着影响。Rb mRNA的表达分别是0.787±0.075 (C~w)、1.176±0.080 (C_(IL-15))、0.899±0.103 (C_(IL-15mp))和0.775±0.087 (C_(IL-2sp-IL-15mp))。与C~w相比,C_(IL-15)和C_(IL-15mp)的Rb mRNA表达量显着增加(均P<0.01), C_(IL-2sp-IL-15mp)与之相比无显着性差异(P>0.05)。表明原型IL-15基因或成熟肽基因转染可增加NCI-H446细胞Rb mRNA的表达,而改型IL-15基因转染不影响NCI-H446细胞Rb mRNA的表达。结论1 3种不同IL-15基因转染可减慢NCI-H446肿瘤细胞增殖速率,减慢程度由高至低依次为C_(IL-2sp-IL-15mp)、C_(IL-15mp)、C_(IL-15);减慢NCI-H446肿瘤细胞增殖速率与升高G0/G1期比例和降低S期比例有关。2 3种不同IL-15基因转染致NCI-H446肿瘤细胞增殖速率减慢和G0/G1期比例升高及S期比例降低,可能主要是由降低细胞周期正调控分子cyclin E的表达引起。3 3种不同IL-15基因转染致NCI-H446肿瘤细胞增殖速率减慢和G0/G1期比例升高及S期比例降低,主要不是由影响细胞周期负调控分子p21和Rb的表达引起。
马会明, 张永芳, 王蒙蒙, 李昀伽, 蒲静[7]2016年在《生长分化因子-9下调对小鼠卵巢颗粒细胞增殖能力的影响》文中提出目的探讨生长分化因子-9(GDF9)对小鼠卵巢颗粒细胞增殖能力基因周期蛋白A(cyclin A)、周期蛋白D1(cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶抑制因子27(p27kip1)表达的影响。方法利用CCK-8检测法检测细胞的增殖能力;使用流式细胞术、Real-time PCR和Western blot法验证GDF9 siRNA的干扰效率;采用Real-time PCR和Western blot法检测细胞增殖cyclin A、cyclin D1和p27kip1 mRNA和蛋白表达情况。结果 GDF9 siRNA显着抑制颗粒细胞增殖活力,其中72 h抑制最明显(P<0.05);Real-time PCR和Western blot法检测结果显示GDF9 siRNA显着下调小鼠卵巢颗粒细胞中GDF9 mRNA及蛋白的表达(P<0.01);Realtime PCR法检测结果显示,细胞cyclin A、cyclin D1 mRNA表达降低,p27kip1 mRNA表达增强;Western blot法结果显示,GDF9 siRNA可促进细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27kip1的表达,同时下调G2/M期调控蛋白cyclin A、cyclin D1的表达。结论靶向抑制小鼠卵巢颗粒细胞中GDF9的表达,下调细胞cyclin A、cyclin D1的表达,上调P27 kip1的表达,显着抑制细胞的增殖。
林勤[8]2003年在《人乳腺癌中PTEN蛋白的表达和意义及其与p27~(kip1)和cyclin D1表达的相关性》文中研究表明目的 探讨抑癌基因 PTEN蛋白在人乳腺癌中的定位和表达水平与临床病理指标的关系及预后意义 ,以及与可能的下游基因、抑癌基因 p2 7kip1、癌基因 cyclin D1 的蛋白表达之间的相关性。 方法 应用免疫组织化学染色 SP方法 ,检测 6 1例乳腺癌组织石蜡切片 PTEN蛋白、P2 7kip1和 CyclinD1 蛋白的表达 ,比较 PTEN蛋白表达与临床病理指标 (组织学分级、肿块大小、淋巴结转移程度、TNM分期 )、激素受体(ER、PR)状态之间的关系 ,观察与 P2 7kip1 、Cyclin D1 蛋白表达是否相关。 结果 PTEN蛋白表达定位于细胞质 ,p2 7kip1的表达定位于细胞核 ,Cyclin D1 蛋白表达大多定位于细胞核 ,少数于细胞质。 PTEN蛋白阴性表达 6 .6 % (4 / 6 1) ,表达减低 4 1.0 % (2 5 / 6 1) ,阳性表达 5 2 .5 % (32 / 6 1) ;P2 7kip1阴性表达 19.7% (12 / 6 1) ,表达减低 4 4 .3% (2 7/ 6 1) ,阳性表达36 .1% (2 2 / 6 1) ;Cyclin D1 阴性 31.2 % (19/ 6 1) ,弱阳性37.7% (2 3/ 6 1) ,强阳性 31.2 % (19/ 6 1)。 PTEN与淋巴结转移程度、ER状态及局部复发、远处转移相关 ;单因素生存分析结果 ,PTEN蛋白高表达组 5年生存率 (87.5 0 % )优于低表达组 (5 8.6 2 % ,P<0 .0 5 )。 Cox模型多因素分析未显示PTEN蛋白表达水平是独立的预后?
吴芃, 郑少斌[9]2009年在《p27~(kip1)、cyclin D1、cyclin D3及Skp2在肾细胞癌中的表达及临床意义》文中提出目的:检测p27kip1、cyclinD1、cyclinD3及Skp2在肾细胞癌组织和正常肾组织中的表达情况,探讨几种蛋白之间的相关性及其与肾细胞癌各项临床病理参数的关系。方法:采用组织微阵列技术及免疫组化SP法检测p27kip1、cyclinD1、cyclinD3及Skp2在80例肾细胞癌及40例正常肾组织中的表达并作统计学分析。结果:①肾细胞癌中p27kip1阳性表达率低于正常肾组织(P=0.007),cyclinD1、cyclinD3、Skp2阳性表达率高于正常肾组织(分别P=0.001,P=0.04,P=0.024);②p27kip1与Skp2表达强度呈负相关(r=-0.262,P=0.019),p27kip1与cyclinD1表达强度呈负相关(r=-0.285,P=0.010),cyclinD1与cyclinD3之间呈正相关(r=0.314,P=0.002);③p27kip1的表达与肿瘤分化程度及临床分期呈负相关(P<0.05),Skp2表达与肿瘤分化程度呈正相关(P=0.002)。结论:Skp2、p27kip1的表达与肾细胞癌发生及生物学特性密切相关,为肾细胞癌诊治的研究提供了新的思路和依据。
孟庆凯, 徐惠绵, 王明耀[10]2011年在《大肠癌组织PBR、p27~(Kip1)、Cyclin E的表达及临床意义》文中研究说明目的观察大肠癌组织及正常结直肠组织标本中外周型苯二氮受体(PBR)、p27Kip1、Cyclin E的表达,探讨大肠癌可能的临床预后影响因素。方法收集85例手术治疗大肠癌组织及15例正常结直肠组织标本,进行免疫组化染色,观察p27Kip1、Cyclin E蛋白的表达;收集40例大肠癌患者的癌组织及10例正常结直肠组织新鲜冰冻标本,蛋白质印迹分析检测PBR、p27Kip1和Cyclin E蛋白表达,RT-PCR检测PBR、p27Kip1、Cyclin E mRNA的表达。结果大肠癌组织中PBR、Cyclin E高表达,p27Kip1低表达,且Cyclin E与p27Kip1蛋白表达负相关;Cyclin E阴性和p27Kip1阳性患者的5年生存率明显增加;p27Kip1和Cyclin E的表达进入Cox风险比例模型。结论大肠癌组织PBR、p27Kip1、Cyclin E异常表达。
参考文献：
[1]. p27~(Kip1)在As_2O_3诱导白血病细胞凋亡中的作用机制[J]. 王蕾, 李艳. 现代肿瘤医学. 2017
[2]. 牛蒡子苷元抗肝纤维化作用及抑制肝星状细胞增殖的分子机制研究[D]. 张晓珣. 重庆理工大学. 2016
[3]. 鼻咽癌中细胞周期蛋白E与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p27~(kip1)的相关性分析[J]. 张国顺, 高国芬, 林尚泽. 贵阳医学院学报. 2007
[4]. 内皮素-1对人血管平滑肌细胞增殖调节的研究[D]. 张英民. 复旦大学. 2003
[5]. P27~(kip1)与细胞周期素D3在非霍奇金淋巴瘤中的表达、定位及相互关系[J]. 张冬梅, 陆建新, 沈爱国, 陈莉, 何松. 中华血液学杂志. 2005
[6]. 不同IL-15基因转染对NCI-H446肿瘤细胞增殖及周期调控分子表达的影响[D]. 王智华. 河北医科大学. 2007
[7]. 生长分化因子-9下调对小鼠卵巢颗粒细胞增殖能力的影响[J]. 马会明, 张永芳, 王蒙蒙, 李昀伽, 蒲静. 安徽医科大学学报. 2016
[8]. 人乳腺癌中PTEN蛋白的表达和意义及其与p27~(kip1)和cyclin D1表达的相关性[J]. 林勤. 福建医科大学学报. 2003
[9]. p27~(kip1)、cyclin D1、cyclin D3及Skp2在肾细胞癌中的表达及临床意义[J]. 吴芃, 郑少斌. 广西医科大学学报. 2009
[10]. 大肠癌组织PBR、p27~(Kip1)、Cyclin E的表达及临床意义[J]. 孟庆凯, 徐惠绵, 王明耀. 第二军医大学学报. 2011
标签：肿瘤学论文; 细胞周期论文; 细胞增殖论文; 基因合成论文; 细胞转染论文; 细胞生物学论文; 肿瘤细胞论文; 调控论文;