(滨州医学院 山东 烟台 264003)
【摘要】目的:检测博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织中microRNA-29b (miR-29b)表达变化,为临床防治肺纤维化提供实验基础。方法:27只大鼠随机分组,7、14、28d每组随机选取3只大鼠,经H-E和Masson染色观察病理变化;qRT-PCR检测纤维化肺组织中miR-29b的表达水平,探索miR-29b相关表达机制。结果:博莱霉素致大鼠肺纤维化的造模过程符合从肺泡炎到肺纤维化的过渡过程。B组肺组织miR-29b表达在14及28d均比C组、N组降低,有统计学意义(P<0.05);结论:纤维化大鼠的肺组织miR-29b的表达水平明显的降低,提示肺纤维化模型中miR-29b参与肺纤维化的发生发展。
【关键词】博莱霉素;肺纤维化;miR-29b;大鼠
【中图分类号】R563 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2018)03-0246-02
1.材料和方法
健康清洁级雄性Wistar大鼠27只,在标准条件下饲养。根据随机分组原则把27只大鼠分为正常对照组(C组,9只)、生理盐水组(N组,9只)和博莱霉素致肺纤维化组(B组,9只)。气管给药,B组按照5mg/kg体重的量注入博莱霉素,N组换成等量生理盐水,注入后立即直立旋转动物,使药液在两侧肺内分布均匀,缝合颈部皮肤切口。每组动物于7、14、28d用腹主动脉放血法分别处死3只。麻醉后处死,气道灌注进行左肺内固定半个小时,行10%福尔马林固定。行切取组织过程,经H-E和Massom染色切片观察病理变化。肺泡炎、肺纤维化程度根据Szapiel[1]等的方法分级。行miR-29b的qRT-PCR检测:(1)各组肺组织总RNA提取。(2)逆转录反应:准备PCR反应体系25μl,取5μl总RNA。(3)各组取5μl行PCR扩增,U6 RNA做内参。从PCR仪读取Ct值后,各样本重复检测3次,取Ct均值,以C组与U6的差作为△Ct;△△Ct表示B组减去△Ct均值的差。做统计分析,以2-△△Ct计算表达量。
数据应用SPSS for windows 13.0统计分析软件在计算机上进行,进行单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
肉眼观察C组双肺呈淡粉色,表面光滑,弹性良好。B组双肺体积缩小,颜色暗红,表面凹凸不平不平,可见小片状的苍白灶,质地较硬,弹性差。HE染色镜下观察:N组大鼠肺组织无明显病理变化发生(图1A)。B组7d出现中度至中度肺泡炎的改变,肺泡间隔明显增宽,肺泡腔内炎症细胞包括中性粒细胞、巨噬细胞及淋巴细胞浸润明显增多,成纤维细胞开始增生;14-28d肺组织炎症反应逐渐减轻,成纤维细胞增生越来越严重,纤维组织明显增生,肺实质结构破坏萎缩,肺泡腔消失。博莱霉素致肺纤维化模型建立成功。(图1B)。
3.讨论
miR-29b是miR-29中主要成员,近年来miR-29b成为诊疗纤维化疾病的研究热点。目前,已有人通过研究证实,在肝胶原合成增加过程中有miRNA-29b的参与并且表现负性表达,病程的发展速度在miR-29b的作用下呈现下降趋势,这些现象都能够证明miR-29b在对抗纤维化的过程中有着重要的作用[2]。
本实验表明,B组7d后病理学观察大鼠的肺组织呈急性炎症改变,无明显纤维增生改变;B组14d和28d后镜下观察大鼠的肺组织与C组相比均发生纤维组织增生改变。镜下观察细支气管及以下管道的大量胶原纤维化出现、肺泡间隔增宽,炎症逐渐减轻,肺泡逐渐萎缩,泡腔内发生淋巴细胞浸润,尤以近胸膜处病变较为严重。28d较其他组肺纤维化明显加重,说明随着时间的延长,博莱霉素致肺纤维化的作用越明显。利用qRT-PCR检测miR-29b,B组肺组织miR-29b表达在第14及28d均比C组、N组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。说明随着纤维化病变程度加重,miRNA-29b表达降低。miRNA-29b表达在形成纤维化的病程中的变化,其详细的作用机理还没被完全阐述,推测miR-29b的变化方式可能与肺纤维化初期组织损伤后修复有关联。
综上,本实验提示肺纤维化模型中miR-29b参与肺纤维化的发生发展。其有望作为一个新型的防治肺纤维化的指标。
【参考文献】
[1] Szapiel SV,Elson NA,Fulmer JD,et al .Bleomycin-induced interstitial pulmonary diseases in the nude,athymicmouse[J].AmRev Respir Dis,1979,120(4):893-899.
[2]俞富军,郑建建,高申孟,等.miR-29b抗肝纤维化的机制研究.中国卫生检验杂志[J].2013,2(23):268-271.
论文作者:王亮,杨东霞,杨成(通讯作者)
论文发表刊物:《医药前沿》2018年1月第3期
论文发表时间:2018/3/5
标签:肺泡论文; 组织论文; 霉素论文; 大鼠论文; 炎症论文; 纤维论文; 发生论文; 《医药前沿》2018年1月第3期论文;