周长芸 青岛大学，山东省潍坊市昌乐县中医院
张蓓[通讯作者] 青岛大学
【摘要】目的：对比分析自拟风湿补益汤及甲氨蝶呤(MTX)对类风湿关节炎(RA)患者血清炎性细胞因子、T细胞免疫功能的影响，探讨风湿补益汤对RA的作用机理。方法: 收集RA患者80例。根据随机数字表法将患者分为中药组、甲氨喋呤(MTX)组，每组40例。比较两组患者治疗前血清IL-1β、TNF-α水平、血CD4+、CD8+细胞百分比及CD4+/CD8+比值与正常组的差异，同时比较两组治疗前、治疗6个月时的血清IL-1β、TNF-α水平、血CD4+、CD8+细胞百分比及CD4+/CD8+比值变化情况。结果：两组患者治疗6个月时的血清IL-1β、TNF-α水平均较治疗前明显降低(P＜0.05)；中药组治疗6个月时的血清IL-1β、TNF-α水平明显低于MTX组(P＜0.05)。两组患者治疗6个月时的CD4+百分比、CD4+/CD8+比值较治疗前明显降低(P＜0.05)，CD8+细胞百分比较治疗前明显升高；中药组治疗6个月时的CD4+百分比、CD4+/CD8+比值明显低于MTX组，CD8+细胞百分比明显高于MTX组(P＜0.05)。结论：风湿补益汤可能是通过抑制IL-1β、TNF-α的分泌以阻止滑膜成纤维细胞的过度增殖，及通过改善患者机体的T细胞亚群的失衡状态，调节细胞免疫反应来从而发挥免疫调控作用以实现治疗RA的目的。
【关键词】风湿补益汤；类风湿关节炎；炎性细胞因子；T细胞免疫；
类风湿关节炎(RA)是一种以慢性进行性关节损害为主要特征的慢性自身免疫性疾病，其病理表现为炎性细胞浸润和骨组织侵蚀的滑膜组织增生。许多研究已证实，多数RA患者接受MTX等免疫抑制剂治疗后均可获得较好的效果，但因其毒副作用大，使其应用受到了影响[1]。近期临床研究表明，中医药治疗RA具有疗效确切，副作用少而逐渐受到广大临床工作者的重视[2]。因此本课题采用自拟风湿补益汤治疗RA患者，观察其血清IL-1β、TNF-α、T细胞亚群及血液流变学的改变，以探讨风湿补益汤治疗RA的作用机制。
1对象和方法
1.1 研究对象 收集2014年9月至2016年8月在青岛大学医学院附属医院风湿科病房和门诊治疗的RA患者80例。患者诊断均符合西医[3]和中医[4]的RA标准。选择标准: ①年龄在18～70岁之间。②符合上述西医的RA诊断标准，且符合中医诊断标准中的肾气虚寒证、肾气虚寒证、瘀血痹阻证。③签署知情同意书。④入组前1个月为使用影响本研究观察指标的药物。排除标准: ①诊断不符合RA的西医诊断标准和中医诊断标准。②合并其他风湿病，如系统性红斑狼疮、严重的干燥综合征。③合并心脑血管、肝肾功能不全、消化、造血系统等严重原发性疾病及精神病者。④哺乳、妊娠或正准备妊娠的妇女。⑤治疗依从性差，或合用本研究禁止使用的药药物，或中途自行换药或加用其他药物者。⑥服药过程中出现其他疾病影响药效观察者。本研究经医院伦理委员会批准，研究对象均签署知情同意书。
1.2研究方法
1.2.1 分组方法 收集符合选择标准及排除标准的患者80例，根据随机数字表法将患者分为中药组、甲氨喋呤(MTX)组，每组40例。中药组男12例，女28例；平均年龄(42.9±9.8)岁；病程1～8年，平均(4.1±0.9)年。MTX组男10例，女30例；平均年龄(43.1±9.0)岁；病程1～9年，平均(4.3±1.2)年，两组的性别、年龄、病程比较均衡，差异无显著性，符合可比性的研究要求。
1.2.2治疗方法
(1) MTX组 口服甲氨蝶呤片10mg，每周一次；甲氨蝶呤后2天开始服用叶酸片l Omg，每周一次；口服羟氯喹片0.2g，每天2次,12周为一疗程，连续治疗2个疗程。
(2) 中药组 给予自拟风湿补益汤治疗，中药组成为：川芎9g,菟丝子15g,党参15g,枸杞15g，白术15g,杜仲15g,当归10g,生川断15g,炒白术15g,熟地20g,川乌9g,牛膝10g,细辛3g,灵仙15g,防风12g,桑寄生12g。水煎服，每日1剂，早晚各服1次，12周一个疗程，连续服用两个疗程。中药煎煮方法: 根据剂量配齐药物后，加水浸泡60min，先煎1h左右，过滤，药渣再加水煎煮1h，过滤，合并两次滤液即可。
1.3观察指标
分别在治疗前、治疗6个月时采集MTX组、中药组患者外周静脉血5 ml，测定血清中的IL-1β、TNF-α水平、血CD4+、CD8+细胞百分比及CD4+/CD8+比值的变化情况。IL-1β、TNF-α水平采用放射免疫分析法测定，试剂盒购自上海依科赛生物制品有限公司。 CD4+、CD8+细胞百分比及CD4+/CD8+比值采用美国BD公司生产的FACSCalibur流式细胞仪检测。所有检测均严格按试剂盒及仪器说明书进行操作。
1.4统计学分析 所有检测数据用标准差(x±s)表示，两组间比较采用t检验，采用SPSS21.0软件进行统计分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者治疗前、治疗6个月时的血清IL-1β、TNF-α水平情况
MTX组、中药组治疗前血清IL-1β、TNF-α水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)，两组患者治疗6个月时的血清IL-1β、TNF-α水平均较治疗前明显降低(P＜0.05)；中药组治疗治疗6个月时的血清IL-1β、TNF-α水平明显低于MTX组(P＜0.05)，见表1。
3 讨论
3.1 风湿补益汤对RA患者血清炎性细胞因子IL-1β、TNF-α水平的影响
目前，对RA的病理机制尚未明确，大量研究证实，巨噬细胞、淋巴细胞、滑膜细胞等炎症细胞介导的异常免疫，引起关节局部和全身的免疫功能紊乱，参与了RA的病理过程[5]。RA的发病过程中，细胞免疫和体液免疫均发挥着重要作用，尤其以细胞免疫的作用更明显。
IL-l是重要的炎症介质之一，可刺激嗜碱粒细胞和肥大细胞脱颗粒释放炎症介质；可刺激骨髓产生中性粒细胞，趋化单核细胞和多核粒细胞至炎症局部，并合成溶酶体酶；它是RA进展的促进因子，在RA患者的患病关节腔内被检出[6]。IL-1在RA的早期主要是帮助其细胞迁移和刺激内皮细胞产生相应的病理反应，诱导滑膜细胞和软骨细胞增殖并合成胶原酶和磷脂酶A等而产生关节炎[7]。所以，抑制IL-1β的合成，能阻止滑膜成纤维细胞的异常增殖，进而对RA产生治疗作用。RA的活跃期，TNF-α在其中起着重要作用[8]：①活化血管内皮细胞，促进内皮细胞黏附因子的表达，关节炎的过程中，白细胞通过与黏附分子作用被趋化至关节腔。②促使多形核细胞、结缔组织细胞产生多种小分子炎症介质。③作用于滑膜细胞、软骨细胞和破骨细胞，抑制糖蛋白的生成，促进蛋白的分解，同时产生胶原酶等蛋白酶，使骨钙被释放，引起骨和软骨被破坏并造成骨关节活动受限。同时，TNF-α可诱导IL-1等因子的合成，后者会反作用于TNF-α，增强TNF-α的活性，从而加剧关节组织的破坏[9]。故减少TNF-α的合成，也能阻止滑膜成纤维细胞的异常增殖，对RA产生治疗作用。
本研究结果显示，两组治疗6个月时血清IL-1β、TNF-α水平均比治疗前降低，而中药组降低尤其明显，说明MTX和中药可能是通过降低IL-1β、TNF-α的释放,抑制了滑膜成纤维细胞的过度增殖，并经细胞因子网络来发挥免疫调控而达到治疗RA的目的，而中药的这种作用更为明显。
3.2 风湿补益汤对RA患者T细胞免疫的影响
目前，RA被认为它是一种全身性免疫性疾病，细胞免疫和体液免疫紊乱是其重要的发病机制 [10]。
在RA患者中，其机体CD4+/CD8+值严重失衡，这种失衡主要由于CD4+细胞数目增加而CD8+细胞数目减少引起。同时这种变化伴随着CD4+功能增强，而CD8+功能降低[11]。CD4+细胞数目和功能的增强，使其对B细胞的辅助作用增强，而CD8+数目的减少和功能的降低，减弱了对B细胞的抑制作用，致使B细胞被活化，功能增强，产生大量的自身抗体(类风湿因子)及免疫球蛋白，形成免疫复合物并沉积于关节局部，日久则诱发滑膜炎[12]。
本研究发现，两组患者在治疗6个月时CD4+百分比、CD4+/CD8+比值较治疗前逐渐降低，而CD8+百分比逐渐升高(P<0.05),其中中药组的这种变化尤其明显，说明MTX和风湿补益汤均能改善RA患者的细胞免疫功能，而风湿补益汤的改善作用更大，其原因可能是风湿补益汤能有效的降低RA患者的CD4+细胞百分比，减弱CD4+功能，及增高CD8+百分比，增强CD8+功能，使CD4+/CD8+比值逐渐恢复正常，而发挥调节细胞免疫反应的作用，改善患者的关节肿胀、屈伸不良、晨僵等症状。
3.3 结论
风湿补益汤可能是通过抑制IL-1β、TNF-α的分泌以阻止滑膜成纤维细胞的过度增殖，及通过改善患者机体的T细胞亚群的失衡状态，调节细胞免疫反应来从而发挥免疫调控作用以实现治疗RA的目的。
参考文献
1 张春华.甲氨蝶呤与来氟米特治疗类风湿性关节炎的临床疗效和安全性研究[J].重庆医学,2015,91(4):511-513.
2 周萍,陈欧娜,苏咏梅,等.温经散寒通络汤联合针灸治疗类风湿性关节炎寒湿痹的临床研究[J].世界科学技术-中医药现代化,2014,76(4)：68-70.
3徐建红，刘维超.大活络胶囊结合小剂量激素合甲氨蝶呤治疗早期类风湿性关节炎的疗效观察[J].中国生化药物杂志，2014，63(9):825-826.，
4魏雪红,鲁亚玲,段梅欣,等.回医烙灸疗法配合护理干预对类风湿性关节炎患者疼痛及血清IL-2、TNF-α水平影响的研究[J].中国实用护理杂志,2014,30(34)：5-8.
5蒲卉明,赵凌艳,程建明,等.温针灸配合穴位注射鹿瓜多肽注射液治疗类风湿性关节炎的临床研究[J].世界中医药,2016,11(4):712-713.
6 陈开慧,李仁保,甘宇,等.艾灸治疗类风湿关节炎及其对血IL-6、CRP与RF水平的影响[J].国际检验医学杂志,2014,74(2):34-35.
7 彭江云,狄朋桃,方春凤,等.类风湿关节炎中医发病学初探[J].世界中西医结合杂志,2012,7(10):857-859.
8 田军伟,陶鹏飞.艾拉莫德联合甲氨蝶呤对类风湿性关节炎患者血清M-CSF、IL-6、IL-8及骨代谢的影响[J].海南医学,2017,28(3):416-417.
9吴素叶,薛阿利,赵朴,等.沙利度胺联合甲氨蝶呤对类风湿性关节炎患者外周血调节性T细胞及细胞因子IL－6表达的调节作用[J].中国生化药物杂志,2016,36(11):34-35.
10 朱惠雅,冯茜.类风湿性关节炎患者血清中类风湿性因子、抗CCP抗体、免疫球蛋白、细胞因子检测及临床意义[J].海南医学院学报,2016,22(24):62-63.
11龚建玲.Th细胞相关因子在类风湿关节炎中的检测意义[J].中国中医药科技,2014,97(z1):33-34.
12徐琦,王红梅,谭达全,等.类风湿性关节炎患者外周血T细胞亚群经麻黄加术汤干预前后变化的研究[J].湖南中医杂志,2014,30(11):721-723.
论文作者:周长芸,张蓓
论文发表刊物:《中国医学人文》2017年第7期
论文发表时间:2017/10/17
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