郑宏 袁瑛 王肇华 明湘虹
江苏省南通市第六人民医院 江苏南通226000
【摘要】目的：探讨T细胞斑点试验在结核性胸腔积液诊断中的应用价值。方法：选取从2014年1月至2014年12月期间在我院接受治疗的胸膜炎患者19例。入院后进行胸水常规、胸水ADA、胸水T细胞斑点试验、胸水病理检查，依据最终的临床诊断，评价分析胸腔积液T细胞斑点试验结果在诊断结核性胸膜炎及癌性胸腔积液中诊断中的应用价值。结果：19例胸膜炎患者中，经临床诊断为结核性胸膜炎9例，其中胸水T细胞斑点试验有反应性8例，其中抗原A斑点数在12~>200，抗原B斑点数在20~>210，1例无反应性。 另10例胸膜炎患者经病理诊断为癌性胸腔积液，其中9例胸水中找到腺癌细胞，另1例为胸膜间皮瘤，10例中有2例胸水T-SPOT.TB有反应性，另8例胸水T细胞斑点试验无反应性。结论：T细胞斑点试验的检查对诊断结核性胸膜炎，鉴别癌性胸腔积液方面有一定的价值，但因本研究数据非常有限，样本量太小，还不能对胸水T细胞斑点试验结果的特异性、敏感性、阳性预测值、阴性预测值进行诊断价值的评价。
【关键词】T细胞斑点试验；结核性胸腔积液；诊断；应用价值
结核性胸膜炎是临床上的常见肺外结核疾病，该病具有较高的发病率，仅次于淋巴结核。准确的诊断是患者治疗的基础。近年来，针式胸膜活检或胸腔镜活检已经证实80%结核性胸膜炎患者胸膜有典型的结核病理改变，因此，认为结核分枝杆菌直接侵及胸膜是结核性胸膜炎的主要发病机制[1]。但以往的镜检效果不佳，并未能在临床上进行推广使用。随着医学技术的不断发展，T细胞斑点试验在结合性胸腔积液诊断逐渐占据重要地位，在本次调查中，笔者选取2014年1月至2014年12月期间在我院进行诊断的19例结核性胸膜炎患者作为调查对象，分析T细胞斑点试验在结核性胸腔积液诊断中的应用价值。详情如下所示：
1资料与方法
1.1临床资料
选取2014年1月至2014年12月期间在我院接受治疗的胸膜炎患者19例，其中男9例、女10例，患者年龄为24~81岁，平均（
）岁。患者对于本次调查情况知情无异议，原因积极配合。
1.2方法
入院后进行胸水常规、胸水ADA、胸水T细胞斑点试验、胸水病理检查。胸水T-SPOT.TB的检测方法：（1）采集胸水于50ml无菌离心管中，50ml胸水中需加入0.2ml肝素钠抗凝剂，并立即混匀。样本采集后4小时内必须送至实验室，常温保存15-25?C，不可冷冻或冷藏。（2）过滤胸水：将胸水依次分别经70?m和40?m孔径的滤膜过滤至50ml无菌离心管中。（3）离心滤液：将装有滤液的50ml离心管置于配有相应转子的离心机中，700g离心7min。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆（4）倒掉上清，加8mlRPMI1640重悬沉淀，将该悬液加至4mlFicoll液面上，1000g，18 ?C，离心22min。（5）吸取PBMCs至15ml无菌离心管中，加RPMI1640培养基至10ml，18-25 ?C600g离心7min。（6）弃去上清，沉淀用1ml RPMI1640或AIMV培养基重悬，加AIMV培养基至10ml，18-25 ?C350g7min。（7）弃去上清，沉淀用0.5mlAIMV培养基重悬。（8）细胞计数 。①显微镜计数或血细胞计数仪计数活的PBMCs细胞；②用AIMV培养基配制25万细胞/100?l的标准溶液。（9）加样、孵育过夜。①每孔加相对应的试剂50?l；②每孔加已配制好的样本100?l；③37 ?C5%的CO2培养箱孵育16-20h。（10）显色。①用PBS缓冲液洗涤每个反应孔4遍，每孔加50?l标记抗体工作液，2-8 ?C冰箱孵育1h用PBS缓冲液洗涤每个反应孔4遍拍干；②每孔加50?l显色底物溶液，室温放置7min；③用蒸馏水洗涤每个反应孔终止反应，干燥斑点计数。
1.3诊断标准
根据抗原A或/和抗原B孔的反应判断结果：检测结果为“有反应性”，参照以下标准：空白对照孔斑点数0-5个时：（抗原A或B孔的斑点数）-（空白对照孔斑点数）≥6，空白对照孔斑点数6-10个时：（抗原A或B孔的斑点数）>2*（空白对照孔斑点数），如果上述标准不符合且阳性质控对照孔正常时检测结果为“无反应性”。
2结果
19例胸膜炎患者中，经临床诊断为结核性胸膜炎9例，其中胸水T细胞斑点试验有反应性8例，其中抗原A斑点数在12~>200，抗原B斑点数在20~>210，1例无反应性。 另10例胸膜炎患者经病理诊断为癌性胸腔积液，其中9例胸水中找到腺癌细胞，另1例为胸膜间皮瘤，10例中有2例胸水T细胞斑点试验有反应性，另8例胸水T细胞斑点试验无反应性。
3讨论
病原学或组织学阳性是诊断结核性胸膜炎的金标准，但浆膜腔积液结核分枝杆菌涂片、培养阳性率均低，且培养所需要的时间长，而浆膜腔组织病理学检查如胸膜活检损伤较大，病人接受程度低，不能常规开展[2]。本研究探讨胸水T细胞斑点试验在结核性胸膜炎中的诊断价值，从19例胸水T细胞斑点试验结果来看，T细胞斑点试验对诊断结核性胸膜炎，鉴别癌性胸腔积液方面有一定的价值，但因本研究数据非常有限，样本量太小，还不能对胸水T细胞斑点试验结果的特异性、敏感性、阳性预测值、阴性预测值进行诊断价值的评价。按免疫病理学的隔室化反应，结核性胸膜炎患者的浆膜腔积液中单个核细胞中MTB效应T细胞比例增加，从而提高了浆膜腔积液T细胞斑点试验的敏感性，本研究从T细胞斑点试验的结果来看，结核性胸膜炎胸水T细胞斑点试验斑点数明显高于外周血，但本研究检测结果的判读以外周血T细胞斑点试验的标准判读，是否合适？结核性浆膜腔积液患者浆膜腔积液的T细胞斑点试验以多少为界值是诊断结核性浆膜腔积液的最佳价值还有待于进一步数据的收集来确定[3]。
参考文献
[1] 刘佳庆,张立,冯爽等.液相芯片技术检测多种细胞因子对结核性胸腔积液诊断价值的评估[J].中华检验医学杂志,2015,(8):562-566.
[2] 杜岩青,冯爽,冯冉冉等.T细胞斑点试验技术在结核性胸膜炎诊断中的价值[J].检验医学,2012,27(12):1070-1073.
[3] 郑春华,王立,金燕等.结核感染T细胞斑点试验诊断结核性胸腔积液的临床分析[J].中华医院感染学杂志,2013,23(16):4078-4080.
论文作者:郑宏 袁瑛 王肇华 明湘虹
论文发表刊物:《医师在线》2015年12月第24期供稿
论文发表时间:2016/4/22
标签：斑点论文; 胸膜炎论文; 细胞论文; 胸腔论文; 结核性论文; 积液论文; 浆膜论文; 《医师在线》2015年12月第24期供稿论文;