邹红敏 张景怡
(资中县疾病预防控制中心检验科 四川 资中 641200)
【摘要】目的:了解我县受东兴区霍乱疫情波及影响情况,以制定防控措施,防止疫情蔓延。方法:用碱性蛋白胨水增菌,碱性琼脂、四号琼脂、TCBS琼脂平板分离培养病原菌,霍乱弧菌生化鉴定管做生化鉴定,霍乱诊断血清鉴定菌群,用K-B氏法做药物敏感试验。结果:从一名未预防服药三岁女童直肠拭子、病家厕所粪水中分离出O139群霍乱弧菌,对常用抗生素四环素、红霉素等耐药,对诺氟沙星、环丙沙星等敏感。结论:该病例为东兴区霍乱疫情波及的带菌者。为避免漏检,对含菌量少的标本应进行第二次增菌。
【关键词】霍乱弧菌;O139群;带菌者
【中图分类号】R378.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2018)27-0095-02
2007年9月12日,我市东兴区发生一起农村举办丧葬宴而引发食源性O139群霍乱暴发流行[1],受此疫情波及,我疾控中心从一名未预防服药三岁女童直肠拭子、2份病家厕所粪水中分离出O139群霍乱弧菌。由于报告及时,处理得当,使疫情迅速得以控制,未出现二代病例和人员死亡,现报告如下。
1.流行病学概况
2007年9月12日,我市东兴区发生一起食源性霍乱暴发流行,在进行流行病学调查时发现我县有4名同时进餐人员。我疾控中心在接到通知后,迅速赶赴现场,进行流行病学调查。采集4名同时进餐人员直肠拭子(其中3人已进行预防性服药;1人家长认为孩子才3岁,且一直没有腹泻、腹痛、呕吐、发热等任何不适症状,不会感染霍乱,没给孩子服药),5名密切接触者直肠拭子,缸水2份,病家厕所粪水2份,门前泥土2份,餐具2份,进行病原菌分离鉴定。4名同时进餐人员和5名密切接触者均无腹泻、腹痛、呕吐、发热等任何不适症状。
2.检验方法
2.1 材料
碱性蛋白胨水、碱性琼脂、四号琼脂、TCBS琼脂、霍乱弧菌生化鉴定管(11种×20支)、氧化酶试剂均由杭州天和微生物试剂有限公司生产;粘丝试验,试剂现配;O1群霍乱弧菌诊断血清、O139群霍乱弧菌诊断血清均由兰州生物制品研究所生产;O1群霍乱弧菌检测试剂盒(胶体金法)、O139群霍乱弧菌检测试剂盒(胶体金法)均由北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司内蒙古生物试剂厂生产;药敏纸片由北京天坛药物生物技术开发公司生产。所有试剂均在有效期内。
2.2 霍乱弧菌检验
所有样本均按《霍乱诊断标准及处理原则GB 15984-1995》和《霍乱防治手册》(第五版)[2]进行霍乱弧菌检测。
2.2.1第一次增菌 将所有样本接种于碱性蛋白胨水,37℃,6~8h进行第一次增菌。
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2.2.2分离培养、第二次增菌和快诊试验 取表层增菌液分别划线接种于碱性琼脂、四号琼脂、TCBS琼脂,37℃,20~24h分离培养;接种碱性蛋白胨水,37℃,6~8h进行第二次增菌;同时用O1群、O139群霍乱弧菌检测试剂盒(胶体金法)做快诊试验。
2.2.3观察菌落特征、涂片染色、血清学试验、纯培养 挑取四号琼脂平板上2~4mm、微凸、圆形、中心黑色、光滑、湿润菌落;TCBS上深黄色、微凸、1~2mm、圆形、光滑、湿润、粘稠菌落进行涂片染色,与霍乱弧菌O1群、O139群诊断血清进行玻片凝集。挑取革兰氏阴性、与霍乱诊断血清凝集的单个典型菌落接种于普通营养琼脂斜面进行纯培养。
2.2.4氧化酶试验、血清学试验、粘丝试验、生化试验、药敏试验 取纯培养物做氧化酶试验、血清学试验和粘丝试验,将氧化酶阳性,粘丝试验阳性,与霍乱诊断血清凝集的纯培养物接种霍乱弧菌生化鉴定管,同时用改良K-B氏琼脂扩散法做药物敏感试验。
2.2.5第二次增菌后的培养物检验步骤同第一次增菌。
2.3 结果
2.3.1所有样本的第一次增菌培养物O1群、O139群霍乱弧菌检测试剂盒(胶体金法)快诊试验均为阴性,碱性琼脂、四号琼脂、TCBS琼脂平板上无典型菌落,不与霍乱弧菌O1群、O139群诊断血清凝集,未检出霍乱弧菌。
2.3.2一名同时进餐人员(三岁女童)的直肠拭子第二次增菌培养物、2份病家厕所粪水的第二次增菌培养物O1群、O139群霍乱弧菌检测试剂盒(胶体金法)快诊试验阳性,碱性琼脂、四号琼脂、TCBS琼脂平板上有典型霍乱弧菌菌落生长,不与O1群霍乱弧菌诊断血清凝集,与O139群霍乱弧菌诊断血清凝集,生理盐水对照不凝集。
2.3.3生化结果 氧化酶阳性,粘丝试验阳性,葡萄糖、VP、MR、蔗糖、甘露醇、赖氨酸阳性,靛基质、阿拉伯糖、肌醇、精氨酸阴性。
2.3.4结合血清学试验和生化结果,判定为O139群霍乱弧菌。与内江市疾病预防控制中心复核确认结果一致。
2.3.5药敏结果 对链霉素、新霉素、四环素、氯霉素、氨苄西林、红霉素、强力霉素耐药,对痢特灵中度敏感,对环丙沙星、阿米卡星、妥布霉素、诺氟沙星、复方新诺明敏感。
3.讨论
3.1 所有样本第一次增菌培养物均未检出霍乱弧菌,阳性标本是在第二次增菌后才分离出O139群霍乱弧菌,考虑与标本含菌量少有很大关系,因为该女童一直没有腹泻、腹痛、呕吐、发热等任何不适症状。提醒我们在以后的工作中为避免漏检,对含菌量少的标本(如带菌者、恢复期病人、服药后的标本)应进行二次增菌。
3.2 未服用预防药的分离出O139群霍乱弧菌的三岁女童进餐者。未分离出O139群霍乱弧菌的进餐者都按规定服用预防药物。说明预防服药在控制霍乱疫情的蔓延上有一定积极作用。同时也告诫我们在预防服药时应该加强宣传和技术指导,督促落实到位。
3.3 未预防服药者检出霍乱弧菌,已服药者未检出霍乱弧菌,提示我们为避免药物对检验结果的影响应尽量在用药前采集标本。
3.4 O139群霍乱带菌者和轻症病人远较典型病人为多[2],但本例带菌者只有三岁,实为罕见。
3.5 因受实验室条件和技术限制,所分离菌株未做霍乱弧菌毒力相关基因检测,也未与东兴区分离出的霍乱弧菌做同源性检测,是本次实验的缺陷。
【参考文献】
[1]李显勇,苏尊玮,王蜀.一起O139型霍乱暴发疫情的临床特征及流行病学调查[J].中国感染控制杂志,2008,7(5):320-322.
[2]肖东楼.霍乱防治手册[M].人民卫生出版社,2013.
作者简介:邹红敏(1971-),女,本科,副主任技师,从事微生物检验工作.
论文作者:邹红敏,张景怡
论文发表刊物:《医药前沿》2018年27期
论文发表时间:2018/11/21
标签:霍乱论文; 弧菌论文; 琼脂论文; 血清论文; 碱性论文; 带菌者论文; 东兴论文; 《医药前沿》2018年27期论文;